1例中间型β-地中海贫血的临床诊断和基因检测

目的通过回顾性分析1例中间型β-地中海贫血（地贫）的诊断及基因检测流程,总结中间型地贫的诊断策略。方法分析1例β-地贫合并α-地贫基因型患儿的临床表现,通过地贫基因多重PCR检测及DNA序列测定明确诊断,结合相关文献复习,探讨影响β-地贫表现型的基因因素。结果该地贫患儿基因型为B珠蛋白基因41／42突变的杂合予合并仅仅仅anti3.7基因杂合子。结论中间型地贫的诊断,需要临床表现与基因病变相一致,多重PCR结合DNA序列测定等方法可确诊罕见型基因突变。     

重型β地中海贫血患儿群体反应性抗体检测及临床意义

目的采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测重型β地中海贫血患儿的群体反应性抗体（panel reactive antibodies,PRA）,探讨反复输血的地中海贫血患儿体液致敏水平及其临床意义。方法随机选择在中山大学附属第二医院儿科临床确诊为重型β地中海贫血的患儿,共计15例,男性患儿9例,女性6例;年龄为（6.15±4.01）岁。抽取外周血3ml,离心分离血清,依据ELISA原理,采用美国One Lambda公司提供的莱姆德混合抗原板（LATM）和莱姆德抗原板（LAT）检测本组患儿的PRA水平及其特异性。结果本组15例血液标本中,检出PRA呈阳性标本6例（PRA阳性组）,阳性检出率为40%,PRA强度为14%-75%,中位PRA强度为47.5%。PRA阳性组的输血总次数高于检测PRA呈阴性的9例标本（PRA阴性组）,两组比较,差异有极显著意义（P〈0.01）。PRA阳性组患儿的年龄、接受输血总时间高于PRA阴性组,两组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。此两组的输血开始时间比较,差异无显著意义（P〉0.05）。本研究的斯皮尔曼（Spearman）等级相关分析结果显示,PRA定性、PRA强度与输血总次数、患儿年龄、接受输血总时间呈正相关（P〈0.05）;与输血开始时间无相关关系（P〉0.05）。结论反复输血的重型β地中海贫血患儿PRA阳性率及强度较高;输血总次数越多、年龄越大、接受输血总时间越长的患儿,出现PRA呈阳性的几率越高,出现PRA强度高的几率越高;PRA可能是导致β地中海贫血患儿造血干细胞移植（HSCT）植入率低的原因之一。     

阿霉素对K562细胞凋亡及FAK mRNA的影响

目的 探讨阿霉素体外作用于K562细胞后,观察其对细胞增殖的影响,促进细胞凋亡情况,以及调节细胞周期和粘着斑激酶(FAK) mRNA基因,进一步探讨通过调控FAK表达,研究抗白血病的作用机制.方法 应用细胞增殖实验(CCK8法)观察不同浓度阿霉素作用不同时间对K562细胞增殖的影响,应用流式细胞仪观察不同浓度阿霉素对K562细胞细胞凋亡,细胞周期的影响,应用RT-PCR和Western blot技术检测不同浓度阿霉素作用对K562细胞36 h后FAK mRNA以及蛋白表达水平的变化.结果 随着阿霉素浓度增加及作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高,同一时间不同浓度之间比较,或者同一浓度不同时间组之间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);阿霉素能引起K562细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率也逐渐增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);阿霉素能引起K562细胞周期阻滞,多停留在S期;阿霉素能引起K562细胞FAK mRNA表达显著降低.阿霉素能引起K562细胞FAK蛋白表达水平的降低.结论 阿霉素抑制分裂期细胞的增殖,诱导细胞凋亡增加,对细胞FAK基因和蛋白水平均显著下调,为进一步研究FAK基因表达的调控与肿瘤细胞凋亡的分子机制提供了实验基础.     

骨髓间充质干细胞在致敏小鼠体内示踪归巢的实验研究

 【目的】了解骨髓间充质干细胞在以异基因脾细胞输注致敏小鼠体内的归巢情况。【方法】正常同种异基因小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及鉴定后,体外予经羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯荧光染料标志,经尾静脉注射到致敏组和非致敏组小鼠体内（每组10只）,在6h、24h和48h处死动物,分别应用冰冻切片和流式检测方法了解骨髓间充质干细胞在各个脏器的分布情况。【结果】冰冻切片和流式检测结果均表明骨髓间充质干细胞在致敏小鼠体内迅速和持久在脾,肝脏聚集,而非致敏动物却没有明显聚集到肝脾等脏器,却是最终归巢到了骨髓。其中流式定量结果表明：6h时致敏小鼠脾脏荧光阳性细胞为（3.78±0.66）％,与同期正常小鼠脾脏结果比较P ＜0.05,有统计学意义;而在48h时致敏小鼠骨髓荧光阳性细胞为（0.43±0.35）％,同期正常小鼠骨髓为（5.40±1.58）％,两者比较 P ＜0.05,有统计学意义。【结论】应用异基因脾细胞致敏的小鼠体内肝脾等免疫脏器明显受到致敏影响,其对骨髓间充质干细胞体内归巢的定位具有很高的趋化吸附作用,中止了骨髓间充质干细胞正常状态下向骨髓的归巢。     

地拉罗司与去铁胺治疗输血依赖型地中海贫血铁过载的效果分析

目的:比较地拉罗司(DFX)及去铁胺(DFO)治疗输血依赖型地中海贫血(TDT)的效果,评价单药治疗的优势及局限性。方法:回顾分析我院门诊2013年1月-2015年6月TDT合并铁过载并接受DFX或DFO治疗的病例资料。DFX组58例患儿选择DFX 20~35 mg/(kg·d)治疗,DFO组27例患儿选择DFO 25~45 mg/(kg·d)治疗,每周5 d。自用药起随访1年,每3~6个月检测血清铁蛋白(SF)水平、肝肾功能、血常规。结果:两组患儿中位年龄、平均铁摄入率及治疗前SF 比较差异无统计学意义。随访6个月,DFX组和DFO组SF下降均值分别为168(-2 650,7 254)ng/mL 和170(-260,599)ng/mL(P>0。05)。DFX组SF下降与剂量呈正相关(P<0.05)。随访7~12个月,DFX组与DFO组SF下降均值分别为212(-370,795)ng/mL 和-1 330(-2 454,-206)ng/mL(P<0.05)。结论:DFX较DFO治疗TDT有优势,宜使用耐受范围内最大剂量。DFX可稳定SF,宜长期用药。DFO安全剂量用于大量输血患儿效果不佳。     

白血病干细胞的分子信号及微环境

如何根治白血病是目前肿瘤治疗的难题之一,近年发现白血病细胞中有一小部分细胞具有自我更新的能力,被定义为白血病干细胞.研究发现白血病干细胞是与治疗耐药及疾病复发有关,深入认识白血病干细胞的生物学特性及其分子信号有重要临床意义,这将为白血病干细胞的治疗提供新靶点.白血病干细胞在其特定的微环境中生存,与微环境中各种细胞及细胞外基质等有密切联系.进一步认识白血病干细胞微环境也将有助于开展新的治疗策略.     

致敏小鼠骨髓间充质干细胞体外培养及多向分化功能的测定

目的：评价异基因脾细胞输注致敏的小鼠骨髓源性间充质干细胞(MSCs)的体外培养生长能力及其多向分化功能。方法：应用贴壁培养法体外培养间充质干细胞,流式检测其表面标志以及检测其成骨、成脂和成肌多向分化状况;结果：致敏小鼠骨髓源性MSCs与非致敏小鼠骨髓源性MSCs比较,形态学无差异且均表达CD29+、CD105+、CD44+和Sca-1+ ;CD34-、CD11b-;同时在相应的诱导条件下具有向成骨、成脂、成肌多向分化的能力。结论：异基因脾细胞输注致敏的小鼠,其骨髓源性MSCs的形态学和功能与正常小鼠的MSCs比较评估未见异常。     

骨髓微环境的研究进展

干细胞微环境被认为是干细胞的“土壤”（niche）,随着各种新技术的发展,人们对干细胞微环境认识逐渐深入,已成为一个崭新的研究热点。骨髓微环境是最具特征性“土壤”之一,是造血干细胞赖以生存的基础,与造血生成调控、干细胞的动员及归巢有密切联系。本文就骨髓微环境中重要的信号传导通路及可能的分子机制进行综述。     

氟达拉滨联合阿糖胞苷及粒细胞集落刺激因子治疗儿童难治及复发性急性白血病

 【摘要】　目的　观察氟达拉滨（Flud）联合阿糖胞苷（Ara-C）及粒细胞集落刺激因子（G-CSF）（FLAG）方案治疗儿童难治及复发性急性白血病（AL）的疗效及患者不良反应。方法　9例复发及难治性AL患儿接受了FLAG方案治疗,Flud 每天30 mg／m2,第1天至第5天,静脉滴注30 min;Ara-C每天2 g／m2,Flud应用后4 h静脉滴注,第1天至第5天。G-CSF 5 μg?kg-1?d-1,中性粒细胞＜0.5×109／L时开始应用,用至中性粒细胞 ≥1×109／L。9例患儿中急性髓系白血病（AML）8例,急性淋巴细胞白血病（ALL）1例;难治性AL 5例,复发性AL 4例。结果　9例患儿中经1个疗程化疗达完全缓解（CR）6例,部分缓解（PR）2例,总有效（CR+PR）率 88.9 %（8／9）。6例CR患者中2例行造血干细胞移植,现均无瘤生存;患者主要不良反应是感染、骨髓抑制和胃肠道反应。结论　FLAG方案治疗儿童难治及复发性AL缓解率高,不良反应可以耐受,是治疗儿童难治及复发性AL的一个选择,为后续的造血干细胞移植提供了机会。