雌激素受体在卵巢癌发生发展中作用的研究进展

卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一.因缺乏有效的诊断方法,确诊时多为晚期,死亡率居妇科恶性肿瘤首位.大量流行病学调查已显示雌激素与卵巢癌的发生有关,而且在卵巢上皮肿瘤的病程进展中起重要作用,雌激素主要通过雌激素受体(ER)启动一系列的信号传导途径.因此,ER是雌激素与卵巢癌间的重要桥梁,对ER的研究有助于指导卵巢癌的临床治疗,就卵巢癌中ER自身状态及细胞因子对其影响综述.     

恶性肿瘤复发转移相关生物标记检测技术研究进展

复发转移是恶性肿瘤死亡的主要原因,发现高灵敏、特异的肿瘤标记物和提高复发转移的预测是检验医学面临的亟待解决的问题。肿瘤通过血循环复发转移时,脱落至外周血的肿瘤细胞、肿瘤组织代谢及机体的抗肿瘤反应产物(核苷酸、蛋白)促外周血发生特异的表达谱改变;相应的检测技术应运而生并不断发展。现对复发转移相关的循环肿瘤细胞、循环血游离核苷酸及蛋白多肽谱及其检测技术的进展作一综述。     

LRP16基因在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的:探讨LRP16在子宫内膜样腺癌(EEC)中的表达及与临床病理的相关性。方法:用免疫组化法检测76例EEC患者癌组织标本中LRP16和雌激素受体α(ERα)的表达水平。结果:LRP16核阳性率为67.11%(51/76),LRP16浆阳性率为96.05%(73/76),浆核均阳性占64.47%(49/76);ERα阳性占51.32%(39/76),阴性占48.68(37/76)。ERα阴性患者中LRP16核阳性率(86.49%,32/37)明显高于ERα阳性患者(48.71%,19/39)(P<0.01),且LRP16在胞核中表达与EEC患者的手术病理分期无显著相关性(P>0.05)。在胞浆中分布的LRP16与ERα表达无关(P>0.05),但胞浆中的LRP16与EEC的手术病理分期呈明显的负相关(P<0.01),与组织学分级则无显著相关性(P>0.05)。在LRP16核浆均阳性的病例中,ERα阴性患者(81.08%,30/37)的比例明显高于ERα阳性患者(48.72%,19/39)(P<0.01);且LRP16在核浆中均有表达与EEC患者的手术病理分期及组织学分级无显著相关性(P>0·05)。在EEC肿瘤细胞中核、浆分布的LRP16着色强度呈负相关(P<0.05)。结论:LRP16在EEC细胞中均有表达,但其亚细胞分布与ERα状态密切相关,LRP16在胞浆中的表达可能提示预后良好。     

多指标联合应用区分A FP阴性肝细胞癌与肝硬化模型的建立

目的： AFP阴性肝细胞癌与肝硬化常难以区分。本研究中,我们探讨利用肝脏病患者各类实验室指标根据生物信息学建立区分A FP阴性肝细胞癌与肝硬化的诊断模型理念。方法通过检测肝病患者肝功、肿瘤标记物等24项指标,采用生物信息学线性SVM算法及十折交叉确认法进行生物信息学分析。结果24项临床指标中 ALT、TBil、DBil、GGT、GP73、CA125、FIB、AFP、PT、ALB在AFP（－）HCC与LC组间存在显著差异,单一指标区分两组的能力较低,ROC曲线下面积（AUROC）最高为FIB（AUROC＝0．748）;利用生物信息学处理各类指标并建立分类模型Y ＝－0．82× PT＋0．007CA125＋12．815,其AUROC可达到0．87。利用判别模型判断A FP阴性肝细胞癌的正确率为85．9％。结论临床实验室常规检测结果可通过生物信息学处理,建立更简便的临床辅助诊断模型。     

FHL2与Id蛋白相互作用的表位分析

目的：鉴定FHL2与Id家族蛋白成员之间的相互作用及分子表位。方法：GST-pulldown方法检测。结果：FHL2与Id家族的4个成员蛋白均存在直接的相互作用关系,FHL2蛋白中的第二个LIM结构域在FHL2／Id相互作用中是必需的,Id蛋白N端结构区域在介导FHL2／Id相互作用中是必需的。结论：FHL2是一个新识别的Id蛋白广谱相互作用因子,FHL2可能参与Id介导的多种生物学效应以及肿瘤发生与进展。     

SKOV3卵巢癌细胞中雌激素对LRP16的调控作用及其影响

目的：研究雌激素受体ER阳性的卵巢癌细胞系中,E2对LRP16的调控作用以及LRP16对细胞增殖的影响。方法：Northern Blot、Western Blot方法分别检测RNA、蛋白表达水平;生长曲线测定过表达或抑表达LRP16对SKOV3细胞生长特性的影响。结果：雌激素敏感的BG-1细胞系中,E2正调控LRP16的表达;而不同浓度雌激素处理雌激素不敏感SKOV3细胞,LRP16蛋白的表达下降,而ICI182 780对其作用相反;LRP16对SKOV3细胞的生长、增殖有微弱的调节作用。结论：在雌激素不敏感的SKOV3细胞系中,E2对LRP16的调节作用及LRP16发挥的生长调节作用与雌激素敏感的BG-1卵巢癌细胞系及乳腺癌体外研究结果不同。提示雌激素不敏感浆液性卵巢癌中E2对LRP16的调控可能存在新的机制,可能用来解释部分卵巢癌对内分泌治疗敏感性不同的原因。     

LRP16基因过表达对卵巢癌细胞H08910生长及E-钙黏着素的影响

目的：探讨过表达肿瘤相关基因LRP16对卵巢癌细胞株H08910生长的影响。方法：将含有LRP16基因真核表达载体pcDNA3．1-LRP16及空载体质粒转染卵巢上皮癌细胞株H08910使其稳定过表达,用MTT法测各组细胞生长曲线,用Westernblot方法检测E-钙黏着素（E—cadherin）蛋白的表达。结果：LRP16基因过表达对H08910细胞增殖无影响,LRP16基因过表达的H08910细胞的E-钙黏着素（E—cadhefin）蛋白表达水平明显下降。结论：LRP16基因对卵巢上皮癌细胞H08910的增殖无影响,但使E-钙黏着素（E—cadhefin）表达明显下降。     

LRP16基因过表达对卵巢癌细胞HO8910生长及E-钙黏着素的影响

目的:探讨过表达肿瘤相关基因LRP16对卵巢癌细胞株HO8910生长的影响.方法:将含有LRP16基因真核表达载体pcDNA3.1-LRP16及空载体质粒转染卵巢上皮癌细胞株HO8910使其稳定过表达,用MTT法测各组细胞生长曲线,用Western blot方法检测E-钙黏着素(E-cadherin)蛋白的表达.结果:LRP16基因过表达对HO8910细胞增殖无影响,LRP16基因过表达的HO8910细胞的E-钙黏着素( E-cadherin)蛋白表达水平明显下降.结论:LRP16基因对卵巢上皮癌细胞HO8910的增殖无影响,但使E-钙黏着素( E-cadherin)表达明显下降.     

临床血清循环miRNAs定量技术的建立

目的建立可靠的临床血清（浆）循环miRNAs定量技术。方法常规收集血清（浆）标本,mirVana PARIS试剂盒法抽提血清（浆）总RNA,采用DNaseI消化总RNA提取液,以miRNAs特异性茎-环引物引导反转录,通过TaqMan实时荧光定量PCR对U6及靶miRNAs进行检测。结果10份新鲜血浆总RNA浓度介于3.5～35.4ng/μl之间。对常规收集的400μl临床血清标本中U6、miR-16、miR-224均能实现特异扩增及定量,相应的平均Ct值约为30、25及32。6份不同留置时间血清标本总RNA浓度分别10.24和4.46ng/μl,定量PCR结果显示其中相应miR-16和miR-224的丰度却相对稳定。结论血清（浆）总RNA抽提及循环miRNAs定量切实可行。     

HLH缺失型Id2候选相互作用蛋白

目的:筛选可以与螺旋-环-螺旋(HLH)结构域缺失的Id2相互作用的蛋白.方法:用重叠延伸PCR方法将Id2中的HLH结构域缺失,并插入到pGBKT7载体,构建 BD∶ Id2-DBM-δHLH融合诱饵质粒;构建MCF-7细胞的ds cDNA文库;采用共转化方法进行Id2-DBM-δHLH相互作用蛋白的酵母双杂交筛选,采用PCR方法扩增阳性克隆中的AD∶ cDNA序列并测序;将获得的AD∶ cDNA质粒分别与BD∶ Id2-DBM-δHLH诱饵质粒共转化酵母进行配对验证.结果:酵母双杂交方法共筛选到19个阳性克隆,PCR方法在这19个克隆中共扩增到28条片段,序列测定证实含18个不同的基因,对其中的13个进行配对验证后证实了其中8个与HLH缺失型Id2相互作用,这8个基因分别是:UXT、VIM、KRT7、FHL2、SEI1、PCBP1、SIVA和LSM2.结论:本研究首次利用HLH缺失型Id2作为诱饵,利用酵母双杂交技术筛选识别了一族新的Id2相互作用蛋白,为进一步研究Id2的功能调控以及非HLH依赖的功能活性奠定基础.