贮脂细胞在大鼠实验性肝纤维化中的作用及机理研究

在用电镜、免疫组化对CCl_4诱发大鼠肝纤维化过程中的贮脂细胞、纤维粘连蛋白和Ⅲ型胶原的变化作了动态观察.结果表明,实验早期在坏死灶周围即有贮脂细胞增生,中期贮脂细胞增生达到高峰并形成主要由贮脂细胞的过渡型细胞和成纤维细胞组成的早期纤维间隔.晚期贮脂细胞数目基本降至正常,形成主要由成纤维细胞组成的纤维间隔,结合电镜观察结果,提示在肝纤维化过程中,贮脂细胞可向成纤维细胞分化,并具有合成胶原蛋白的能力.而纤维粘连蛋白则可能在趋化贮脂细胞和成纤维细胞,促进胶原合成等过程中具有一定的作用.     

应用单克隆抗体检测肺癌病人外周血中T细胞亚群

本文应用单克隆抗体检测33例原发性肺癌病人治疗前后外周血中T淋巴细胞亚群变化。结果提示:肺癌病人外周血中T细胞亚群明显有别于正常人,主要表现为T_H细胞降低和T_S细胞升高以及T_H/T_S比值明显倒置。短期观察结果表明,肺癌病人外周血中T_S细胞持续升高和T_H/T_S比值持续降低者,预后不良。临床检测T细胞亚群变化及它们的动态变化可作为判断宿主抗肿瘤免疫功能状态、病情发展和预后的敏感指标。     

维生素A阻抑大鼠实验性肝纤维化的病理研究

利用光镜、电镜、免疫组化和形态学定量技术动态研究维生素A对大鼠四氯化碳肝纤维化的抑制作用。结果表明,维生素A可减少四氯化碳中毒大鼠肝内纤维连接蛋白和Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积,抑制贮脂细胞向成纤维细胞转化,并可明显地减轻肝纤维化程度。本文还对维生素A抑制肝纤维化的机理及意义作了初步探讨。     

Preparation,purification and characterization of the polyclonal antibody against α1-AT

Objective To prepare the polyclonal antibody against α1-antitrypsin(α1-AT)by immunizing rabbits with α1-AT,and to purify and characterize the antibodies produced from rabbits in order to establish the production process of the polyclonal antibody against α1-AT.Methods The healthy rabbits were routinely immunized with α1-AT to prepare polyclonal antibody against α1-AT.The serum antibody titers were determined by ELISA.The rabbits with qualified antibody titers were killed to collect blood.The antisera,obtained by centrifugalizing the whole blood,were purified by caprylic acid-ammonium sulfate precipitation and protein A affinity chromatography.The purified polyclonai antibodies were analyzed by 15%SDS-PAGE,and antibody titers weIe measured by ELISA.Results ELISA assay showed that the titers of antisera were over 105.The polyclonal antibodies,purified by caprylic acid-ammonium sulfate precipitation and protein A affinity chromatography,had good purity and immunological activity.Conclusion The production and purification processes of polyclonal antibody against α1-AT are successfully established.     

软组织透明细胞肉瘤的临床与病理学特点

目的研究软组织透明细胞肉瘤的临床特性、病理学特征及预后。方法观察12例病理诊断为软组织透明细胞肉瘤患者的临床特性，从肿瘤细胞的细胞质、细胞核及通过免疫组化染色进行分析。结果软组织透明细胞肉瘤患者常为青、中年，病程平均1．5年，肿瘤好友于四肢的肌腱和腱膜；病理上，肿瘤细胞排列成条索或巢状，形态相对一致，胞浆透明或嗜酸性颗粒状，核仁明显，部分肿瘤含有黑色素；肿瘤S-100和HMB45免疫染色阳性，阳性率分别为100％（12／12）和75％（9／12）。其预后类似恶性程度较高的其它肉瘤。结论软组织透明细胞肉瘤某些特征类似恶性黑色素瘤，但具有不同的临床特性、形态学和生物学行为，为一明确的临床病理学实体。     

大肠癌单抗Hb_3、花生凝集素、癌胚抗原三项标记对慢性溃疡性结肠炎的综合研究

应用大肠癌单抗Ｈｂ３、花生凝集素（ＰＮＡ）、癌胚抗原（ＣＥＡ）分别对６０例慢性溃疡性结肠炎（ＣｕＣ）和２０例大肠癌进行综合研究。结果表明：大肠癌Ｈｂ３反应的阳性率为８０％（１６／２０），ＰＮＡ为８５％（１７／２０），ＣＥＡ为９０％（１８／２０）；三种肿瘤标记物均为阳性者１４例，占７０％，其中各有一项阳性者，共１９例，占９５％。ＣｕＣ对Ｈｂ３、ＰＮＡ、ＣＥＡ反应的阳性率分别为４１％（２５／６０）、３４％（２０／６０）和５３％（３２／６０）；三者均为阳性者１８例，占３０％，三种肿瘤标记物有一项阳性者共４０例，占６６％；１２例胎儿大肠粘膜全为阳性，而正常大肠粘膜几乎全为阴性。由此作者认为，上述改变，特别是这三种肿瘤标记物综合检测，其阳性率之高，不但有利于进一步证实ＣｕＣ确实发生了类似大肠癌的生化改变，亦进一步支持了ＣｕＣ实为大肠癌的癌前期疾病。因此我们认为，在今后的研究和临床工作中，对某一组织，若应用多种肿瘤标记物进行综合检测，对于早期癌及癌前病的发现与诊断比应用单一标记物更有实用性和可靠性。     

人canstatin cDNA分泌型真核表达载体的表达及生物学作用研究

目的将人canstatin cDNA分泌型真核表达载体pSecTag2B/canstatin稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞并获得稳定表达canstatin蛋白产物的细胞株。再进一步研究表达产物的生物学作用。方法将人canstatin cDNA的重组1质粒pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞,应用RT-PCR、western-blotting法检测表达产物,再用多种方法进一步研究canstatin的生物学作用。结果成功的将pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞并鉴定出上清液中有目的蛋白的表达。该细胞培养上清液能抑制鸡胚绒毛尿囊膜中微血管的生成,抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)的生长并诱导其凋亡。结论①成功的将pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞并获得能稳定表达can-statin蛋白产物的细胞株;②证实含canstatin蛋白产物的细胞培养上清液具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的活性并可在体外抑制HUVEC-12的生长和诱导其凋亡。     

重组血管基膜衍生多功能肽对内皮细胞信号蛋白磷酸化水平的影响

目的:研究重组血管基膜衍生多功能肽(rVMBDMP)对人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)信号蛋白磷酸化水平的影响。方法:体外培养HUVE-12细胞,C57/BL6小鼠皮下基质胶填塞法观察HUVE-12细胞体内管状结构形成;高通量蛋白磷酸化芯片研究rVBMDMP对HUVE-12细胞信号蛋白磷酸化水平改变。结果:C57/BL6小鼠皮下基质胶填塞法证实:rVBMDMP(1.0,10.0μmol/L)能有效抑制血管内皮生长因子激活的内皮细胞体内管状结构形成。蛋白磷酸化芯片检测结果显示:rVBM-DMP(1.0μmol/L)处理HUVE-12细胞后,死亡信号蛋白(caspase-3,death receptor 3,4,5)和整合素亚单位(integrinαv,β1,β3)磷酸化蛋白较对照组增高2倍以上,而EGFR,pEGFR,VEGFR-1和Survivin磷酸化蛋白较对照组降低50%以下。结论:rVBMDMP可能通过抑制血管内皮生长因子激活的内皮细胞生长和诱导凋亡发挥抗血管生成效应。     

TCRP1在口腔鳞癌中介导顺铂耐药的体内实验研究

目的 TCRP1是新近从舌癌耐药细胞系Tca8113/PYM中克隆出来的一个新基因,前期体外实验研究表明TCRP1在口腔鳞癌细胞中能特异地介导对顺铂化疗耐受,本研究将进一步探讨TCRP1在体内实验中介导化疗耐受的作用。方法通过建立TCRP1过/沉默表达裸鼠移植瘤模型,观测TCRP1对化疗药物5-Fu、cDDP的作用敏感性的影响并初步探讨其机制。结果肿瘤生长曲线及肿瘤瘤重结果显示TCRP1能增强裸鼠移植瘤对顺铂的耐药性,而对5-Fu则没有影响。TUNEL检测发现TCRP1高表达的组织中凋亡细胞计数更少。结论 TCRP1是一个新的耐药相关基因,其作用机制与通过增强口腔鳞癌细胞凋亡抗性有关。     

人胃癌细胞MKN-28母亚两系转移相关基因的筛选

目的采用基因芯片技术比较筛选前后的人胃癌细胞母系MKN-28和亚系MKN-28S之间的基因表达谱,利用生物信息学方法筛选出与胃癌侵袭和转移相关的差异基因。方法用肿瘤转移基因芯片筛选出人胃癌细胞MKN-28母亚两系的转移相关基因,对部分有差异表达的基因用RT-PCR和Western blot进行分析鉴定。结果用肿瘤转移基因芯片筛选出两系的差异表达基因共20个,其中上调基因13个,下调基因7个。选择其中有代表意义的2个基因利用RT-PCR和Western blot进行验证,证实所选基因在筛选前后瘤细胞中均有差异表达,与基因芯片的表达情况一致,说明基因芯片结果可信度较高。结论基因芯片技术是筛选胃癌转移相关基因的有效方法;多基因参与了胃癌的侵袭和转移的过程,包括一些基因如Flt-4、SRC等基因和其它相关基因的改变。