人类TAP2基因克隆及真核表达质粒的构建

抗原处理相关转运体(transporter associated with antigen processing,TAP)属于ABC(ATP-binding cassette)超家族成员,由TAP1(75 kD)和TAP2(71 kD)形成异二聚体,负责抗原肽从胞浆到内质网的转运,在MHC Ⅰ类分子的抗原处理及提呈过程中发挥重要作用.     

细胞内钙离子螯合剂抑制HSV-1诱导Hela细胞的凋亡作用

目的：探讨HSV-1在诱导Hela细胞凋亡中，细胞内游离钙浓度的变化及钙离子螯合剂对HSV-1诱导Hela细胞凋亡的抑制作用。方法：HSV-1感染Hela细胞后，用扫描电镜及透射电镜观察凋亡情况。用荧光探针标记细胞内游离Ca^2 ，在不同时间观察细胞内游离Ca^2 浓度的变化。结果：HSV-1感染Hela细胞后，出现了典型的凋亡形态学变化。细胞内游离Ca^2 浓度在HSV-1感染Hela细胞后12h达高峰；典型的凋亡形态学变化出现在HSV-1感染Hela细胞后24h。细胞内Ca^2 螯合剂能显著抑制HSV-1诱导的Hela细胞凋亡。结论：细胞内游离Ca^2 在HSV-1诱导的Hela细胞凋亡过程中，具有重要作用，此实验结果为临床治疗相关疾病提供了有用的线索。     

TAP基因转染提高其在肿瘤细胞系的表达

目的　筛选TAP1、TAP2表达下调的肿瘤细胞系 ,将TAP1、TAP2基因分别转染其表达下调的肿瘤细胞系 ,检测基因转染后的mRNA表达水平。方法　用RT -PCR方法检测肺腺癌细胞系Anip 973,AGZY83a ,LH - 7,BE - 1,胃癌细胞系BGC - 82 3TAP1及TAP2mRNA水平 ,筛选TAP1、TAP2表达下调的肿瘤细胞系。用脂质体法 (LipofectaminTM2 0 0 0 )将TAP1、TAP2分别转染人肺腺癌细胞系Anip 973,经G4 18筛选 4～ 6周 ,通过RT -PCR检测TAP1及TAP2的表达。结果　Anip 973,AGZY 83a细胞TAP1、TAP2mRNA表达下调 ,LH - 7,BE - 1TAP1PCR产物均为 2条带 ,BE - 1TAP 2mRNA表达下调 ,而LH - 7与B细胞相同。转染后的Anip 973细胞TAP1、TAP2的mRNA表达明显增加。结论　基因转染可恢复肿瘤细胞TAP1及TAP2的表达 ,为增强MHCⅠ类分子提呈肿瘤抗原奠定了基础     

导入TAP基因上调其在肺腺癌细胞系的表达

目的　克隆TAP1及TAP2基因 ,分别转染TAP1及TAP2表达下调的人肺腺癌细胞系Anip973,以提高其表达水平 ,从而增强肿瘤细胞的抗原提呈能力。方法　采用RT PCR方法自EBV刺激的B LCLs克隆TAP1及TAP2基因 ,与pcDNA3.1 V5 His TOPOTAExpressionvector连接 ,构建真核细胞表达载体 ,脂质体法 (LipofectamineTM2 0 0 0 )转染人肺腺癌细胞系Anip973,经G4 1 8筛选 4～ 6周 ,通过RT PCR检测TAP1及TAP2的表达。结果　经测序确认已成功克隆人TAP1及TAP2基因 ,建立稳定表达TAP1或TAP2的细胞系 ,经RT PCR分析 ,Anip973细胞TAP1、TAP2的mRNA表达明显增加。结论　基因转染可恢复肿瘤细胞TAP1及TAP2的表达 ,为增强MHCⅠ类分子提呈肿瘤抗原奠定了基础     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂联合其它抗肿瘤药物治疗肿瘤的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是P13K／Akt／mTOR信号通路下游的重要效应蛋白,其底物主要控制与细胞生长和增殖密切相关的蛋白质的合成。mTOR在多种恶性肿瘤中表达异常,是肿瘤靶向治疗的新靶点。临床前研究和Ⅰ、Ⅱ期临床实验表明,以雷帕霉素及其衍生物为代表的mTOR抑制剂和其它传统抗肿瘤药物的联合应用取得了良好的的抗肿瘤效果,为肿瘤的靶向治疗提供了新的方向。     

胃癌合并多发性肝转移 11例外科治疗

目的探讨胃癌并多发性肝转移外科治疗的疗效.方法回顾性分析胃癌并多发性肝转移 11例的临床资料.结果全部病例均行相对根治性远端胃大部切除并肝动脉化疗栓塞术.无手术死亡.术后中位生存时间 12.5个月. 8例死于肝转移, 3例死于腹膜转移.结论对加以选择的胃癌并多发性肝转移患者实施相对根治性胃切除并肝动脉化疗栓塞术可延长生存期.     

磷酸化4E—BPl与恶性肿瘤研究进展

4E—BPl是真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）的特异性抑制物,近年研究显示,磷酸化形式的4E—BPl（P-4E．BPl）在多种恶性肿瘤如乳腺癌、宫颈癌、甲状腺、前列腺癌、大肠癌等中存在过表达,并且其表达与肿瘤的大小、侵袭、转移能力、预后等临床病理特征密切相关。因此,阐明P-4E—BPl的表达与肿瘤的生物学行为将有助于全面了解恶性肿瘤的发生、发展、侵袭及转移机制,同时对指导临床诊断和治疗,判断预后有重大意义。更重要的是,P-4E—BPl有可能成为治疗肿瘤的新靶点,为临床治疗肿瘤提供新思路。     

人类TAP1基因克隆及表达载体的构建

抗原处理相关转运体(TAP)属于ABC(ATP-himding cassette)转运体超家族B亚家族。人类TAP基因位于6号染色体上的MHC-11类基因区．其编码的TAP1和TAP2分子．分别由748和686个氨基酸残基所组成，两者可形成异源二聚体参与肽类的转运过程．在MHC-I类分子介导的抗原递呈途径中起着重要作用^[1,2]。因此，TAP的异常将严重影响抗原     

亚毒性剂量雷帕霉素增强低浓度奥沙利铂体外抑制结肠癌细胞增殖

目的观察亚毒性剂量雷帕霉素（RAPA）与低浓度奥沙利铂（L-OHP）联合用药对人结肠癌HCT116细胞的杀伤效果及凋亡的影响。方法应用MTr法检测L-OHP、RAPA单药或联合用药对细胞增殖的抑制作用;CalcuSyn2．0软件计算药物半数抑制浓度（IC50）及L-OHP和RAPA联合用药指数（cI）;流式细胞术和Western印迹法检测药物对细胞凋亡的影响。结果L-OHP和RAPA对HCT116细胞的增殖抑制作用均呈浓度依赖性,二者的48小时单药IC50分别为（8．35±0．78）μM（r=0．99）和（223．44±38．10）nM（r=0．94）。10nM（IC20）的RAPA与1μM（IC20）或2．5μM（IC30）的L-OHP联合应用后cI值分别为0．52和0．72。1μML—OHP与10nMRAPA联合用药组的细胞增殖抑制率为31％,约为同浓度单药组的2倍（P〈0．05）。10nMRAPA处理24小时的凋亡率与对照组无差别,联合用药的凋亡率高于L-OHP单药组。联合用药48小时后剪切型PARP（poly ADP-ribose polymerase）蛋白表达水平高于单药组。结论亚毒性剂量的RAPA和低浓度L-OHP组合协同抑制HCTl16细胞的增殖,其机制与增强诱导细胞凋亡相关。     

基因表达谱芯片在人直肠腺癌相关基因筛选中的应用研究

[目的]用基因表达谱芯片研究直肠腺癌和正常直肠黏膜基因表达差异，筛选直肠腺癌相关基因。[方法]分别抽提直肠腺癌和正常直肠黏膜的总RNA；通过逆转录方法将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两组cDNA上，制成探针；利用这种cDNA探针与含有4096条人类基因PCR产物的表达谱芯片进行杂交。扫描芯片荧光信号图像。计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因。[结果]通过基因芯片筛选，在4096条基因中，直肠腺癌和正常直肠黏膜差异表达显著的基因共有121条(2．95％)，其中上调的85条（2．075％)，下调的36条（0．879％)，上调和下调的基因中各有2条为新基因。[结论]直肠腺癌基因差异表达谱的分析可为直肠癌的诊断、治疗和预防提供新的思路和线索。