MBP不同cDNA序列真核表达载体的构建及鉴定

目的以pEGFP-N1质粒载体为介导,构建针对髓鞘碱性蛋白(MBP)不同isoform cDNA的表达载体。方法将三段不同MBPcDNA序列克隆入pEGFP-N1质粒,转化DH5α感受态细胞,酶切鉴定及测序。结果测序结果显示插入的三段目的片段的序列与理论序列一致。结论笔者成功构建了pEGFP-N1-MBP21.5,pEGFP-N1-MBP18.5和pEGFP-N1-MBP17.3三个重组真核表达载体,为进一步研究不同MBP cDNA在真核细胞中的表达情况和功能差异奠定基础。     

生物医学工程专业生物化学教学改革初探

本文针对生物化学在生物医学工程专业教学中遇到的问题,提出对教学内容、教学形式以及考核评价体系进行改革,期望引导该学科学生正确认识学习生物化学的意义,并初步培养学生的科学思维、科研兴趣以及创新意识,为踏入社会从事研发工作或者攻读研究生,进一步深造打下基础。     

21.5kD MBP RNAi有效靶点的筛选及验证

目的:构建21.5 kD MBP基因干扰序列21.5 kD MBP-shRNA(21.5 kD MBP short hairpin RNA interference),筛选最佳沉默效果的21.5 kD MBP-shRNA真核表达载体,为21.5 kD MBP基因功能研究提供实验材料。方法:将21.5 kD MBP-shRNA阳性真核表达载体和阴性真核表达载体经脂质体介导分别转入人神经胶质瘤细胞株U251中,观察转染24 h后的转染效率;提取各组细胞总RNA,用实时荧光定量PCR技术检测各组21.5 kD MBP基因在mRNA水平的表达差异性。结果:21.5kD MBP-shRNA真核表达重组载体被成功转染入U251细胞,与阴性对照质粒(pGenesil-1-MBP-neg)转染组相比,沉默质粒转染组(pGenesil-1-MBP-1、pGenesil-1-MBP-2、pGenesil-1-MBP-3质粒分别转染)细胞中21.5 kD MBP mRNA表过水平均显著下降(P<0.05),其中pGenesil-1-MBP-3转染组细胞中21.5 kD MBP mRNA表达水平最低。结论:成功筛选出最佳沉默效果的21.5 kD MBP-shRNA真核表达载体,为21.5 kD MBP基因功能研究及基因治疗研究奠定了实验基础。     

药用黄芪的特异性SCAR标记的开发

目的：为了更好的保护利用黄芪资源,本研究试图开发出准确可靠、快速稳定的分子标记用于黄芪药材的研究及鉴定。方法：本研究以15份黄芪的基因组DNA为模板,进行随机扩增多态DNA（RAPD）扩增,筛选差异条带并回收、克隆和测序,根据差异条带的测序结果设计特异性SCAR引物。结果：成功获得了5个SCAR标记,SCAR引物在黄芪样品中的扩增结果表明,相对于RAPD标记,其多态信息含量降低,但标记的稳定性、特异性增高。结论：因此认为可以通过RAPD转化为SCAR标记的方法,大量开发这一特异性分子标记,为黄芪资源的遗传多样性研究、鉴定技术以及遗传图谱的构建奠定物质基础。     

小鼠原代血管平滑肌细胞改良分离方法的建立

目的：建立方便、快速、高效的小鼠原代血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）的分离培养方法,为相关研究提供快速获取原代VSMC的方法技术。方法：分离小鼠主动脉,用I型胶原酶消化血管组织去除内皮细胞等杂细胞;将血管切成1mm。大小组织块种植于六孔细胞培养板孔底,用分离培养液诱导原代VSMC细胞的繁殖生长。光学显微镜观察细胞形态特征;免疫组化方法鉴定VSMC特异性蛋白α-SMA的表达;RT—PCR方法检测VSMC特异性蛋白α-SMA和SM22α的mRNA表达水平。结果：本方法分离原代VSMC,3d后可见长梭状VSMC从组织块边缘长出,7d后可以进行传代。光学显微镜观察显示,分离细胞具有平滑肌细胞（smooth muscle cell,SMC）形态特征;免疫组化分析显示,分离细胞α—SMA蛋白表达阳性;RT—PCR分析显示,分离细胞中α-SMA和SM22α在mRNA水平高表达。结论：本实验成功建立了一种简便、快捷、高效从组织块分离培养VSMC的改良方法,为快速获得原代VSMC提供了一种适用的方法技术。     

双语教学在生物化学实验课中的应用

双语教学是时代发展对高等教育提出的新要求,但如何让外语工具和谐的融入专业课教学是一个全新的课题.从生物化学实验教学改革入手,充分考虑本科五年制学生的实际条件和生物化学的学科特点,遵循由浅入深、循序渐进的原则,优化教学内容、综合多种教法,并适时跟进教学效果问卷调查,初步总结了一些有益的经验,为进一步开展生物化学双语教学奠定了一定的基础.     

医学院校生物化学教学中如何培养学生的学习兴趣

培养学生的学习兴趣可以提高生物化学教学的质量,应从绪论课的讲解、生动新颖多样的课堂设计、理论联系实际、提高记忆效率等方面着手在教学中培养学生对生物化学的学习兴趣,激发其学习动力。     

黄芪多糖对人肝癌细胞HepG2凋亡相关基因表达的影响

目的研究黄芪多糖(APS)联合斑蝥酸钠(SCA)对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及Bcl-2基因表达的影响。方法实验分为对照组、SCA处理组、APS处理组、APS联合SCA处理组,采用免疫组化染色法(IH)观察APS联合斑蝥酸钠对HepG2细胞增殖的抑制作用,采用Western印迹法检测各组细胞Bcl-2基因表达的变化。结果与对照组相比,各处理组HepG2细胞中Bcl-2基因表达均明显减少,APS联合SCA处理组减少最为明显。结论 APS联合SCA可明显抑制HepG2细胞Bcl-2基因的表达。     

黄芪总黄酮对人体正常细胞和肿瘤细胞辐射防护作用的差异性研究

目的 研究黄芪总黄酮(total flayonoids of astragalus,TFA)对60°Co γ射线辐射损伤的人体正常骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)和肝癌细胞HepG-2辐射防护作用的差异性.方法 MTT法检测TFA处理组与单纯照射组hMSCs和HepG-2的细胞活性;HepG-2细胞克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性;流式细胞技术分析细胞凋亡率;Western blot技术分析凋亡相关蛋白Fas,Bcl-2,Bax的表达.结果 MTT检测结果显示,当给予6 Gy γ射线一次性照射后,TFA预处理组hMSCs细胞活性分别比单纯照射组提高了1.15～1.95倍;经相同浓度TFA预处理的肝癌细胞HepG-2的细胞活性仅为单纯照射组的53%～23%;TFA的给药浓度与细胞存活率(survival rate)之间显现出良好的量效关系.细胞克隆形成实验结果显示:TFA+照射组能够明显抑制HepG-2细胞增殖,作用强于单纯TFA给药组和单纯照射组.流式细胞分析表明,经6 Gy γ射线一次性照射6、24和48 h后,TFA预处理组hMSCs的细胞凋亡率分别为23.3%,11.2%和2.9%.单纯照射组hMSCs的细胞凋亡率相应为29.3%,24.9%和13.6%;TFA预处理组肝癌细胞HepG-2的细胞凋亡率分别为11.6%,17.3%和20.1%,单纯照射组HepG-2的细胞凋亡率分别为6.9%、9.3%和15.8%.Western blot分析显示,在肝癌细胞HepG-2中,TFA预处理照射组促凋亡蛋白Fas和Bax 的表达量显著高于单纯照射组和对照组(t=11.17～-2.8,-12.35～3.4,P＜0.05);凋亡抑制蛋白Bel-2的表达量,TFA预处理照射组明显低于单纯照射组和对照组(f<6.36～17.61.P<0.05).结论 TFA对人正常骨髓间充质细胞具有明显的放射防护作用,对肝癌细胞不仅没有放射防护作用反而具有凋亡促进作用;TFA对肝癌细胞的促凋亡作用,主要通过上调促凋亡蛋白Fas和Bax的表达与下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,从而大大增强了60 Co γ射线对肝癌细胞的凋亡诱导作用.

Abstract：

Objective To investigate the different radioprotective effects of total flavonoids of Astragalus (TFA) on human normal mesenchymal stem cells(hMSCs) and hepatoma cells injured by 60 Coγ-ray radiation.Methods hMSCs and HepG-2 cells were cultured and randomly divided into TFA-treated and untreated groups.The cells of different groups were irradiated with 60 Co γ-rays at the dose of 6 Gy.MTT method was utilized to detect the survival rates of the hMSCs and HepG-2 cells pretreated or untreated with TFA before irradiation.Cell clone formation test was used to measure the cellular radiosensitivity.The apoptosis rates of different groups were determined by flow cytometer assay.The expression rates of the apoptosis-promoting proteins Fas and Bax and the apoptosis-inhibiting protein Bcl-2 were analyzed by Western blotting.Results MTT showed that the survival rates of hMSCs pretreated by TFA were 1.15-1.95 times higher than that of the pure irradiation group.On the contrary,the survival rates of the TFA pretreated HepG-2 cells were only 0.53-0.23 times that of the pure irradiation group.There was a good dose-effect relationship between the cell survival rate and the TFA concentration.Cell clone formation rate indicated that combined treatment of TFA and radiation inhibited the cell proliferation more effectively than single TFA or pure radiation.Flow cytometry showed that 6,24 and,48 h post-irradiation to 6 Gy,the apoptosis rates of the hMSCs were 23.3% ,11.2% ,and 2.9% ,respectively in the TFA pretreated group and were 29.3% ,24.9% ,and 13.6% in the pure radiation group.However,the apoptosis rates of the HepG-2 cells at 6,24,and 48 h post-irradiation to 6 Gy were 11.6% ,17.3% ,and 20.1% ,respectively in the TFA pretreated group and were 6.9% ,9.3% ,and 15.8% ,respectively in the direct radiation group.Western blotting showed that the expression levels of Fas and Bax proteins in the HepG-2 cells were significantly higher in the TFA pretreated group than in the pure radiation group.On the contrary,the expression level of the apoptosis inhibiting protein Bcl-2 was significantly lower in the TFA pretreated group than in the pure radiation group.Conclusions TFA has obvious effects of radiological protection on human hMSCs and has no effects of radiological protection but effects of apoptosis enhancement on hepatoma cells.The promotion of apoptosis of TFA on hepatoma cells is primarily through increasing the expression of apoptotic proteins such as Fas and Bax and reducing the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2.