髓细胞条件性METTL3基因敲除小鼠的构建与鉴定

目的:构建髓细胞条件性METTL3基因敲除小鼠模型。方法:将Lyz2-cre~((+/+))雌性小鼠与METTL3~((flox/flox))雄性小鼠杂交,得到METTL3~((flox/-))Lyz2-cre~((+/-))杂合子小鼠,该杂合子小鼠自交,得到METTL3~((flox/flox))Lyz2-cre~((+/+))小鼠。提取小鼠鼠尾组织DNA,经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳和DNA序列测定,在DNA水平判断小鼠基因型;提取小鼠骨髓细胞RNA,利用RT-PCR法检验METTL3的敲除效率;利用成像流式细胞仪在蛋白水平分析髓细胞中METTL3的敲除效率。结果与结论:在DNA、RNA和蛋白水平分别验证了髓细胞条件性METTL3基因敲除小鼠模型构建成功,该小鼠存活并且可育,为研究METTL3在髓源抑制性细胞功能中的作用提供了研究平台。     

髓源抑制性细胞的功能及其逆转策略

髓源抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cell,MDSC）是在骨髓中产生的一群具有高度异质性的免疫抑制细胞, 在 肿瘤等病理状态下大量聚集,是促进肿瘤进展、降低患者对传统治疗反应性的关键因素。近年来,免疫检查点阻断剂和基因工程 T细胞过继回输治疗延长了许多晚期恶性肿瘤患者的生存期,但上述免疫疗法在肺癌、结直肠癌等实体瘤中有效率仅为 15%~40%,这与实体瘤免疫抑制微环境密切相关。MDSC在肿瘤微环境中聚集,通过抑制T细胞或NK细胞增殖及功能减弱宿主 抗肿瘤免疫反应,是患者对免疫治疗耐受的关键机制。因此,明确MDSC聚集及功能特征是探索提高免疫治疗效果的重要研究 方向。本文将系统阐述MDSC的产生、聚集及其免疫抑制功能的调控机制,概述目前靶向MDSC治疗的最新研究进展。     

免疫系统人源化小鼠模型的研究进展

动物模型是生物医学科学研究中所建立的具有人类模拟性表现的动物材料,作为实验假说和临床假说的实验基础,可以缩短研究时间,观察疾病的发生、发展或预防与治疗的全过程,并可在人为控制条件下进行各种实验研究,对各种疾病的相关机制研究有着重要意义。人类的生物医学研究主要受限于生物体复杂性,为了克服这个限制,基于可接受异种移植物的严重联合免疫缺陷(SCID)或重组激活基因(Ragnull)无效小鼠的免疫缺陷特征开发人源化小鼠模型,这些具有人体免疫力的小鼠模型已被广泛用于研究人类免疫生物学的基本原理以及人类疾病的复杂病理的潜在机制。这种方法是促进医学科学发展的重要途径之一,具有实用性和前瞻性。本文将对人源化小鼠模型的应用及研究进展进行综述。     

食管癌患者外周血MAGE-C2抗原特异性CD8+T细胞的功能及临床意义

目的:评价食管癌患者外周血恶性黑色素瘤相关抗原(melanoma-associated antigen,MAGE)-C2抗原特异性CD8+T细胞的功能,并分析其与临床病理参数的相关性.方法:密度梯度离心法获取130例食管癌初治患者(收集自2014年11月至2015年11月郑州大学第一附属医院胸外科)的PBMC,流式细胞术、RT-PCR方法筛选HLA-A2* 0201和MAGE-C2共阳性的患者,其PBMC培养7、14 d后加MAGE-C2(336-344)抗原肽1μg/m1、IL-2 100 μg/ml和CD3/CD28 Dynabeads 2μl处理,诱导扩增抗原特异性CD8+T细胞,流式细胞术检测CD8+T细胞表面CD107a和胞内IFN-γ的水平,并分析其与临床参数的相关性.结果:筛选出52例HLA-A2* 0201和MAGE-C2共阳性的患者,MAGE-C2(336-344)处理其PBMC后,MAGE-C2(336-344)处理组CD8+T细胞中CD107a+ IFN-γ+,CD107a+ IFN-γ-和CD107a IFN-γ+细胞的比例明显升高(P＜0.05);CDI07a的表达在早期、未发生淋巴结转移和高分化的食管癌患者明显高于晚期、发生淋巴结转移和低分化的癌症患者(P＜0.05);IFN-γ的表达在高分化的食管癌患者明显高于低分化的食管癌患者(P＜0.05).结论:成功诱导扩增MAGE-C2抗原特异性CD8+T细胞,并发现其功能与食管癌的分期和淋巴结转移相关,似可作为一种理想的免疫治疗靶点.     

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS的PD-1抑制剂治疗的晚期肺腺癌患者血清代谢组学研究

目的:探索晚期肺腺癌患者化疗联合免疫治疗前后的差异代谢物及代谢通路,为评估预后寻找生物指标。方法:利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,对14例晚期肺腺癌患者在第1次使用化疗联合PD-1抑制剂治疗前3 d的血清以及治疗2周期后的血清进行代谢组学分析。通过对采集得到的图谱进行峰识别和匹配等相关处理,应用主成分和正交偏最小二乘法-判别分析对代谢组学的数据进行分析,筛选出重要变量性投影>1和P<0.05的差异代谢物,并筛选代谢通路。结果:治疗前后血清代谢物质有明显差异,治疗后患者血清代谢物中谷氨酰丝氨酸、脯氨酸、犬尿氨酸、脱氢抗坏血酸、N-硬脂酰鞘磷脂、5-羟基吲哚乙酸水平升高;色氨酸、亮氨酰脯氨酸、柠檬酸、硬脂酸、吲哚丙烯酸、丙酰肉碱、吲哚、3-甲基吲哚水平降低。色氨酸代谢通路是治疗前后的差异代谢通路。结论:犬尿氨酸/色氨酸比值可能作为评估PD-1抑制剂治疗的晚期肺腺癌患者预后的生物指标。     

中性粒细胞淋巴细胞比值和淋巴细胞单核细胞比值对PD-1抑制剂治疗的晚期非小细胞肺癌患者预后的预测价值

目的:探讨中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)与淋巴细胞单核细胞比值(LMR)对PD-1抑制剂治疗的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的预测价值。方法:回顾性分析2015年1月至2021年1月于郑州大学第一附属医院接受PD-1抑制剂治疗的75例NSCLC患者的资料,将其分为治疗前NLR<5组和NLR≥5组,LMR<1.5组和LMR≥1.5组,比较不同组别患者疾病控制率、客观缓解率的差异;采用Cox回归分析LMR对PD-1抑制剂治疗的NSCLC患者预后的预测价值。结果:NLR<5组与LMR≥1.5组有更高的疾病控制率(P<0.05)。Cox回归分析显示,早期给予免疫治疗(HR=0.345,95%CI:0.183～0.650)、LMR≥1.5(HR=0.327,95%CI:0.168～0.638)是NSCLC患者PFS生存获益的预测因素。结论:NLR、LMR可用于PD-1抑制剂治疗晚期NSCLC预后的预测。