99Tcm标记人源化抗人血小板膜糖蛋白Ⅲ a单克隆抗体SZ21F(ab)2血栓栓塞显像

目的用动物血栓栓塞模型显像评估99^Tc^m标记人源化抗人血小板膜糖蛋白（GP）Ⅲa单克隆抗体（简称单抗）F（ab）2片段SZ21F（ab）2的应用价值。方法通过体外抑制二磷酸腺苷（ADP）诱导的犬血小板聚集实验，评估SZ21F（ab）2与血小板结合的亲和性和特异性。以2-亚氨基噻吩盐酸盐（IT）法修饰SZ21F（ab）2分子的亚氨基，以99^Tc^m-葡庚糖酸钠（GH）转换络合法进行标记。分别用快速薄层层析（ITLC）法和ELISA测定标记物的放化纯及生物活性。对3条肺动脉血栓和8条（包括上述3条）后肢深静脉血栓栓塞比格犬模型进行显像研究。结果SZ21F（ab）2抑制ADP诱导的犬富含血小板血浆（PRP）聚集实验的半数有效剂量（IC50）为（2．49±1．88）μg／ml。ITLC法测得标记物的放化纯为90％～95％，ELISA测定结果表明标记后抗体保留了免疫活性。注射显像剂后1h，肺动脉血栓部位和后肢深静脉血栓部位均出现放射性浓聚。注射后3h，在体显像肺动脉血栓和后肢深静脉血栓栓塞模型的放射性靶／本底（T／B）比值分别为3．03±1．18和3．51±0.62。肺动脉血栓部位和后肢深静脉血栓部位的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）分别为0．083％ID／g和0．076％ID／g。体外检测结果表明：肺动脉血栓与正常肺组织的单位质量放射性比值平均为12．8，后肢深静脉血栓与血液的单位质量放射性比值平均为5．2，与肌肉的比值平均为127.0。结论99^Tc^m-SZ21F（ab）2与人血小板具有较高的亲和力，有潜在的血栓显像应用前景。     

纤维蛋白原检测的指南

英国血液学界通常通过纤维蛋白原的测定来判断纤维蛋白量的降低和质的异常，评估出血危险性。纤维蛋白原的升高通常预示各种缺血性事件的存在，建议进行纤维蛋白原检测就是基于这种观点。     

Raji 细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建及筛选

目的构建针对B细胞淋巴瘤Raji细胞系噬菌体抗体库并从中筛选出特异性的抗体。方法以Raji细胞免疫BALB/c小鼠,RT-PCR法从脾淋巴细胞中扩增抗体轻链к和重链Fd基因。经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次克隆入噬菌体载体pComb3H-SS中,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建B细胞淋巴瘤Raji细胞系特异性Fab噬菌体抗体库。以Raji细胞为抗原进行筛选,获得抗Raji细胞的抗体,通过ELISA法进行抗原结合活性的测定,并对所得阳性克隆进行基因测序分析。结果构建了容量为2.18×107的抗人B细胞淋巴瘤Raji细胞系的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了与Raji细胞系特异性识别结合的8株阳性克隆。对其中两个阳性克隆进行基因序列分析,结果显示其重链可变区、轻链可变区分别与免疫球蛋白基因库中已注册的鼠源性免疫球蛋白重链可变区和轻链可变区序列具有高度同源性。结论成功地构建Fab噬菌体抗体库并筛选出针对Raji细胞系膜抗原的抗体,为进一步研究B细胞淋巴瘤的免疫治疗提供了实验基础。     

一叶秋碱诱导人白血病HL—60细胞凋亡

目的 研究一叶秋碱能否诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,方法 用ＭＴＴ法检测一叶秋碱对细胞增殖影响;应用流式细胞仪检测凋亡细胞数;采用琼脂糖凝胶电泳法观测ＤＮＡ碎片,透射电镜观察凋亡的形态改变,结果：一叶秋碱５－８０ｍｇ．Ｌ＾－１能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡形态学改变,电泳呈现出阶梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡率随剂量的增高而升高,ＭＴＴ法示一叶秋碱抑制ＨＬ－６０细胞增殖,并且呈时间,剂量     

碱性成纤维细胞生长因子对非贴壁骨髓基质前体细胞增殖及分化作用的研究

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对非贴壁骨髓前体细胞的增殖及分化作用。方法　分离骨髓前体细胞体外培养 ,用碱性磷酸酶化学染色及图像分析仪测定细胞克隆数 ;采用免疫组化 (ABC法 )检测PCNA、Ⅰ型胶原、钙及骨钙素。研究bFGF对非贴壁前体细胞的促增殖及分化作用。结果　骨髓细胞中许多基质前体细胞以非贴壁前体细胞 (NASP)形式存在 ,bFGF不仅能促进其增殖 ,而且能诱导其向成骨细胞分化。结论　bFGF主要作用于非贴壁生长的基质前体细胞 :能增加骨细胞的数量 ,促进骨样组织形成 ,为临床用bFGF治疗骨折、骨不连提供理论依据。     

肺癌细胞系内皮蛋白C受体的表达及其意义

目的 从细胞、蛋白和基因三个水平分析内皮蛋白C受体（endothelial protein C receptor，EPCR）在肺癌细胞系的表达。方法 以EA．hy926内皮细胞作阳性对照，人胚肺W138细胞作阴性对照，通过流式细胞术、West-ern．blot及半定量逆转录-聚合酶链反应分析EPCR在6种肺癌细胞系的表达水平。结果 6株肺癌细胞系均有EPCR的表达。高转移肺癌95D细胞表达最高。结论 EPCR的表达是肺癌细胞的重要特征，可能与肺癌增殖及转移有关。     

血管性血友病因子及其裂解酶在肺癌患者中的表达及其意义

目的探讨肺癌患者在不同病理状态下血管性血友病因子(vWF)水平及其裂解酶(vWF-cp)活性的改变及临床意义。方法以残余胶原结合实验及ELISA分别测定2003年10月至2005年1月苏州大学附属第一医院呼吸科78例肺癌血浆vWF-cp和vWF,对其中23例合并胸腔积液的肺癌患者以放免法测定血清和胸水癌胚抗原(CEA)水平。结果(1)肺癌患者vWF抗原(vWFAg)(107.7±43.7)%显著高于正常对照组(71.3±49.5)%及肺良性疾病组(82.4±41.3)%(P<0.05),而vWF-cp活性水平在肺癌患者(59.2±21.5)%显著低于正常对照组(86.6±1.8)%和肺良性疾病组(79.4±13.3)%(P<0.05);二者在肺癌晚期广泛转移较局限期差异均有显著性;(2)血浆vWFAg与胸水CEA呈正相关,而vWF-cp与胸水CEA呈负相关。结论肺癌患者血浆vWFAg升高、vWF-cp降低,并与疾病进展有关。     

抗血板GPⅢa单克隆抗体SZ—21单链抗体片断的表达和特性

将能与血小板膜糖蛋白Ⅲa特异结合的单克隆抗体SZ－21构建成单链抗体。应用RT－PCR技术,从分泌SZ－21单克隆抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL可变区基因,并构建成SZ－21单链抗体（SZ－21ScFv)。将该单链抗体基因亚克隆到高效表达质粒pET20b,得到pET20b-21ScFv。通过IPTG诱导在大肠杆菌E coli BL21(DE3)PlysS中表达了功能分子。表达产物主要以包涵体形式存在,表达量占菌体蛋白的21％。经过包涵体的溶解、Ni-NTA树脂亲和吸附纯化和蛋白质的体外重折叠等一系列的变性和复性过程,获得具有生物活性的高纯度单链抗体片段。ELISA和Western blot证实该融合蛋白保留了与亲本抗体同样的血小板结合特性。SZ－21单链抗体体外能够抑制ADP诱导的血小板聚集,其抑制能力呈剂量依赖性,在浓度为20mg/L时达到最大抑制率。流式细胞仪检测证实该单链抗体能与内皮细胞反应。该单链抗体有望用于血栓性疾病的治疗。     

血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达及功能研究

为了深入研究血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ(glycoproteinⅥ，GPⅥ)功能及筛选特异性抑制剂，利用基因重组技术体外表达GPⅥ胞外区片段。采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段eDNA，构建表达载体pET-20b( )-GPⅥ，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，经IPTG诱导表达。表达产物经Ni—NTA Resin纯化、复性：使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质；采用胶原结合试验测定重组蛋白的胶原结合能力。结果表明，经测序证明PCR扩增产物与GPⅥ胞外区eDNA序列完全一致；酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b( )-GPⅥ；原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量32kD蛋白条带，诱导产物以包涵体形式存在；Western blot分析表明重组蛋白可与抗Penta—His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合；胶原结合试验表明重组蛋白拥有较好的生物学功能。结论：正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白，纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性和生物学活性。     

Annexin Ⅱ siRNA对淋巴瘤Jurkat细胞凋亡的影响

目的观察沉默膜联蛋白Ⅱ（annexinⅡ,A2）基因对淋巴瘤Jurkat细胞凋亡的影响。方法采用A2 siRNA转染人淋巴瘤Jurkat细胞后应用RT-PCR和Western blot鉴定干扰效果。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响。结果Real-time PCR和Western blot检测结果表明,A2基因被成功抑制。流式细胞术检测得A2siRNA组细胞凋亡率为57.47%±2.10%,较阴性对照组（28.68%±1.21%）明显增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论A2基因可增强Jurkat细胞抗凋亡作用,A2 siRNA可诱导Jurkat细胞凋亡。