孕酮单克隆抗体的制备及抗体筛选方法的改进

近年来利用Kohler和Milstein创建的杂交瘤技术研制甾体激素类McAb已显示出巨大潜力。本文报道应用孕酮免疫BALB/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,用辣根过氧化物酶标记的孕酮(以下简称E-孕酮)结合法筛选抗体,获得了3株分泌抗孕酮单克隆     

天花粉(TCS)-5A(10)2免疫毒素裸鼠体内的导向抑瘤作用

单抗具有高度的特异性和多样性,因此以单抗为导向载体的抗肿瘤导向药物的研究在不断发展,并取得了良好的治疗效果。研究表明,单抗毒素偶联物对肿瘤细胞的杀伤活性比无关抗体偶联物的活性强,在体内具有靶向性,使毒素更易于与肿瘤细胞结合,大大提高了游离毒素对肿瘤细胞的杀伤率,降低了其对正常细胞的毒副作用。因此,单抗作为治疗的导向载体具有巨大的潜力。随着抗癌药物研究的发展,新型抗体与新型药物的结合为研制抗肿瘤导向药物展示了广阔的前景。材料与方法ＴＣＳ－５Ａ（１０）２免疫毒素由本室研制［１］,人肺腺癌细胞和Ｂａｌ…     

抗人小细胞肺癌单克隆抗体导向治疗的实验研究

越来越多的动物实验及临床应用证明,单抗介导的导向作用是确切的。在对抗人小细胞肺癌单抗2F7进行了特异性、亲和性及相关抗原表达研究的基础上,用移植人小细胞肺癌的裸鼠作为肿瘤模型,研究了碘标记     

抗人体肺癌单克隆抗体(HLC_3)的反应性研究

近年来肺癌发病率有增高趋势,但目前对肺癌诊断及治疗尚缺乏有效方法。杂交瘤技术产生的单克隆抗体具有纯度高、特异性强等优点。Sikora、Kasai和NCI的Minna实验室等都研制了针对不同组织类型的肺癌单克隆抗体。肺腺癌细胞株A_(549)免疫BALB/c小鼠后研制的HLC_3系列单克     

用单克隆抗体筛选小细胞肺癌相关抗原基因

用分子生物学技术克隆肿瘤相关抗原基因对认识肿瘤抗原本质、深入研究肿瘤抗原的结构和功能、研究肿瘤多肽疫苗有重要意义。我们已获得一组抗人小细胞肺癌单克隆抗体,并在体外证实该抗体所识别的抗原在靶细胞有较好的特异性和较高分布密度,是多肽性抗原决定簇。在此基础上,以抗体为探针,筛选小细胞肺癌基因库,目的在于寻找编码抗体所识别抗原的肿瘤相关基因。 λgt_(11)噬菌体为载体构建的人小细胞肺癌细胞株NCI—H_(128)cDNA文库的效价约1.3×10~6,可在大肠杆菌系统和β-半乳糖苷酶构成融合蛋白的形式,表达插入的外源蛋白。我们用抗NCI-H_(128)单抗2F_7和E_6混合作为控针。碘_(125)用Iodogen方法标记在纯化的抗小鼠抗体上。10~7的菌斑转移到NC膜,经放射自显影,从中筛选到5个阳性菌斑,经4轮克隆化后,阳性斑达100％,对其中N0.4克隆进一步研究。该克隆的溶源菌经     

适于杂交瘤细胞长期大量繁殖的SCI－8910培基的研制

单抗的免疫导向治疗已成为国内外肿瘤研究的热点之一。目前杂交瘤分泌单抗的来源一部分是小鼠腹水，另一部分培养于含血清的培养基内，这对单抗纯化带来困难，对免疫导向治疗也带来许多不利条件，如牛的ＩｇＧ、鼠的病毒等的污染。因此，我们着手研制一种能适应于杂交瘤长期培养的无血清培基，定名为ＳＣＩ－８９１０。现已进行了９株杂交瘤细胞的长期培养，同时用该培基在１．５Ｌ的Ｃｅｌｌｉｇｅｒ（ＮＢＳＵＳＡ）搅拌生物反应器中长期培养鼠－鼠杂交瘤细胞２Ｆ７（分泌抗人小细胞肺癌单抗）获得成功，经检测单抗纯度达到一定要求，产品在８ｍｇ／Ｌ以上。结果提示，该无血清培基制备的ＭＣＡｂ用于免疫导向治疗的可行性及大规模生产的可能性。     

抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体(mAb),对其进行特性鉴定,为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础。方法：构建膜联蛋白Ⅰ基因480 bp的原核表达载体pQE30-ANXⅠ,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,并用Ni-NTA树脂亲和层析柱纯化蛋白。用纯化的膜联蛋白Ⅰ作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化,制备抗膜联蛋白Ⅰ蛋白的单克隆抗体。用ELISA、Western blot及免疫组织化学染色法进行特性鉴定。结果：获得5株分泌抗膜联蛋白ⅠmAb的杂交瘤细胞,分别命名为1A8、1D2、1E2、4E7和5G3,所产抗体,均为IgG1亚型,轻链均为κ链,亲和力为(2．3～3．03)×10~8 L/mol。经Western blot证实获得的mAbs可以特异性识别膜联蛋白Ⅰ抗原；免疫组织化学染色结果也显示这些mAbs可以特异识别肿瘤组织中的膜联蛋白Ⅰ。结论：成功地获得了5株抗膜联蛋白Ⅰ的mAbs,为进一步在肿瘤诊断和治疗中应用膜联蛋白Ⅰ抗体打下了基础。     

蓖麻毒素A链蛋白的表达、活性及其对人肺腺癌细胞SPC的毒性作用

目的：研究构建重组单链免疫毒素,对人体肿瘤进行导向治疗。方法：采用ＰＣＲ方法从克隆化载体中拉出蓖麻毒素Ａ链（ｒｉｃｉｎＡ）基因,装人经过改建的ｐＴＳＡ－１８Ｆ表达载体,进行目的基因ＤＮＡ序列分析后导入Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中进行,表达产物进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ检查,表达产物的生物活性通过性通过ＲＮＡ Ｎ－糖苷酶活性检查、无细胞体系中对蛋白质质生物合成的抑制以及对肿瘤细     

抗人胃癌组织中SIgA的单克隆抗体特性及其意义的初步探讨

本文报道用人胃癌(粘液腺癌Ⅱ级)组织提取液免疫的Balb/c小鼠脾细胞和SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得一个抗人IgA单克隆抗体(简称McAb),命名为A_5B_8,IgG类属IgG_3。腹水抗体滴度为1:10~(-5)～1:10~(-6)。竞争抑制试验显示,人IgG对McAb无抑制作用,而人初乳SIgA、胃癌组织和癌旁胃粘膜组织中SIgA对反应有明显抑制作用,证明McAb是抗人IgA抗体。但是McAb对不同来源的IgA的亲和性不同,如人初乳SIgA浓度为0.5mg/ml、1.0mg/ml和2.0mg/ml时,其抑制率分别为60.3％、61.6％和65.8％增加不明显。而胃癌组织SIgA同样3种浓度,其抑制率分别为39.4％、69.8％和80.5％,抑制作用明显增加。癌旁胃粘膜SIgA的抑制作用与胃癌SIgA相同,分别