双向电泳分析二烯丙基二硫诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异

目的 以二烯丙基二硫(DADS)诱导人急性早幼粒细胞性白血病HL60细胞分化为模型，利用双向凝胶电泳(2-DE)技术分析比较DADS诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异。方法 细胞形态学观察与NBT还原反应结合验证HL60细胞的分化；用双向电泳技术分析蛋白表达差异。结果 分化后细胞形态发生明显变化，细胞核变小；NBT还原能力明显增强。双向电泳技术分析筛选了32个差异点。结论 双向电泳技术可直接反映细胞蛋白表达的变化，DADS诱导HL60细胞分化后导致部分蛋白的表达增加和降低。     

人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质双向凝胶电泳分析

目的：研究人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质表达特征。方法：抽提鼻咽癌细胞系HONE1总蛋白,双向凝胶电泳（2－DE）分离、银杂显色,用凝胶成像仪和PDQUEST软件获取HONE1总蛋白的2－DE图像;根据获得的2－DE凝胶图像,从胶上切取分辨良好、染色较浓的蛋白质点,用胰蛋白酶原位水解,所获酶解肽段经基质辅助激光解吸飞行的时间质谱（MALDI－TOF－MS）测定Mr;以测得肽段Mr为肽质量指纹（PMF）,通过Pepldent软件搜索SWISS－PROT和TrEMBL数据库而识别该点对应的蛋白质。结果：建立了双向凝胶电泳分离总蛋白、质谱鉴定银染蛋白质点的方法,并鉴定出人鼻咽癌细胞系HONE1中表达较强的10个点相应的蛋白质。 结论：本研究为建立人鼻咽癌细胞HONE1的2－DE参考图和蛋白质数据库提供了有用的基础性研究资料,为进一步识别鼻咽癌特异性的蛋白质奠定了实验基础。     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞分化的差异蛋白质分析

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞分化过程中蛋白质的差异表达。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离DADS处理前后人胃癌MGC803细胞总蛋白,凝胶经过银染后用PDQuest软件进行分析,差异蛋白质点经胶内原位酶解,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定肽质量指纹图(PMF),将所得的数据进行生物信息学处理。结果 DADS处理MGC803细胞前后的总蛋白质的双向电泳银染图谱,经扫描成像及PDQuest软件分析,对照组与处理组蛋白质点与平均匹配率分别为(576±14)个和(583±4)个与76%和70%,421个匹配,200个未被匹配。经相关数据库查询,在初步鉴定的差异蛋白质点中,发现24个与细胞分化、肿瘤转移、细胞凋亡、细胞周期、细胞免疫及代谢等相关的蛋白质,如gastric mucin、nM23、CDC2、uPAR、LIMK、RORα、MHC DR-beta-1 chain、TCR等,这些蛋白质可能在胃癌的发生发展中起着潜在的作用。结论 DADS可能通过多种途径诱导MGC803细胞分化。蛋白质组差异表达的初步分析为进一步研究胃癌分化的相关蛋白质及标记物奠定一定基础。     

生物组织膜细胞色素C电极的研究

本文以猪肾组织膜偶合氧电极制成了生物组织膜细胞色素C电极,测试了电极的响应特性,在0.01～0.227mg/ml细胞色素C浓度范围内,该电极的动力学响应与细胞色素C浓度的对数间呈线性关系,相关系数为-0.9949。研究了缓冲剂、pH条件、温度、切片厚度和防腐剂等因素对电极性能的影响,并试验了组织膜的有效活性周期,采用动力学方法测定了一些样品的平均回收率为98.8%,标准偏差为3.4%。     

动物组织膜L-维生素C电极的研究

本文以猪肝组织切片偶合氧电极制成了维生素C生物电极。测试了电极的响应特性,当Cu²⁺)离子存在下,在21.14～352.3μg/ml的维生素C浓度范围,电极的动力学响应与维生素C浓度的对数呈线性关系。研究了激活剂的浓度、缓冲介质、温度等因素对电极性能的影响。测得该条件下酶促反应的米氏常数8.0×10^-4mol/L。将电极用于药物中Vc含量分析,结果令人满意。     

双向凝胶电泳—飞行时间质谱法分析人肺鳞细胞NCI—H520蛋白质组成分

目的：建立和优化肿瘤蛋白质组研究的方法系统,并分析人肺鳞癌细胞蛋白质组。方法：用固相 ｐＨ梯度双向凝胶电泳分离人肺鳞癌细胞系ＮＣＩ－Ｈ５２０总蛋白,银染显色,ＰＤＱｕｅｓｔ ２ＤＥ软件分析,对部分蛋白质 点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（ｍａｔｒｉｘ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｌａｓｅｒ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ ｏｆ　ｆｌｙｉｎｇ　ｍａｓｓ　 ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ, ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用 ＰｅｐｔＩｄｅｎｔ软件查询 ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ数据库。结果：获得了分辨 率和重复性均较好的双向电泳银染图谱,图像分析探测到３块胶的平均蛋白质点数为（１１４６±１１６）,平均匹配的点 数为（８５１±９５）,匹配率达 ７３． ７％, ３ 块胶在蛋白质点位置上具有较好的重复性, ＩＥＦ方向的平均偏差为（１． ５２± ０．２２）ｍｍ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方向的平均偏差为（１．９７ ± ０．１３）ｍｍ。随机取６０个蛋白质点进行胶内原位酶解－质谱指纹图 分析得到了５４个蛋白质点的肽质指纹图,查询数据库初步鉴定了４４个蛋白质,其中部分是与细胞周期有关的蛋 白,部分是与信号传导有关的蛋白,部分     

双向凝胶电泳-飞行时间质谱法分析人肺鳞癌细胞NCI-H520蛋白质组成分

目的：建立和优化肿瘤蛋白质组研究的方法系统,并分析人肺鳞癌细胞蛋白质组。方法：用固相 pH梯度双向凝胶电泳分离人肺鳞癌细胞系 NCI H520总蛋白,银染显色, PDQuest 2DE软件分析,对部分蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 ( matrix assisted laser desorption/ionization time of flying mass spectrometry, MALDI TOF MS) 测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用 PeptIdent软件查询 SWISS PROT数据库。结果：获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱,图像分析探测到 3块胶的平均蛋白质点数为 (1146± 116),平均匹配的点数为 (851± 95),匹配率达 73.7％, 3块胶在蛋白质点位置上具有较好的重复性, IEF方向的平均偏差为 (1.52± 0.22)mm, SDS PAGE方向的平均偏差为 (1.97± 0.13) mm。随机取 60个蛋白质点进行胶内原位酶解 - 质谱指纹图分析得到了 54个蛋白质点的肽质指纹图,查询数据库初步鉴定了 44个蛋白质,其中部分是与细胞周期有关的蛋白,部分是与信号传导有关的蛋白,部分是与癌基因相关的蛋白。结论：通过该研究建立了一套分辨率和重复性均较好的固向 pH梯度双向凝胶电泳分离细胞总蛋白和银染胶内原位酶解后 MALDI TOF MS肽质指纹图分析鉴定方法。通过该方法系统分析人肺鳞癌细胞 NCI H520蛋白质组成分而获得的资料将有益于人肺鳞癌细胞蛋白质组数据库的建立,从而为肺鳞癌的诊断、预防和治疗提供依据。