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目的:探究ADP核糖基化因子4(ADP-ribosylation factor 4,ARF4)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)发生发展中的生物学作用及作用机制。方法:采用蛋白质印迹法(Western blot, WB)和免疫组化技术检测ARF4在临床NSCLC组织和癌旁组织中的表达情况;使用TCGA数据库分析ARF4与肺癌患者预后的相关性;使用siARF4敲降人NSCLC细胞系A549和H1975细胞中ARF4的表达水平,并用WB和实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法进行验证;通过CCK-8实验检测敲低ARF4以及敲低ARF4与顺铂联用对NSCLC细胞增殖的影响;利用Transwell实验检测敲低ARF4以及敲低ARF4与顺铂联用对NSCLC细胞迁移及侵袭的影响;通过流式细胞术检测敲低ARF4以及敲低ARF4与顺铂联用对NSCLC细胞凋亡的影响;通过WB实验探究敲低ARF4后NSCLC中EGFR通路的变化。结果:ARF4在NSCLC组织中的表达较癌旁组织显著升高,且和患者的较差预后显... 相似文献
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目的:探讨热休克蛋白70蛋白5(heat shock 70 kDa protein 5,HSPA5)通过铁死亡对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测HSPA5和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)在宫颈癌和癌旁组织中的表达情况,通过TCGA数据库分析所有宫颈鳞状细胞癌和宫颈内膜腺癌(CESC)中HSPA5与患者总生存率间的相关性。体外培养人宫颈癌HeLa和SiHa细胞系,分别感染shHSPA5和shCtrl慢病毒,构建稳定的宫颈癌HSPA5敲低株,用qRT-PCR和WB检测HSPA5敲低之后铁死亡相关蛋白GPX4的表达情况。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)或激活剂Erastin处理细胞后,采用CCK-8和EdU检测细胞增殖情况;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH含量;还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒和丙二醛(MDA)试剂盒分别测定GSH和MDA含量;流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS)的情况。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中HSPA5与GPX4的表达显著升高,HSPA5高表达与患者预后不良有关;在HeLa和SiHa细胞中敲低HSPA5能够抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡;同时细胞内ROS、MDA和LDH的水平上调;HSPA5敲低后GPX4的mRNA和蛋白表达水平同时降低,此外细胞内GSH的含量降低;铁死亡抑制剂Fer-1逆转了HSPA5敲低导致的ROS和LDH的含量升高并抑制细胞凋亡;铁死亡激活剂Erastin和HSPA5敲低联合增加了细胞凋亡并抑制细胞增殖。结论:HSPA5在宫颈癌组织中表达上调,通过敲低HSPA5可激活铁死亡从而抑制宫颈癌细胞的增殖和促进细胞凋亡。 相似文献
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