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1.
自由基损伤和β2糖蛋白1在自身免疫疾病中的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究被自由基氧化修饰的β2糖蛋白1(β2GPl)在自身免疫疾病中自身抗体产生中的作用。方法 采用高氯酸沉淀,两步肝素连接的交联琼脂糖凝胶层析结合葡聚糖凝胶G—100分离纯化大鼠β2GP1;应用自由基氧化修饰大鼠β2GP1;氧化修饰的β2GP1(oxβ2GPl)、β2GPl分别加与不加心磷脂(CL)及CL免疫大鼠,ELISA方法检测免疫大鼠血清中抗β2GP1抗体和抗心磷脂抗体(ACA)。结果 两步亲和层析结合凝胶过滤层析有效地分离纯化了大鼠β2GPl,蛋白纯度达90.78%;通过碳基含量测定证实了自由基对β2GP1的氧化修饰;oxβ2GGP1加CL、β2GP1加CL、oxβ2GPl免疫组与空白对照组、实验对照组比较ACA水平有显著升高(P<0.001),oxβ2GP1加CL免疫组与β2GPl加CL免疫组比较ACA水平差异有显著性(P<0.05);oxβ2GP1免疫组与oxβ2GPl加CL免疫组比较ACA水平差异不显著(P>0.05);oxβ2GPl加CL、oxβ2GPl免疫组与对照组比较,抗oxβ2GP1抗体水平有显著升高(P<0.05)。结论 两步肝素连接的交联琼脂糖凝胶层析结合葡聚糖凝胶G—100能有效地分离纯化β2GPl;oxβ2GPl诱导了ACA和抗oxβ2GPl抗体的产生;β2GPl可能是自身免疫疾病发生过程重要的辅助因子或靶抗原,而自由基对β2GP1损伤可能是自身免疫疾病发病机制中的一个重要病理过程。 相似文献
2.
目的:观察体外IL-4和IFN-γ对^3H—尿嘧啶(^3H—U)标记的弓形虫(Toxoplasma gondii,TG)在小鼠腹腔巨噬细胞(Mouse peritoneal macrophage MPM)内增殖的影响。方法:应用^3H—U标记的TG在MPM内的增殖实验及^125I—UdR标记的细胞毒实验。结果:单独应用IL-4预先处理MPM,可部分抑制TG在MPM内的增殖,增加IL-4剂量抑制作用末见明显增加;IL-4可增加IFN-γ诱导的MPM抗TG效应,但无协同作用。结论:表明IL-4对小鼠MPM抗TG作用与IFN—γ不同;抗TNF—α中和抗体对IL-4诱导的TG在细胞内增殖抑制作用无明显影响。 相似文献
3.
流式细胞术检测细胞毒方法的建立 总被引:7,自引:3,他引:7
目的:建立一种用流式细胞仪测定细胞介导细胞毒活性的方法。方法:用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记靶细胞,再用碘化丙碇(PI)标记DNA筛选细胞膜已破坏的靶细胞。效靶比为100:1—6.25:1,共孵育时间为1-6小时,流式细胞仪收集1000个靶细胞并测定被杀细胞的百分率。结果:CFSE是合适的标记靶细胞的荧光染料,18小时后也能很好地区分效靶细胞;靶细胞的自然死亡率低于5%;杀伤百分率随着效靶比和共孵育时间的增加而增加。最佳效靶比为50:1—25:1,共孵育时间为2—4小时。结论:CFSE/PI双荧光染料标记的流式细胞分析检测细胞毒具有多个优点:避免放射性试剂的应用,敏感性增强,单细胞水平的分析。 相似文献
4.
人白细胞介素18(hIL-18)的纯化及生物学活性的鉴定 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:在大肠杆菌中高效表达重组人IL-18(rhIL-18)蛋白,制备具有高纯度、高活性的rhIL-18。方法:用IFTG诱导重组蛋白表达载体pKK223-3/hIL-18进行蛋白表达;菌体经超声破碎分离包含体,并对包含体进行洗涤、变性和复性处理,用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱纯化复性的rhIL-18;以人外周血单核淋巴细胞,通过T细胞增殖实验、^125I-UdR标记的细胞毒实验、ELISA方法检测细胞因子的产生量等方法,测定rhIL-18的生物学活性。结果:在大肠杆菌中成功地诱导、表达了rhIL-18,SDS-PAGE凝胶电泳分离显示在分子量大约18.3kD处有一诱导蛋白带,Western blot证明表达产物与抗IL-18单克隆抗体有特异性免疫反应;表达产物经纯化后纯度达94%;表达的rhIL-18蛋白具有促进T细胞增殖、增强NK细胞细胞毒作用及诱导外周血单核淋巴细胞合成IFN-γ的能力,基本上具有天然IL-18相同的生物学活性。结论:为rhIL-18的获得及为进一步研究其生物学功能提供了一定的条件,并为将rhIL-18用于肿瘤的免疫生物治疗奠定了基础。 相似文献
5.
目的应用rhIL-18在体外培养系统(Coculture system in vitro,CCs)中诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte,CTL),探讨IFN-γ在rhIL-18诱导的肿瘤特异性CTL产生过程及杀伤效应中的作用.方法采用Stem SepTM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及DCs细胞,流式细胞仪分析细胞表型,125Ⅰ-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性,ELISA方法检测IFN-γ蛋白产生量,RT-PCR检测IFN-γ mRNA表达含量.结果在肿瘤抗原存在的条件下,IL-18在CCs中能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应;IL-18能够在肿瘤抗原刺激的CCs中诱导IFN-γ mRNA的表达及IFN-γ蛋白的产生,并与IL-18的含量呈剂量依赖关系,在rhIL-18含量为100 ng时,培养上清中IFN-γ为4 410±210 pg/ml.但加入抗IFN-γ抗体对rhIL-18诱导的肿瘤特异性CTL产生过程无明显影响,不能抑制IL-18诱导的这种肿瘤特异性CTL的杀伤效应.结论IL-18能够在肿瘤抗原刺激的CCs中有效地诱导CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应,并诱导IFN-γ的产生,但其诱导肿瘤特异性CTL的产生过程及杀伤效应与IFN-γ无关. 相似文献
6.
目的:探讨重组人β2糖蛋白1第一结构域(hrβ2GPⅠDⅠ)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法:应用hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理前后的APS患者血清分别与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,细胞EL/SA和RT-PCR方法分析处理前后HUVEC表达ICAM-1、MCP-1的变化。结果:hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理后的APS患者血清较处理前相比,与其孵育的HUVEC表达ICAM-1、MCP-1在蛋白和mRNA水平均明显降低。结论:邮:GPⅠDⅠ可中和APS患者血清中的大部分致病性抗β2GPⅠ抗体(anti-β2 GPⅠ)。 相似文献
7.
IL-18在体外培养系统中诱导肿瘤快速杀伤效应及肿瘤特异性CTL 总被引:3,自引:0,他引:3
目的应用rhlL-18在体外培养系统(Coculture system in vitro,CCs)中诱导快速肿瘤杀伤效应及诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte,CTL)。方法 采用StemSep^TM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及树突细胞(DCs),流式细胞仪分析细胞表型,125I-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性,ELISA方法检测IFN-7的产生量。结果 在CCs中,rhIL-18诱导出快速肿瘤杀伤效应,这种杀伤效应无抗原特异性、不受MHC限制,DCs和T细胞的存在与否对其无明显影响。在同一培养系统中,肿瘤抗原存在的条件下,96h后,rhIL-18能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应。结论 rhIL-18能够在体外培养系统中相继诱导肿瘤快速杀伤效应及肿瘤特异性CTL。 相似文献
8.
为进一步研究门奇静脉断流手术前、后血液动力学的变化,我们采用吲哚氰绿负荷试验KICG的方法,对门奇静脉断流手术的患者,分别进行了手术前、后KICG、HBF的测定,并对相互间的关系进行了探讨。结果表明:门奇静脉断流手术前、后K1CG无显著差异(P>0.05);门奇静脉断流手术前、后HBF无明显的变化。K1CG与HBF呈正相关系。说明门奇静脉断流手术对肝机能和肝血流量的影响不大 相似文献
9.
目的研究小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者外周血中CXCL12及其受体CXCR4的表达情况,探讨CXCL12/CXCR4与SCLC发生和发展之间的关系。方法采用ELISA、real-time PCR和Westernblot方法,检测CXCL12与CXCR4在30例局限期(Limited stage disease,LD)SCLC患者、32例扩散期(Expensive stage disease,ED)SCLC患者和10例良性肺部肿瘤患者(对照组,Control)中的转录水平和表达水平,分析CXCL12、CXCR4与SCLC患者临床病理等指标之间的关系。结果 CXCL12、CXCR4在SCLC患者组织中均高表达,其中扩散期患者CXCL12、CXCR4表达平略高于局限期患者组。扩散期患者外周血中CXCL12表达高于其在局限期患者中的水平,二者均高于对照组。血清中CXCL12水平与患者的性别和年龄无关(P0.05),而与肿瘤的大小及淋巴结转移明显相关(P0.01)。结论 CXCL12/CXCR4可能直接或间接参与对SCLC发生和发展的调控。 相似文献
10.