CD4+CD25+调节性T细胞与系统性红斑狼疮病情活动性关系的研究

目的：检测系统性红斑狼疮患者外周血CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD8^＋调节性T细胞亚群，探讨其与疾病活动性、肾脏损伤、血清抗ds-DNA抗体及免疫球蛋白和补体C3含量的关系。方法：采用流式细胞术检测北京协和医院住院和门诊SLE患者（n=37）外周血CD4^＋CD25^＋T、CD4^＋CD8^＋T细胞群比例，以15例RA和15例SS组成自身免疫性疾病对照，30例健康体检者作为正常对照，观察调节性T细胞亚群与SLE患者疾病活动性指标SLEDAI、IgG、C3及血清抗ds-DNA抗体的关系。结果：①疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞群比例显著低于正常对照组（P〈0.01），疾病稳定期和风湿性疾病对照组与正常对照组结果差异无统计学意义。疾病活动期和稳定期SLE患者CD4＋CD8＋T细胞群比例都略高于正常对照组，但未发现结果差异有统计学意义（P〉0.05）。②疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于稳定期患者（P〈0.01）。SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值与SLEDAI、补体C3呈低度相关（r分别为-0.491、0.368，P〈0.05），CD4^＋CD25^＋T细胞数量与SLEDAI呈负相关（r=-0.578，P〈0.05）。③SLE并发肾病组外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于非肾病组（P〈0.01；P〈0.05）。同一SLE患者治疗前后CD3^＋CD4^-CD8^-细胞和NK细胞降低，CD4^＋CD25^＋细胞、CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值及CD8^＋T细胞增加，但未发现这些结果差异有统计学意义。本次研究未发现NK细胞、CD4^＋CD8＋T细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞群比例在ds-DNA＋组与ds-DNA-组之间结果差异有统计学意义。结论：SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例与SLEDAI成负相关，与肾脏的损害也有密切关系，但与血清抗ds-DNA抗体产生的关系不明显。活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞减少，稳定期CD4^＋CD25^＋T细胞比例回升，因此推测CD4^＋CD25^＋T细胞的变化可能是导致疾病发生和病情发展及相关器官（如肾脏）损伤的关键环节之一。     

葡萄糖-6-磷酸异构酶mRNA在RA患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探讨葡萄糖-6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）mRNA在类风湿关节炎（RA）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中的表达及其与RA疾病活动性的关系。方法对30例RA活动期患者、30例RA缓解期患者、30例其他风湿性疾病患者及30名健康体检者，采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量检测PBMCs中GPImRNA的表达水平。结果RA活动期患者GPImRNA的表达水平明显高于RA缓解期患者、其他风湿性疾病患者及正常对照组（P〈0．05），在RA活动组和RA缓解组，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论GPImRNA在部分RA患者中高表达，其可能在RA发病机制中起作用，并与疾病的活动性相关。     

AtheNA Multi-Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能评价

目的 评价Luminex公司基于多元微珠流式点阵分析(MBA)技术研制的AtheNA Multi-Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能.方法 用AtheNA Multi-Lyte系统检测146例确诊的自身免疫性疾病患者,200例本实验室常规送检的连续标本和90例献血者血清中的抗SSA、抗SSB、抗ds-DNA、抗rRNP、抗Sm、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体和ACA,与传统的ANA Hep-2 IFA和单个可提取核抗原(ENA)标志物的ELISA法比较.结果 AtheNA系统与Hep-2 IFA法和ELISA法在自身免疫疾病、常规送检标本、献血者的符合率为分别为:81.5%、79.5%、96.7%和95.9%、96.5%、98.9%.436份标本分析中AtheNA系统与ELISA单个标志物抗(SSA、SSB、ds-DNA、rRNP、Sm、Jo-1、Scl-70、组蛋白)抗体和ACA的符合率分别为:95.2%、95.0%、96.1%、89.9%、85.1%、93.1%、97.0%、94.3%、97.9%.结论 AtheNA Multi-Lyte检测系统在特异性自身抗体检测上提供了均相、多元而且客观的崭新方法,在单一微孔中实现同时对多种自身抗体的定性、定量分析,与ELISA结果相比,有较高的敏感性、特异性和一致性.使传统的抗核抗体检测实现了自动化.     

去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位基因片段的克隆表达及其检测自身免疫性肝炎的价值

Objective To clone and express the human asialoglycoprotein receptor(ASGPR) H1 subunit, purify and identify the immunoreactivity of the recombinant protein, and establish the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to detect anti-ASGPR antibodies in diagnosis of autoimmune hepatitis. Methods The CRDHI cDNA (435 bp) was subcloned into eukaryotic vector PEGH, and the recombinant protein expression was induced by D (+)-Galactose. The recombinant CRDH1 was purified with Glutathione Sepharose 4B, and its immunoreactivity was identified by SDS-PAGE and western blot as well as MALDI-TOF. ELISA was established to detect the anti-ASGPR antibodies in serum samples of 45 patients with AIH, 30 patients with SLE, 30 patients with RA, 10 patients with SS and 30 normal controls. Results The sequencing of recombinant plasmid showed the CRDH1 gene was successfully inserted to the eukaryotic expression vector with correct sequence and open reading frame. The fusion protein showed a molecular weight of 42 500 Da on SDS-PAGE gel and confirmed to be the human ASGPR by MALDI-MS through peptide mass fingerprint analysis with Mascot in human protein database. It shared 98. 34% homology with ASGPR H1 subunit. Western blot analysis showed that the fusion protein had the same immunoreactivity as human ASGPR. The results of ELISA indicated that the positive rate of anti-ASGPR was 35.6% ( 16/45 ), but the ELISA was negative in other control. There was significant difference of positivity of the autoantibodies between AIH and non-AIH controls (χ2 = 31.85,P < 0. 01 ). Conclusions The human plasmid containing ASGPR is successfully clone into Saccharomyces cerevisiae Y258. The recombinant autoantigen owns good antigenicity and specificity. ELISA established with the purified protein shows good specificity for diagnosis of AIH.     

高密度蛋白微阵列芯片技术及其在疾病研究中的应用

许多具有高通量特点的蛋白质组学分析技术成为大规模研究蛋白分子间相互作用,快速高效地揭示机体许多生命活动现象的必备手段,并在近几年得到迅猛发展,高密度蛋白微阵列芯片(Protein microarrays chip)技术就是其中之一。大规模同时检测分析一个物种的蛋白,以及对这些蛋白进行亚细胞定位和相关功能的分析,同时提供不同蛋白间的相互作用是高密度蛋白微阵列芯片的用途之一。     

中国四川一个系统性红斑狼疮家系蛋白指纹图谱的表达研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)家系蛋白质指纹图谱的表达,寻找与SLE家族遗传相关的蛋白质标志物.方法 采用弱阳离子纳米磁性微球捕获血清蛋白,ProteinChip PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读仪检测7例中国四川地区SLE家系成员(包括3例确诊SLE患者)、63例散发SLE及83例健康体检者血清蛋白指纹图谱,所有蛋白指纹图谱采用Biomarker Wizard 3.10软件分析.结果 在SLE家系筛选出4个与散发SLE患者和健康对照者有明显差异的蛋白峰,其中质荷比(m/z)为9342.23的蛋白峰在SLE家系高于散发SLE患者和健康对照组(P<0.05),散发SLE患者又高于健康对照组(P<0.05);而m/z为4094.03、5905.35和 7973.53的3个蛋白峰在SLE家系低于散发SLE患者和健康对照组(P<0.05),散发SLE患者又低于健康对照组(P<0.05).结论 m/z为9342.23、4094.03、5905.35和7973.53的蛋白多肽在SLE家族成员致病中可能起重要作用,m/z为9342.23的蛋白表达越高,4094.03、 5905.35和 7973.53蛋白质表达越低,患SLE的危险度越大.这些蛋白可能成为SLE特异标志物,从而预测SLE的患病危险度,同时为SLE的生物治疗提供理论依据.     

应用SELDI质谱技术筛选胰腺癌患者的血清标志蛋白

目的:探讨应用SELDI质谱技术对胰腺癌患者血清中特异性标志蛋白的筛选方法。方法:采用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术，选择WCX磁珠及蛋白芯片阅读机对胰腺癌及健康人(对照组)和胰腺良性疾病组的血清进行检测，以筛选胰腺癌患者血清中特异表达差异蛋白。结果:发现胰腺癌血清表达差异的潜在标志物（蛋白）4个，相对分子质量分别为5 705 Da，4 935 Da,5 318 Da和3243 Da，其中4 935 Da，3 243 Da差异表达蛋白质在对照组中低表达，而在胰腺癌组中高表达，5 705 Da和5 318 Da差异表达蛋白质在胰腺癌组中低表达而对照组中高表达。结论:应用SELDI技术筛选胰腺癌患者血清中的特异性生物标记物的方法快速、有效;检测到的4个差异蛋白质可能是胰腺癌患者血清特异性生物标记物。     

Diagnosis of tumor-like polypoid lesions of gallbladder by serum proteomic fingerprint

Objective:To search the specific serum proteins in tumor-like polypoid lesions of the gallbladder(PLG)patients. Methods:Surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry (SELDI-TOF-MS)technique and WCX Magnetic Beads were used to detect the serum proteomic fingerprint of 23 patients with tumor-like PLG,21 patients with non tumor-like PLG and 26 normal persons.Biomarker Wizard and Biomarker Patterns Software were used in combination to analyze the data.Results:In the preliminar...     

改变我行医的一次就诊

医生通常理所当然地从自己的角度而不是病人的角度来看待问题。然而，一个偶然的角色互挟往往可以让人受益非浅，比如我最近的一次牙病就诊。治疗本身非常简单，但是当我坐在病人位置上（桌子的另一边）的时候，令我深受触动的是许多装饰在这位牙科医生桌子和墙上的医药公司赠送的礼品，这些礼品主要来自于X牌的牙膏商。我想：作为一个诊室，这些都不足为奇，我的诊室与此也并没有什么很大的差别——一个笔筒、一盒纸巾和一个友好的医药代表赠送的台历，仅此而已。在我就诊结束的时候，我问牙医：像我这样敏感的牙龈使用哪种牙膏好呢。他说：“X牌牙膏当然是现有的最适合你的了。”这下让我意识到了我自己以前的医疗行为和由此可能传递给病人的信息。[第一段]     

抗中性粒细胞胞浆抗体荧光核型与靶抗原不符的特殊情况分析

目的分析血清中胞质型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)和核周型抗中性粒细胞胞浆抗体(pANCA)荧光模型与靶抗原不相符的情况,探讨其临床意义。方法用间接免疫荧光法(IIF)检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)荧光模型cANCA、pANCA,用ELISA法检测靶抗原髓过氧化物酶(MPO)、蛋白酶3(PR3)。将pANCA合并MPO阳性、cANCA合并PR3阳性以外ANCA荧光模型以及靶抗原同时有阳性的其他特殊情况定义为ANCA荧光模型与靶抗原不相符,分析2017年4月至2019年4月北京协和医院ANCA荧光模型与靶抗原不相符患者的临床资料。结果 pANCA合并PR3阳性的患者组中,年龄(44.20±17.25)岁,诊断为溃疡性结肠炎(UC)的占56.8%,ANCA相关性血管炎占15.2%,其中诊断为UC与非UC的患者的年龄分布差异有统计学意义(χ~2=13.42,P=0.001)。pANCA合并MPO、PR3阳性的患者组中,年龄(58.20±14.05)岁,诊断为ANCA相关性血管炎的最多,占48.3%。cANCA合并MPO阳性患者组中,年龄(56.06±20.39)岁,诊断为ANCA相关性血管炎的占61.8%,间质性肺炎以及甲状腺亢进各占8.8%。结论 pANCA、PR3阳性可作为UC的敏感性指标,pANCA、MPO、PR3阳性及cANCA、MPO阳性也可作为ANCA相关性血管炎的指标。