miR-31在结直肠癌患者血清中的表达及对结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响

背景与目的：microRNA与肿瘤关系密切,血清miRNAs可以作为筛选和监测结直肠癌的有效指标。该研究旨在检测结直肠癌患者血清中miR-31的表达水平,并分析miR-31对结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：收集40例结直肠癌患者和35例健康人群作为对照,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR),检测其血清miR-31的表达水平,并分析结直肠癌患者血清miR-31的表达水平与临床病理特征之间的关系。采用脂质体转染将miR-31模拟物(miR-31 mimics)和抑制剂(miR-31 inhibitor)转染到HCT116细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及周期改变。结果：结直肠癌患者血清中miR-31的表达显著高于健康对照组,miR-31表达与结直肠癌分化程度有关。转染miR-31mimics组HCT116细胞生长增快,而转染miR-31抑制剂后细胞增殖能力明显降低(P＜0.01);同时miR-31mimics组细胞凋亡所占比例较miR-31抑制剂组和阴性对照组(miR-control,NC)明显减少,尤其是晚期凋亡细胞减少为著;转染miR-31抑制剂组,G1期细胞较miR-31 mimics组和NC组明显增多。结论：miR-31在结直肠癌患者血清中表达显著上调,miR-31可能通过促进结肠癌细胞增殖、抑制细胞凋亡而参与了结直肠癌的发展进程,有望成为结直肠癌诊断的标志物。     

结直肠癌中miR-31的表达及预测靶基因的生物信息学分析

目的 检测microRNA-31（miR-31）在结直肠癌中的表达及功能,预测其靶基因并进行生物信息学分析,为研究其作用和调控机制奠定基础。方法 采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测8种结肠癌细胞株、40例结直肠癌（colorectal cancer, CRC）患者癌组织及匹配的正常黏膜组织及33例结直肠腺瘤组织中miR-31的表达情况,并分析癌组织中miR-31表达与患者临床特征的关系。MTS法观察转染miR-31模拟物（mimics）组、抑制剂（inhibitor）组和对照组（miRControl）及空白细胞组细胞生长的差异,Western blot检测空白细胞组、miR-31 mimics和inhibitor三组细胞PCNA蛋白的表达。TargetScan、DIANA-microT、miRanda等软件预测miR-31的靶基因,并进行KEGG功能和信号通路富集分析。结果 miR-31在8种结肠癌细胞株中高表达,同时CRC患者癌组织中的表达高于腺瘤及正常黏膜组织（P<0.05）。其中癌组织和匹配的正常黏膜相比,miR-31表达明显上调（P=0.035）,但腺瘤和正常黏膜相比,差异无统计学意义（t=0.122, P=0.904）。miR-31的表达与临床病理特征间未见明显关系（P均＞0.05）。转染miR-31 mimics后,miR-31的表达明显上调且和miR-Control组及空白细胞组相比,miR-31 mimics组细胞生长加快;而转染miR-31 inhibitor组miR-31表达显著降低,细胞生长活力明显受抑制。同时转染miR-31 inhibitor组PCNA蛋白表达较miR-31 mimics组和空白细胞组显著降低。生物信息学分析miR-31靶基因功能集中于转录后及翻译水平的调节、细胞连接、迁移及细胞运动等生物学过程。信号通路主要富集于内吞作用、轴突导向、T细胞受体信号通路、Wnt及MAPK信号通路。结论 miR-31在结直肠癌中高表达,且miR-31可以促进细胞生长和增殖,其靶基因可能通过调节多种生物学过程发挥作用。