SARS冠状病毒棘突蛋白的S1蛋白诱导小鼠产生中和抗体的研究

目的 研究SARS冠状病毒棘突蛋白受体结合部位S1的免疫原性，为SARS的实验诊断和新型疫苗的研究提供依据。方法 用克隆有哺乳动物细胞密码子优化的SARS-CoV S1基因的质粒pcDNA3．1／S1或P-S1Ig转染293T细胞，用细胞的上清液纯化S1蛋白。以pcDNA3．1／S1质粒对BALB／c小鼠进行2次基因免疫，以纯化的S1蛋白进行加强免疫。用ELISA法检测小鼠抗SARS-CoV的特异性IgG抗体，并在Vero E6细胞上做体外中和实验，检测中和抗体。结果 S1蛋白诱导小鼠产生抗SARS-CoV的特异性抗体；1：1499．68稀释的S1蛋白免疫的小鼠血清可保护50％的细胞对1000TCID50的病毒攻击，而阴性对照血清不能保护细胞对病毒的感染。结论 SAPS冠状病毒棘突蛋白受体结合部位S1能有效诱导机体产生具有高效保护作用的中和抗体免疫反应，可望发展成为理想的SARS棘突蛋白亚单位疫苗。     

获得只针对家鼠型出血热病毒的单克隆抗体(简报)

我国目前主要有二种不同流行病特点,临床表现,动物宿主和抗原性的流行性出血热病毒。一种是由黑线姬鼠分离到的病毒,以A9株为代表,称野鼠型EHF病毒;一种是由褐家鼠分离到,以R_(22)株为代表,称家鼠型EHF病毒。用动物免疫血清和人恢复期血清、间接免疫荧光法无法将其区别,用中和实验法鉴别达二种病毒,相当费力费时。我们用杂交瘤技     

在我国从腹泻患儿粪便中分离到肠道腺病毒

在我国从腹泻患儿粪便中分离到肠道腺病毒赵锦铭，王树惠国外文献显示肠道腺病毒是小儿腹泻中仅次于轮状病毒的第二个主要病源，检出率波动于７％～１７％之间［１］。１９８１年Ｔａｋｉｆｆ等首次用Ｇｒａｈａｍ２９３细胞分离成功，推动了对肠道腺病毒的研究［２］。国...     

神经生长因子的药代动力学研究

 目的：研究神经生长因子(nerve growth factor,简称NGF)在小鼠体内的药代动力学。方法：〈sup〉125〈/sup〉I-NGF用氯胺T法制备经静注和肌注两种途径,血装中NGF的浓度采用同位素示踪结合三氯醋酸(TCA)沉淀法或SDA-PAGE电泳法,测定小鼠血浆NGF的浓度。结果：静注〈sup〉125〈/sup〉I-NGF 25 μg·kg〈sup〉-1〈/sup〉,电泳法测得消除半衰期t〈sub〉1/2β〈/sub〉为2.223 h,酸沉法为2.264 h。酸沉法为2.264 h。肌注〈sup〉125〈/sup〉I-NGF 75,25,10μg·kg〈sup〉-1〈/sup〉电泳法测得消除半衰期t〈sub〉1/2β〈/sub〉分别为2.140,2.331,3.173 h,酸沉法测得消除半衰期t分别为2.480,2.552,2.642 h,达峰时间t〈sub〉max〈/sub〉为0.583 h,电泳法和酸沉法测得〈sup〉125〈/sup〉I-NGF平均血装清除率(Cl)分别为0.321和0.332 L·h〈sup〉-1〈/sup〉·kg〈sup〉-1〈/sup〉表观分布容积(Vd)为1.259和1.315 L·kg〈sup〉-1〈/sup〉,体内平均滞留时间(MRT)为3.592和3.539 h。结论：NGF在体内消除半衰期较短。本研究为今后的临床应用提供了必要的参考资料。     

人白细胞介素23受体基因的克隆和原核表达

目的:从外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人白细胞介素23受体(hIL-23R)编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达.方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,应用RT-PCR技术,以PBMC的cDNA为模版,扩增出hIL-23R的编码区(1890bp),将其克隆至pMD 19-T 载体,经酶切和测序鉴定后,亚克隆于pGEX-4T-1中构建原核表达载体pGEX-4T-1-hIL-23R,转化大肠杆菌感受态细胞BL-21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,经Western-blot对融合蛋白进行鉴定.结果:获得了hIL-23R编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,其相对分子质量Mr为97KDa.结论:成功构建hIL-23R原核表达载体并在大肠杆菌中表达hIL-23R融合蛋白.     

犬腺病毒1型疫苗株DNA右末端序列分析

对ＣＬＬ（ｃａｎｎａｕｇｈｔｌａｂｏｒａｔｏｒｙｌｉｍｉｔｅｄ）ＤＮＡ的重要结构之一－－右末端序列进行检测分析,发现ＣＬＬ有一２３８ｂｌ１的末端倒置重复序列（ｉｎｖｅｒｔｅｄｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔｓ,ＩＴＲ）。在每一ＩＴＲ中含有３个拷贝的４０ｈｐ短重复序列,并认为４０ｂＰ短重复序列可能是病毒ＤＮＡ复制过程中病毒复制因子－－核素因子１（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ１,ＮＦ－１）结合位点,因而对病毒ＤＮＡ复制是必需结构。本实验结果对构建ＣＬＬ载体具有重要的指导意义。     

用三对引物检测血液中细菌DNA的方法学

目的建立稳定、敏感的检测血液中肠源性细菌 DNA的方法。方法取 23例腹部手术后体温 >38.5℃患者的肘静脉血进行血培养,并以酚抽提法提取全血 DNA进行 PCR,靶基因分别为大肠杆菌特异性的β-半糖苷酶基因、脆弱类杆菌特异性的谷氨酰胺合成酶基因,以及大多数细菌所共有的 16SrRNA基因。以标准菌株提取的 DNA为阳性对照,空白对照为阴性对照, 20例健康志愿者全血 DNA为正常对照。对 20例标本重复检测 2次以确定其复现性。结果 PCR复现率为 95％。血培养阳性率为 13.0％（ 3/23）, PCR检测阳性率为 43.5％（ 10/23）,较血培养阳性率高（ P=0.016）。结论按照规范进行的 PCR检测血液中肠源性细菌方法稳定,比血培养敏感。     

酵母三杂交技术的应用策略及在病毒研究中的应用

从酵母双杂交系统衍生出来的酵母三杂交系统是一种主要用于研究细胞内RNA-蛋白质相互作用强大的技术方法,也为病毒相关研究,尤其为研究病毒生活史中病毒RNA与病毒蛋白和宿主细胞蛋白的相互作用提供了新的工具。本文重点介绍了此种形式的酵母三杂交系统的原理、缺陷、应用和应用策略。另外,本文还介绍了同时发展起来的另外两种形式的酵母三杂交系统,即分别用于研究小分子配体-受体相互作用、复杂蛋白质相互作用的酵母三杂交系统。     

使命与奉献——祝贺顾方舟教授从医55周年

顾方舟教授是我国著名的老一辈医学科学家、病毒学家、教育家和社会活动家。他专门从事脊髓灰质炎研究40余载。他是中国研究脊髓灰质炎病毒和研发脊灰活疫苗的第一人，成绩卓著，名声斐然。1957年在国内首次用猴肾细胞培养法分离出脊灰病毒并定出型别，1959年开始研究脊灰减毒活疫苗。1959-1961年他和同事们先后成功研制出三批脊灰（Sabin型）活疫苗共2000万人份。经过在450万小儿中试用，病毒学、血清学和流行病学研究证明国产疫苗安全，有良好的免疫学效果和流行病学效果。制定了我国第一部脊灰活疫苗制造及鉴定规程和操作细则。他在昆明筹建了疫苗生产与研究基地——中国医学科学院医学生物学研究所，该所自1960年建所以来至今向国家提供疫苗40多亿人份，对我国消灭脊灰起到了关键性作用。2000年7月我国证实为无脊灰国家。顾方舟教授为我国研究脊灰活疫苗、消灭脊灰作出了重大贡献。他为我国广大青少年健康成长带来了福音。我国脊灰活疫苗的研制成功是一个对国外技术吸收、消化再创新的过程。     

人源乳腺癌单抗用于临床放射免疫显像

制备人源抗肿瘤单克隆抗体是实现临床放射免疫显像定位诊断和导向药物治疗肿瘤的主要途径。人源抗乳腺癌单克隆抗体CM·1(HMcAb-CM·1)对乳腺癌组织有高度亲和力和特异性。用氯胺T法标记抗体,在荷瘤裸鼠腹腔内注射~(131)I-HMcAb-CM·1后