ARF4通过EGFR通路调控非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的:探究ADP核糖基化因子4(ADP-ribosylation factor 4,ARF4)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)发生发展中的生物学作用及作用机制。方法:采用蛋白质印迹法(Western blot, WB)和免疫组化技术检测ARF4在临床NSCLC组织和癌旁组织中的表达情况;使用TCGA数据库分析ARF4与肺癌患者预后的相关性;使用siARF4敲降人NSCLC细胞系A549和H1975细胞中ARF4的表达水平,并用WB和实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法进行验证;通过CCK-8实验检测敲低ARF4以及敲低ARF4与顺铂联用对NSCLC细胞增殖的影响;利用Transwell实验检测敲低ARF4以及敲低ARF4与顺铂联用对NSCLC细胞迁移及侵袭的影响;通过流式细胞术检测敲低ARF4以及敲低ARF4与顺铂联用对NSCLC细胞凋亡的影响;通过WB实验探究敲低ARF4后NSCLC中EGFR通路的变化。结果:ARF4在NSCLC组织中的表达较癌旁组织显著升高,且和患者的较差预后显...     

HSPA5通过抑制铁死亡调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨热休克蛋白70蛋白5（heat shock 70 kDa protein 5，HSPA5）通过铁死亡对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质印迹法（Western Blot，WB）检测HSPA5和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)在宫颈癌和癌旁组织中的表达情况，通过TCGA数据库分析所有宫颈鳞状细胞癌和宫颈内膜腺癌（CESC）中HSPA5与患者总生存率间的相关性。体外培养人宫颈癌HeLa和SiHa细胞系，分别感染shHSPA5和shCtrl慢病毒，构建稳定的宫颈癌HSPA5敲低株，用qRT-PCR和WB检测HSPA5敲低之后铁死亡相关蛋白GPX4的表达情况。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1（Fer-1）或激活剂Erastin处理细胞后，采用CCK-8和EdU检测细胞增殖情况；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH含量；还原型谷胱甘肽（GSH）试剂盒和丙二醛（MDA）试剂盒分别测定GSH和MDA含量；流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧（ROS）的情况。结果:与癌旁组织相比，宫颈癌组织中HSPA5与GPX4的表达显著升高，HSPA5高表达与患者预后不良有关；在HeLa和SiHa细胞中敲低HSPA5能够抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡；同时细胞内ROS、MDA和LDH的水平上调；HSPA5敲低后GPX4的mRNA和蛋白表达水平同时降低，此外细胞内GSH的含量降低；铁死亡抑制剂Fer-1逆转了HSPA5敲低导致的ROS和LDH的含量升高并抑制细胞凋亡；铁死亡激活剂Erastin和HSPA5敲低联合增加了细胞凋亡并抑制细胞增殖。结论:HSPA5在宫颈癌组织中表达上调，通过敲低HSPA5可激活铁死亡从而抑制宫颈癌细胞的增殖和促进细胞凋亡。