人胰腺癌干细胞差异性基因的表达

目的 分选、鉴定人胰腺癌干细胞,运用基因芯片技术分析其差异性基因的表达.方法 运用流式分选技术分选胰腺癌干细胞(CD24+CD44+ESA+),NOD/SCID鼠移植瘤试验进行肿瘤干细胞特性鉴定.采用Affymetrix U133 plus2.0人类全基因组表达谱芯片对胰腺癌干细胞和非干细胞进行差异基因筛选.结果 分选得到人胰腺癌CD24+CD44+ESA+亚群细胞,占所有细胞的0.8%;5×103个CD24+CD44+ESA+细胞就能成瘤(2/4),而阴性细胞1×105才能成瘤(1/4);CD24+CD44+ESA+具有一定的自我更新和分化能力.基因芯片杂交获得6553(11.99%)条差异基因,胰腺癌干细胞中5255(9.61%)条上调表达,1298(2.37%)条下调表达.其中差异基因涉及细胞凋亡、细胞周期、代谢、细胞线粒体结构和耐药等多个方面.结论 胰腺癌于细胞具有自身特征性基因表达谱,为进一步从干细胞层面研究胰腺癌发病机制及靶向治疗奠定基础.     

miR-486-5p通过负向调控AMPK/Sirt1信号通路参与肝细胞性肝癌细胞增殖

目的:探究miR-486-5p在肝细胞性肝癌(HCC)中的变化及其调节HCC细胞系增殖的可能机制。方法:q-PCR法检测98例健康人血浆和87例HCC患者组织与血浆miR-486-5p含量,并采用Pearson相关性分析其与甲胎蛋白(AFP)升高的相关性,同时检测人HCC癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、MHCC97、HepG2、Hep3B、Huh-7、MS751和正常肝细胞LO2细胞及转染0,25,50,100μmol/L miR-486-5p类似物(miR-486-5p mimic) 24 h后LO2、MHCC97、HepG2和Huh-7细胞的miR-486-5p含量;CCK-8法检测转染miR-486-5p类似物2,12,24,48,72 h的LO2、MHCC97、HepG2和Huh-7细胞的增殖率;Western Blot检测Cyclin D1、Cyclin E1、CDK4、CDK6、p-AMPK、AMPK和Sirt1蛋白表达量;qPCR检测转染CCND1、CCNE、CDK4、CDK6 mRNA表达量。结果:HCC患者癌组织miR-486-5p含量明显低于癌旁组织,血浆中miR-486-5p含量明显低于正常人;HCC患者癌组织和血浆中miR-486-5p含量与血浆AFP含量呈显著负相关性,相关系数分别为-0. 1554和-0. 2228(P<0. 001);除Huh-7细胞外,人HCC癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、MHCC97、HepG2、Hep3B和MS751细胞中miR-486-5p含量明显低于LO2细胞(P<0. 05);相比于阴性对照类似物(NC)处理组,0至100μmol/L的miR-486-5p类似物处理LO2和Huh-7细胞24 h组的miR-486-5p水平均没有明显的变化(P>0. 05),50μmol/L和100μmol/L的miR-486-5p类似物处理24 h的MHCC97和HepG2细胞,相比于NC处理组,其miR-486-5p水平均显著增加(P<0. 05);miR-486-5p类似物处理LO2组的增殖率相比于NC和Control组无明显的变化。相比于NC和Control组,miR-486-5p类似物处理HepG2和MHCC97细胞24 h的增殖率相比于2 h的显著降低,分别为(77. 70±7. 53)%和(86. 61±1. 08)%。且具有时间依赖性。而miR-486-5p类似物处理Huh-7细胞48 h组增殖率为(84. 79±2. 33)%,明显低于2 h组;miR-486-5p类似物转染HepG2和MHCC97细胞24 h的Cyclin D1、Cyclin E、CDK6蛋白与mRNA表达量明显低于NC组(P<0. 05),HepG2的miR-486-5p类似物处理CDK4相比于NC组无明显变化(P>0. 05),MHCC97的miR-486-5p类似物组CDK4相比于NC组明显降低(P<0. 05)。p-AMPK与Sirt1蛋白水平均明显低于NC组。结论:过表达miR-486-5p通过下调p-AMPK/Sirt1通路阻断HCC肿瘤细胞细胞周期,并抑制癌细胞增殖。     

胰腺癌细胞转染hSSTR2基因对下游波形蛋白表达的影响及其意义

目的 探讨生长抑素2型受体(Hsstr2)基因转染胰腺癌细胞对下游蛋白表达的影响及其意义.方法 利用腺病毒载体Ad.CMV.Hsstr2.GFP将Hsstr2全长Cdna导入胰腺癌细胞Panc-1;采用荧光差异双向凝胶电泳技术分离并筛选Hsstr2基因转染胰腺癌细胞前后差异表达蛋白;用反射式基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱鉴定差异蛋白.利用免疫印迹验证差异表达的波形蛋白;采用免疫组化检测波形蛋白在胰腺癌组织中的表达,并分析其临床意义.结果 有统计学意义的差异蛋白质点21个;选择1.3倍以上的差异点18个,经质谱鉴定得到13个蛋白质,包括翻译调节蛋白、代谢酶类、与细胞通讯信号传导相关蛋白、细胞结构蛋白、分子伴侣、具有GTPase活性的蛋白及动力蛋白等.波形蛋白在胰腺癌细胞转染Hsstr2基因后表达降低,免疫组化显示波形蛋白主要在低分化的胰腺癌细胞中高表达.结论 筛选的波形蛋白等差异蛋白可能成为新的胰腺癌敏感治疗靶点.波形蛋白也可能成为预测肿瘤恶性程度的一个指标.     

胰岛素瘤的诊断与治疗（附38例临床分析）

目的 总结胰岛素瘤的诊断和治疗经验.方法 收集我院1988年10月至2008年10月收治的38例胰岛素瘤的临床资料,对其临床表现、诊断和治疗方法 进行回顾性分析.结果 全组38例患者均表现Whipple三联征.术前定位检查发现胰岛素瘤阳性率分别为:经腹超声 78.95%,CT 54.17%,MRI 33.33%,EUS 100.00%,DSA 40.00%.术中B超联合扪诊检查阳性率90.00%.其中34例患者在我院接受手术治疗37次,包括胰岛素瘤局部摘除术28次,胰体尾 (或胰尾)切除术5次,胰体尾 (或胰尾)加脾切除3次.术后病理证实单发良性肿瘤32例,多发1例,有恶性倾向1例.肿瘤完全切除的患者术后低血糖症状消失.术后胰瘘5例,均经非手术治疗痊愈.结论 Whipple三联征和反应性胰岛素/血糖＞0.3是定性诊断的主要依据,术前诊断阳性率较高的是EUS、经腹超声和CT,术中扪诊联合术中超声是最有效的肿瘤定位手段,肿瘤摘除术仍为胰岛素瘤的主要术式.     

人胰腺癌干细胞差异性基因的表达

目的 分选、鉴定人胰腺癌干细胞,运用基因芯片技术分析其差异性基因的表达.方法 运用流式分选技术分选胰腺癌干细胞(CD24+CD44+ESA+),NOD/SCID鼠移植瘤试验进行肿瘤干细胞特性鉴定.采用Affymetrix U133 plus2.0人类全基因组表达谱芯片对胰腺癌干细胞和非干细胞进行差异基因筛选.结果 分选得到人胰腺癌CD24+CD44+ESA+亚群细胞,占所有细胞的0.8%;5×103个CD24+CD44+ESA+细胞就能成瘤(2/4),而阴性细胞1×105才能成瘤(1/4);CD24+CD44+ESA+具有一定的自我更新和分化能力.基因芯片杂交获得6553(11.99%)条差异基因,胰腺癌干细胞中5255(9.61%)条上调表达,1298(2.37%)条下调表达.其中差异基因涉及细胞凋亡、细胞周期、代谢、细胞线粒体结构和耐药等多个方面.结论 胰腺癌于细胞具有自身特征性基因表达谱,为进一步从干细胞层面研究胰腺癌发病机制及靶向治疗奠定基础.     

人胰腺癌干细胞差异性基因的表达

目的 分选、鉴定人胰腺癌干细胞,运用基因芯片技术分析其差异性基因的表达.方法 运用流式分选技术分选胰腺癌干细胞(CD24+CD44+ESA+),NOD/SCID鼠移植瘤试验进行肿瘤干细胞特性鉴定.采用Affymetrix U133 plus2.0人类全基因组表达谱芯片对胰腺癌干细胞和非干细胞进行差异基因筛选.结果 分选得到人胰腺癌CD24+CD44+ESA+亚群细胞,占所有细胞的0.8%;5×103个CD24+CD44+ESA+细胞就能成瘤(2/4),而阴性细胞1×105才能成瘤(1/4);CD24+CD44+ESA+具有一定的自我更新和分化能力.基因芯片杂交获得6553(11.99%)条差异基因,胰腺癌干细胞中5255(9.61%)条上调表达,1298(2.37%)条下调表达.其中差异基因涉及细胞凋亡、细胞周期、代谢、细胞线粒体结构和耐药等多个方面.结论 胰腺癌于细胞具有自身特征性基因表达谱,为进一步从干细胞层面研究胰腺癌发病机制及靶向治疗奠定基础.     

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先天性胆管扩张症(congenital biliary dilatation,CBD)[1]是临床上所见的先天性胆道部分呈囊性或梭形扩张,其可发生于肝内外胆管的任何部位,因好发于胆总管,亦称为先天性胆总管囊肿。1723年由Vater首次报告,本病具有癌变倾向。CBD以婴幼儿和年轻人多见,好发于东方国家,男女之比为1∶3～4。目前其病因未完全明了,可能有:(1)先天性胰胆管合流异常(pancreaticobiliary maljunction,PBM)[2];(2)先天性胆道发育异常;(3)遗传因素等。     

微创置管引流对重症急性胰腺炎早期炎症反应的影响

目的:探讨微创置管引流对重症急性胰腺炎(SAP)患者早期炎症反应的疗效。方法:将57例SAP且有腹腔积液患者,采用随机数表法分为微创置管引流治疗组(观察组,29例)和常规治疗组(对照组,28例)。两组均给予相同的基础治疗,观察组给予微创置管引流,对照组给予B超引导下穿刺置管引流。检测两组患者治疗前后TNF-α,IL-6,IL-8及C反应蛋白(CRP)等急性炎症指标,并观察肠道功能恢复时间,全身炎症反应综合征(SIRS)持续时间及多器官功能不全综合征(MODS)的发生率。结果:两组患者均有急性炎症反应发生。两组血清炎症指标术后均不同程度逐渐降低,观察组引流后第3,7天TNF-α,IL-6及CRP的水平与对照组比较明显下降(均P<0.05),而血清IL-8引流后第7天明显低于对照组(P<0.05);观察组肠道功能恢复时间、SIRS持续时间均明显短于对照组的(均P<0.01);观察组MODS发生率(13.8%)也明显低于对照组(28.6%)(P<0.01)。结论:微创置管引流治疗SAP,能明显减轻早期炎症反应,促进肠道功能恢复,降低MODS的发生率。     

内镜超声引导下细针穿刺活检诊断上消化道壁外占位性病变的价值

目的 探讨内镜超声引导下细针穿刺活检(EUS-FNA)在上消化道壁外占位性病变(胰腺、纵隔、腹膜后占位)诊断中的应用价值.方法 回顾性总结行EUS-FNA检查的33例胰腺占位、25例纵隔占位和13例腹膜后占位患者的临床资料,以手术病理或6个月临床随访结果作为最终诊断,统计EUS-FNA对不同分类上消化道壁外恶性占位诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确率.结果 EUS-FNA诊断上消化道壁外恶性占位的总体敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率分别为82.2％(37/45)、100.0％(26/26)、100.0％(37/37)、76.5％(26/34)、88.7％(63/71),且分别诊断胰腺、纵隔、腹膜后恶性占位的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率均较高.病灶直径＞3 cm恶性占位EUS-FNA诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确率分别为81.0％(17/21)、100.0％(13/13)、100.0％(17/17)、76.5％(13/17)、88.2％(30/34),病灶直径≤3 cm恶性占位的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确率分别为83.3％(20/24)、100.0％(13/13)、100.0％ (20/20)、76.5％ (13/17)、89.2％(33/37),两者比较差异均无统计学意义(P＞0.05).71例患者均未出现出血、穿孔、胰腺炎、胰瘘及感染、胸痛、气胸等并发症.结论 EUS-FNA是一种安全、准确、有效地诊断上消化道壁外占位性病变的方法,且诊断准确率不受病灶大小的影响.