sICAM-1和GPC-3 mRNA对肝癌诊断与转移监测的临床价值

目的:定量分析肝病患者血可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)浓度和外周血单核细胞磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)mRNA,探讨对肝癌(HCC)诊断与预后的价值.方法:收集住院肝病患者外周血,分离单核细胞,制备总RNA,经逆转录合成GPC-3cDNA,以荧光定量PCR扩增;并以酶联免疫吸附法(ELISA)定量分析血ICAM-1水平.结果:肝病发展过程中血ICAM-1表达呈梯度增加,HCC患者血ICAM-1表达显著高于肝硬化(t=3.184,P=0.002)和慢性肝炎患者(t=3.962,P<0.001),与伴门脉癌栓(t=2.941,P=0.005)及肝外转移(t=3.282,P=0.002)明显相关,与患者年龄、性别、HBsAg阳性与否、AFP浓度及肿瘤大小间未见明显相关.GPC-3mRNA阳性仅见肝癌患者(70.9%);肝硬化、慢性肝炎患者及正常对照组中未检出(2=26.773,P<0.001).GPC-3mRNA阳性表达与HBsAg阳性(2=14.601,P<0.001)、肝癌TNM分期(2=17.732,P<0.001)、伴门脉癌栓及肝外转移(2=22.271,P<0.001)显著相关,与瘤体直径、数目、AFP浓度及分化程度未见明显相关;两者可互补诊断,提高诊断肝癌阳性率.结论:sICAM-1和GPC-3mRNA检测是肝癌诊断和转移监测的良好标志物,且对AFP阴性肝癌具有互补诊断价值.     

白介素24抗肿瘤作用机制的研究进展

黑色素瘤分化相关基因-7(MDA-7)/白介素24(IL24),是IL-10家族的成员之一,主要表达于人体脾脏、胸腺、外周血白细胞等免疫组织器官和正常黑色素细胞。IL24是一种独特的抑制肿瘤细胞因子,通过自分泌旁分泌方式调控,抑制肿瘤生长、侵袭转移及血管生成,诱导凋亡,可以选择性的杀伤多种肿瘤细胞,产生放化疗增敏效应,而不伤害正常细胞。但是目前对于其作用的具体机制尚不明确。     

原发性肝癌早期诊断特异分子标志物的研究进展

原发性肝癌(primary hepatocarcinoma,PHC)预后极差,早期诊断和转移监测极为重要。肝癌组织合成和分泌多种肝癌相关的蛋白、同工酶、基因标志等。循环血中的PHC特异性标志有助于肝癌的早期诊断、转移监测和复发预测。本文述评了PHC特异性标志物的研究进展。     

IGF-Ⅱ/IGF-ⅠR相关信号通路与肝细胞癌靶向治疗

胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)-Ⅱ/IGFⅡ-ⅠR相关信号通路与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展密切相关.IGF-Ⅱ活化可经IGF-Ⅰ R传递促有丝分裂信号,增加HCC变可能,近来研究显示靶向IGF-Ⅱ或IGF-Ⅰ R可明显抑...     

下调GPC-3基因转录对肝癌细胞侵袭及血管新生的抑制作用

目的:观察以短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)下调磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC-3)基因转录,对抑制肝癌MHCC-97H细胞侵袭和血管新生的作用与机制.方法:将对GPC-3特异性shRNA转染肝癌MHCC-97H细胞,以荧光定量PCR和Western blot分析GPC-3 mRNA及蛋白表达;以5-ethynyl-2'-deoxyuridine(EdU)和Transwell法等评估细胞增殖、迁移和侵袭能力.结果:shRNA1转染MHCC-97H细胞,GPC-3在mRNA水平下降75.6%(t=15.473,P0.001),蛋白表达同步下调;干预GPC-3基因转录,可抑制肝癌细胞增殖,细胞迁移与侵袭能力减低,与抗癌药物具协同作用;Wnt/β-catenin中β-catenin表达下调67.7%;Hedgehogs通路中脑胶质瘤相关癌基因1(glioma-associated oncogene 1,Gli1)表达上调53.3%;shRNA1转染72 h细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达下调54.2%(t=46.746,P0.001).结论:shRNA下调GPC-3转录,经Wnt/β-catenin和Hh信号通路抑制癌细胞迁移、侵袭和血管新生,为肝癌基因治疗潜在的分子靶目标.     

构建OGDH基因敲除型SD大鼠模型

目的构建酮戊二酸脱氢酶(OGDH)基因敲除SD大鼠模型。方法设计、构建TALEN重组子,用荧光素酶活性法筛选出最有效重组子,显微注射法将质粒打入受精卵后测序鉴定。对同一时间点的野生型和基因敲除型大鼠分别进行饮食习惯、活动状态、毛发颜色及质量检测,Western Blot检测两者肝组织OGDH蛋白表达。结果成功构建了靶向OGDH基因的TALEN质粒,并筛选了最有效的TALEN重组子(OGDH-T2),成功培育出杂合子18只,成功率为22.5%,未发现OGDH-KO8纯合子的出生。质量检测显示OGDH-KO8大鼠的质量明显高于野生型,且在第10周时最为显著,增幅率达50.2%(P0.001),KO组大鼠的OGDH蛋白表达水平显著降低,下降率为50.6%(P0.01)。结论利用TALEN技术成功构建了OGDH基因敲除型SD大鼠模型。     

外周血高尔基体糖蛋白-73表达水平对肝细胞癌的诊断与鉴别诊断价值

目的定量分析肝病患者血清高尔基体糖蛋白-73(GP73)水平,探讨其对肝细胞肝癌(HCC)的诊断与鉴别诊断价值。方法收集不同肝病患者外周血标本,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测GP73浓度,并分析与甲胎蛋白(AFP)的相互关系。结果血GP73表达水平,正常对照组为(28.83±21.00)ng/ml,慢性肝炎组为(49.86±40.46)ng/ml,肝硬化组为(62.30±56.30)ng/ml,肝癌组为(66.75±69.97)ng/ml;GP73水平随着肝病的进展呈进行性增加,肝癌组明显高于对照组和慢性肝炎及肝硬化组(P<0.05)。肝癌患者血GP73表达水平在HBV感染(HBsAg阳性/阴性)、肝外转移与否组间对比,差异有统计学意义(P<0.05)。且GP73与AFP表达改变呈显著正相关(r=0.961,P=0.039),血AFP的ROC曲线下面积为0.877,GP73为0.931,GP73与AFP联合检测对肝癌有互补诊断价值。结论血GP73表达异常与肝癌发展密切相关,定量检测有助于肝癌的诊断和鉴别。     

沉默GPC-3基因质粒构建及对HepG2细胞增殖的抑制作用

目的:构建磷脂酰肌醇蛋白多糖(glypican,GPC)-3 shRNA质粒,观察GPC-3活化干扰对肝癌(HepG2)细胞的抑制作用。方法:设计与合成多条针对GPC-3序列的shRNA,插入pGPU6/GFP/Neo载体,构建、转染HepG2细胞、筛选高效质粒,观察沉默GPC-3表达对肝癌细胞增殖的抑制作用与机制。结果:经BamHⅠ或PstⅠ酶切鉴定,证实插入pGPU6/GFP/Neo载体GPC-3 shRNA序列正确,成功构建GPC-3 shRNA干扰质粒。以脂质体介导,将GPC-3shRNA1～4分别转染HepG2细胞,shRNA1沉默GPC-3 mRNA最高效率达89.3%,可有效抑制HepG2细胞增殖,在72 h达71.1%;shRNA1干扰使HepG2细胞周期阻滞在G1期,促进癌细胞发生凋亡(65.6%)。结论:shRNA可有效干预肝癌细胞GPC-3基因转录,促进凋亡并抑制增殖,GPC-3可望成为肝癌基因治疗的靶目标。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的表达特征及其在肝癌诊断与鉴别诊断中的价值

目的 研究磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)的表达特征及其在肝癌诊断与鉴别诊断中的临床价值.方法 制作鼠肝癌模型,并按病理组织检查结果分为正常组、肝细胞变性组(变性组)、癌前病变组(癌前组)和肝细胞癌组(癌变组).以Western blot和逆转录-聚合酶链反应分别观察GPC-3蛋白质及mRNA的动态表达;以自身配对法收集术后肝癌组织,根据其组织学类型分为肝癌组、癌旁组、远癌组,以免疫组织化学法分析GPC-3表达与病理学特征的关系;以酶联免疫吸附法定量分析肝病患者外周血GPC-3表达水平,并评价其诊断效率.多个样本均数比较用单因素方差分析,组间GPC-3的表达及病理学特征比较用单因素秩和检验,血清GPC-3比较用秩和检验,率的比较采用x2检验或Fisher's exact分析,以受试者工作特征曲线下面积比较GPC-3诊断肝癌的敏感性、特异性及诊断效率.结果 在鼠肝癌形成过程中,正常、变性、癌前和癌变组GPC-3阳性率分别为0(0/6)、83.3%(15/18)、100.0%(9/9)和100.0%(9/9).人肝癌组织GPC-3阳性呈棕黄色颗粒状染色,定位于胞质和细胞膜,肝癌、癌旁和远癌组的阳性率分别为80.6%、41.7%和0,肝癌组明显高于远癌组(x2=48.56,P＜0.01)和癌旁组(x2=11.455,P＜0.01);癌旁组明显高于远癌组(x2=18.94,P＜0.01).GPC-3表达与肿瘤分化程度和数目间未见明显相关,与瘤体大小有关(Z=2.941,P＜0.01).肝病患者血清GPC-3异常主要见于肝癌(52.8%,65/123),且在不同性别、年龄、甲胎蛋白水平、肿瘤数目、Child分级和肝外转移者间未见明显差异;但肝癌＜3.0cm组明显高于≥3.0cm组(x 2=6.318,P＜0.05); HBsAg阳性组明显高于阴性组(x 2=23.362,P＜0.01).GPC-3与甲胎蛋白(＞20 μg/L)联合诊断肝癌的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为87.00%、79.66%、82.17%、69.03%和92.16%.结论 GPC-3表达与肝癌密切相关,其表达的检测有助于肝癌早期诊断和鉴别诊断.

Abstract：

Objective To investigate the expression features of glypican-3 (GPC-3)and its diagnostic and differential values in hepatocellular carcinoma (HCC). Methods Rat hepatoma models were made and the dynamic expression features of GPC-3 protein and its gene were investigated by Western blotting and RT-PCR respectively. Liver specimens from 36 HCC patients were collected by self-control method and the expression and clinicopathological features of GPC-3 were analyzed by immunohistochemistry. Serum GPC-3 levels were quantitatively detected by ELISA and its efficiency for HCC diagnosis was evaluated in patients with liver diseases. Results The incidence of GPC-3 was 0% in control, 83.3% in degeneration, 100% in precanceration and 100% in canceration during dynamic formation of rat hepatoma, respectively. The positive GPC-3 was brown granule-like staining localized in membrane and cytoplasm in human HCC.The GPC-3 positive rates were 80.6% in HCC, 41.7% in surrounding tissues and none in distal tissues (P＜0.01), respectively. No positive relationship presented between GPC-3 and differentiation grade or the number of minor except of rumor size (Z=2.941, P＜0.01). The incidence of serum GPC-3 was 52.8% in HCC patients except of one patient with cirrhosis. No significant differences were found between GPC-3 and sex, age, AFP, mm or number, Child classification or extrahepatic metastasis except of rumor size (x2 = 6.318, P＜0.05) and HBV infection (x2 = 23.362,P＜0.01). Combined detection of GPC-3 and AFP could rise up diagnosis of HCC. Conclusions GPC-3 expression closely associated with HCC and might be useful for early diagnosis of HCC.     

肝癌胰岛素样生长因子-Ⅱ表观遗传改变与其基因转录、表达的相关性分析

目的 分析胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅱ表观遗传改变与基因转录、表达间的相互关系.方法 以自身配对法收集肝癌的癌灶、癌周和远癌组织,以甲基化特异性PCR分析IGF-Ⅱ基因启动子P3的甲基化状态,以逆转录巢式PCR分析IGF-Ⅱ mRNA转录水平,以免疫组织化学法分析肝组织IGF-Ⅱ表达、胞内分布与临床病理学特征.对数据采用x 2检验、等级相关等分析. 结果 IGF-Ⅱ基因P3启动子甲基化率在肝癌组织为0,显著低于癌旁组织(47.5％,x2 - 24.918,P＜0.01)及远癌组织(100.0％,x2=80.000,P＜0.01).肝癌组织IGF-Ⅱ mRNA扩增阳性率为100.0％,明显高于癌旁组织(52.5％,x2=24.918,P＜0.01)和远癌组织(0,x2=80.000,P＜0.01);肝癌组织IGF-Ⅱ蛋白阳性表达率为82.5％,明显高于癌旁组织(45.0％,x2=12.170,P＜ 0.01)和远癌组织(0,x2=56.170,P＜0.01).癌组织IGF-Ⅱ过表达与其分化程度、浆膜浸润、瘤体大小和HBV感染相关.结论 基因表观遗传改变调控IGF-Ⅱ的转录和表达,与肝癌的发生、发展密切相关.