TLR4在宫颈癌与不同HPV亚型宫颈癌细胞株中表达及意义

目的 探讨TLR4在正常宫颈组织、宫颈上皮不典型增生、宫颈癌组织以及不同HPV亚型宫颈癌细胞株中表达与意义.方法 采用SP免疫组织化(IHC)检测TLR4在12例正常宫颈组织、30例宫颈轻度不典型增生(cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ,CINⅠ)、30例宫颈中-重度不典型增生(...     

三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用

背景与目的:shRNA技术是近来发展的热点技术之一,但普遍采用的单位点shRNA干扰载体效果并不理想.本研究探讨三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用.方法:构建外源基因DsRed全长载体转染HEK293细胞.针对报告基因DsRed设计4个干扰载体,一个含有3段shRNA,另外3个分别含有此3段中1段shRNA.转染293/DsRed,荧光显微镜观察基因DsRed.应用实时定量PCR(Real-time PCR)和流式细胞仪(FACS)检测4个载体对DsRed基因在mRNA及蛋白水平干扰效应.结果:4个载体对靶基因DsRed在mRNA及蛋白水平均有干扰效应,且含有3段shRNA载体对DsRed基因干扰效率为(89±16)%,显著高于3个只含有1段shRNA载体[(50±23)%,(52±15)%,(55±27)%],差异有显著性(P<0.05).结论:三位点shRNA干扰载体可以提高对靶基因的干扰效率.     

Relationship between the expression of thymidylate synthase,thymidine phosphorylase and dihydropyrimidine dehydrogenase and survival in epithelial ovarian cancer

The mRNA and protein expression of thymidylate synthase (TS), thymidine phosphorylase (TP) and dihydropyrimidine dehydrogenase (DPD) and their relationship with prognosis were investigated. Real-time quantitative RT-PCR (Taqman) was used to detect the mRNA expression of TS, TP and DPD in formalin-fixed and paraffin-embedded 106 samples of epithelial ovarian cancer and 29 normal ovaries. A TATA box-binding protein (TBP) was used as an endogenous reference gene. A relationship between TS, TP, DPD expression a...     

腹膜间皮细胞和卵巢癌细胞A2780的相互作用及对顺铂敏感性的变化

[目的]探讨卵巢癌细胞 A2780 与卵巢癌患者的腹膜间皮细胞( HPMC )非接触共培养前后Akt2 基因水平改变及对顺铂敏感性的变化.[方法]原代培养卵巢癌患者的 HPMC与卵巢癌细胞 A2780 非接触性共同培养24 h,观察细胞形态学变化,收集细胞后,分别利用半定量Real-time PCR 法、Western...     

Stathmin在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义

背景与目的:Stathmin是一种重要的微管调节蛋白,参与多种肿瘤的发生、发展.本研究旨在验证并探讨Stathmin在上皮性卵巢癌中的表达及意义.方法:利用免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测22例卵巢正常上皮组织,16例良性肿瘤和50例上皮性卵巢癌组织中Stathmin的表达.结果:上皮性卵巢癌中Stathmin mRNA的表达明显高于卵巢良性肿瘤(P<0.05)和正常卵巢上皮(PO.05).进一步利用x2检验统计分析得出,Stathmin蛋白与卵巢癌的临床分期、病理分级、淋巴转移相关(P<0.05),而与年龄、病理类型及腹水量无相关性(P>0.05).结论:Stathmin在上皮性卵巢癌中高表达,可能与卵巢癌的发生、发展相关.     

HSP27在卵巢癌顺铂耐药细胞系中的作用

目的探讨HSP27在卵巢癌耐药细胞系及敏感细胞系中的表达及其在卵巢癌顺铂耐药中的作用。方法通过 RT-PCR及Western blot检测卵巢癌细胞株OV2008和CI3K中HSP27 mRNA和蛋白的表达水平;将合成的针对HSP27基因的特异性siRNA及正义真核表达质粒pEGFP-C1-HSP27(命为p-HSP27),分别转染CI3K和OV2008细胞。通过RT-PCR及Western blot检测转染前后CI3K及OV2008细胞中HSP27 mRNA和蛋白表达的变化;MTT及流式细胞仪分别测定转染前后CI3K及OV2008细胞对顺铂敏感度的变化。结果(1)HSP27 在CI3K细胞中的mRNA和蛋白表达水平显著高于OV2008细胞,差异有统计学意义(P<0.05);(2)转染siRNA 48 h,CI3K细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50 )明显低于转染空载体和未转染的CI3K细胞(P<0.05);转染正义质粒p-HSP27 48 h,OV2008细胞对顺铂的IC50明显高于转染空载体和未转染的OV2008细胞(P<0.05);(3)转染siRNA及正义质粒 48 h,再用顺铂作用CI3K细胞24 h。转染siRNA的CI3K细胞的凋亡率比转染空载体和未转染的CI3K细胞的凋亡率明显增加,前者明显高于后两者(P<0.05);转染正义质粒的OV2008细胞的凋亡率比转染空载体和未转染的细胞的凋亡率明显下降,前者明显低于后两者(P<0.05)。结论CI3K及OV2008细胞内 HSP27基因表达的强弱可影响其对顺铂的敏感度,提示HSP27可能在卵巢癌顺铂耐药中起重要作用。     

CD90作为卵巢癌干细胞标志物的相关研究

目的 研究 CD90 作为分选卵巢癌干细胞标志物的可行性。方法 选择笔者实验室制备的人卵巢癌顺铂耐药细胞株 SKOV3-MD3,采用 CD90 单抗染色,应用流式细胞仪分选获得 CD90⁺ 细胞及 CD90-细胞。体外实验检测两个不同亚群细胞的体外悬浮球形成能力(自我更新能力)、分化潜能、表达干细胞标志物的差异,体内动物实验检测不同亚群细胞皮下成瘤能力是否有差异。结果 人卵巢癌细胞 SKOV3-MD3 中存在具有干性特征的 CD90⁺ 细胞,CD90⁺ 细胞比CD90- 细胞具有更高的体外悬浮球形成能力(自我更新能力)及分化潜能,表达更高水平的干细胞标志物,以及具有更强的皮下成瘤能力,差异有统计学意义。结论 CD90 可能是分选卵巢癌干细胞的分子学标志物。     

多囊卵巢综合征患者血清中内皮素-1､血管生成素样蛋白2与卵巢间质血流的关系

目的探究多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清中内皮素-1(ET-1)?血管生成素样蛋白2(Angptl2)的表达与卵巢间质血流的关系。方法选取2018年3月至2020年8月于华中科技大学同济医学院附属同济医院就诊的197例PCOS患者作为PCOS组,根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为两组,HOMA-IR≥2.69者为胰岛素抵抗组(PCOS-IR组,n=95),HOMA-IR<2.69者为非胰岛素抵抗组(P-COS-NIR组,n=102)。另选取同期就诊于同一医院的100例健康女性作为对照组。测定所有研究对象血清中的ET-1?Angptl2水平,应用彩色多普勒超声仪在采血当日行卵巢间质血流指标监测,并计算峰值血流速度(PSV)?搏动指数(PI)和阻力指数(RI)。采用Pearson检验分析PCOS患者ET-1?Angptl2与卵巢间质血流指标的相关性,应用多元Logistic回归模型,分析PCOS患者卵巢间质血流指标的影响因素。结果与对照组比较,PCOS组PI?RI明显偏低,而ET-1?Angptl2?PSV?HOMA-IR则明显偏高,差异具有统计学意义(P<0.01);与PCOS-NIR组比较,PCOS-IR组PI?RI明显偏低,而ET-1?Angptl2?PSV?HOMA-IR则明显偏高,差异具有统计学意义(P<0.01);Pearson相关分析结果显示,ET-1?Angptl2与PI?RI均呈直线负相关(P<0.01),ET-1?Angptl2与PSV?HOMA-IR均呈直线正相关(P<0.01),同时ET-1?An-gptl2二者呈直线正相关(P<0.01);多元Logistic回归分析结果显示,ET-1?Angptl2?HOMA-IR是PCOS患者卵巢间质血流的相关影响因素。结论ET-1?Angptl2在PCOS患者血清中呈高表达,二者之间呈直线正相关,并随着PCOS患者胰岛素抵抗的增加而升高;二者表达失衡在PCOS患者卵巢间质血流异常增多中扮演着关键角色,可为治疗PCOS开辟新的思路。