MCUR1在多发性骨髓瘤中的作用

目的探讨线粒体钙单向转运体调节分子1(MCUR1)在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达变化,观察其对MM细胞周期、凋亡的作用,初步分析其内在分子机制。方法设瞬时转染MCUR1干涉片段1和2的人MM细胞系RPMI 8226细胞作为实验组(命名为si MCUR1-1和si MCUR1-2细胞),阴性干涉片段转染的RPMI 8226细胞(命名为si Ctrl细胞)作为对照组;实时定量PCR测定MCUR1在MM患者及正常对照者骨髓单个核细胞中的表达水平;实时定量PCR和Western blot检测MCUR1沉默效果;用CCK-8法和流式细胞计量术分别测定沉默MCUR1后细胞增殖、细胞周期和凋亡,Western blot检测MCUR1沉默后p53及其下游分子表达变化。结果与对照者相比,MCUR1在MM患者中的表达显著升高(P0. 05); MM细胞系RPMI 8226中干扰MCUR1后,与对照组相比,细胞增殖显著减慢(P0. 05),G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,细胞凋亡比例增加;与对照组相比,干扰MCUR1组细胞内p53、BAX蛋白表达增加,BCL2、cyclin D1和cyclin E蛋白表达减少。结论 MCUR1在MM患者中表达上调,MCUR1通过抑制p53通路进而促进MM细胞增殖。     

生物钟昼夜节律调节基因(CLOCK)在肝癌中高表达且与预后不良相关

目的明确生物钟昼夜节律调节基因(CLOCK)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及对细胞生长的作用。方法采用免疫组织化学染色法检测CLOCK在158例HCC组织及对应癌旁组织中的表达,利用HCC公共数据(共356例)验证CLOCK在HCC组织中的表达变化。单因素统计分析CLOCK表达与HCC患者临床病理特征间的关系,并且采用生存分析法比较CLOCK表达水平高低对HCC患者生存的影响。敲低肝癌Hep G2细胞中CLOCK水平,采用MTS法检测CLOCK对细胞生长的影响。结果 CLOCK在HCC组织高表达,而在356例HCC公共数据中,癌组织中CLOCK表达同样显著上调。按照CLOCK的表达水平,将158例HCC患者分为低表达组和高表达组,单因素分析结果显示,CLOCK在HCC中的表达与肿瘤直径、TNM分期、门脉侵袭有关。CLOCK低表达组HCC患者的总生存时间和无复发生存时间均显著长于高表达组患者。在肝癌Hep G2细胞中,敲低肝癌细胞CLOCK后细胞增殖能力显著降低。结论 CLOCK在HCC中呈高表达趋势,与HCC的恶性程度相关,其表达上调提示HCC患者预后不良,敲低CLOCK显著抑制肝癌细胞生长。     

节律分子BMAL2对急性髓系白血病细胞有氧糖酵解和细胞增殖的影响

目的：了解类芳烃受体核转位蛋白2(BMAL2)在急性髓系白血病（AML）中的表达及与患者预后的关系,分析其对AML细胞有氧糖酵解和增殖的影响。方法：应用实时定量PCR法检测AML患者和正常对照组的骨髓单个核细胞中BMAL2的表达情况。利用美国国家生物技术信息中心公共数据库分析BMAL2表达与AML患者预后的相关性。通过慢病毒系统敲低AML细胞系HL-60和Kasumi-1中BMAL2的表达,葡萄糖摄取实验、乳酸含量实验、CCK-8法、细胞集落形成实验检测其对细胞糖代谢、细胞增殖的影响。结果：BMAL2 m RNA在AML中的表达水平显著高于正常对照组（P<0.01）。BMAL2表达高的AML患者总生存时间较低表达患者明显缩短（P<0.05）。敲低AML细胞系HL-60和Kasumi-1中的BMAL2后,细胞葡萄糖摄取减少,乳酸生成减少。RT-PCR及Western blot检测结果显示,BMAL2通过增强HIF1A的表达来促进AML细胞有氧糖酵解,进而促进细胞增殖。结论：BMAL2高表达于AML中,通过HIF1A增强AML细胞有氧糖酵解从而促进细胞增殖。     

奥曲肽对重症急性胰腺炎大鼠枯否细胞m2极化功能的调节作用

目的探讨生长抑素类似物奥曲肽对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠枯否细胞(Kupffer cells)m2极化功能的调节作用。方法采用经胰管逆行注射5%牛黄胆酸钠和0.9%NaCl分别建立大鼠重症急性胰腺炎模型和对照组模型。36只SD大鼠随机分为六组:假手术组(S)、SAP组、奥曲肽治疗组(ST)、生理盐水治疗组(NT)、奥曲肽预防组(SP)、生理盐水预防组(NP),分别于造模后24 h处死,胶原酶Ⅳ体内灌注肝脏,采用25%、50%Percoll液密度梯度离心法提取肝Kupffer细胞。Elisa检测血清中TNF-ɑ、IL-4、IL-10水平,RT-PCR检测肝Kupffer细胞内极化水平,即TNF-ɑ、IL-4、IL-10的表达,HE染色观察胰腺组织病理损伤情况。结果 (1)SAP组、生理盐水治疗组和预防组血清中TNF-ɑ的水平明显升高,与奥曲肽治疗组相比差异显著(P<0.05或0.01),与奥曲肽预防组比较并无明显差异。奥曲肽治疗组和预防组IL-4水平明显增高,与其他组相比有显著差异(P<0.01),而其两组之间IL-4水平无差异。IL-10水平在奥曲肽治疗组明显升高,与SAP组、生理盐水治疗组和预防组相比差异显著(P<0.01),而IL-10水平在奥曲肽预防组并未见明显升高,与奥曲肽治疗组相比有明显差异(P<0.05)。(2)肝脏Kupffer细胞中,与假手术组相比,TNF-ɑ在SAP组的表达明显上升(P<0.01),而在奥曲肽治疗组和预防组的表达明显降低,与假手术组、SAP组比较差异显著(P<0.01)。IL-4的表达量在SAP组明显下降,与假手术组相比差异显著(P<0.01),而在奥曲肽治疗组和预防组的表达量明显上升,与SAP组、生理盐水治疗组和预防组相比差异显著(P<0.05或0.01)。SAP组与假手术组相比,IL-10的表达量显著降低(P<0.01),而其表达量在奥曲肽治疗组和预防组明显升高,与假手术组、SAP组、生理盐水治疗组和预防组相比差异明显(P<0.01或0.05)。(3)SAP组、生理盐水治疗组和预防组胰腺组织出血、水肿、坏死明显,奥曲肽治疗组和预防组胰腺组织炎症明显减轻。结论肝Kupffer细胞在SAP病情发展中起着重要作用,奥曲肽通过影响其中TNF-ɑ、IL-4和IL-10的表达和分泌,从而调节Kupffer细胞m2极化功能,对SAP具有一定的治疗作用。     

Survivin基因调控Notch1信号通路抑制骨髓瘤细胞增殖及侵袭的机制

目的 探讨Survivin基因调控Notch1信号通路对骨髓瘤细胞增殖及侵袭的影响.方法 RT-PCR检测42例骨髓瘤组织及正常骨髓组织中Survivin基因的mRNA表达;NC-siRNA和Survivin-siRNA转染人骨髓瘤细胞株RPMI8226,Western blot检测48 h后各组细胞中Survivin蛋白的表达;台盼蓝拒染法和Transwell小室分别检测细胞活率及侵袭能力;Western blot检测MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白的表达.结果 Survivin基因在骨髓瘤组织中的mRNA表达显著高于正常骨髓组织(P﹤0.01);转染siRNA后RPMI8226细胞中Survivin蛋白的表达显著降低(P﹤0.01);与对照组及NC-siRNA组的比较,Survivin-siRNA组细胞活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达均显著降低(P﹤0.01).结论 RNA干扰Survivin基因的表达可降低RPMI8226细胞活率及侵袭能力,其机制与抑制Notch1信号通路有关.     

地西他滨联合减量IAG方案治疗中高危骨髓增生异常综合征及其转化急性髓系白血病的临床观察

目的:分析国产地西他滨联合减量IAG方案[粒细胞集落刺激因子(G-CSF)+伊达比星(IDA)+阿糖胞苷(Ara-C)]在治疗骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)及其转化急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的临床疗效及其安全性.方法:选取2014年10月至2016年5月收治的中高危MDS以及AML(MDS转化)患者共20例,应用国产地西他滨联合减量IAG方案治疗,观察临床疗效及不良反应发生情况.结果:20例患者至少进行2疗程化疗,完全缓解者9例,部分缓解5例,总有效率为70%(14/20).所有患者均出现III-IV级血液学毒性,第1、2疗程粒细胞缺乏及III、IV级血小板减少持续时间无统计学差异(P>0.05).年龄≥60岁患者粒细胞缺乏时间更长,与年龄<60岁患者相比差异有统计学意义(P<0.05),所有患者非血液学不良反应均可耐受.染色体核型预后良好者疗效佳,预后不良者预后差,患者的年龄、性别与疗效无显著相关性.结论:地西他滨联合减量IAG方案治疗MDS和AML疗效显著,不良反应可控,耐受性较好,值得在临床上进一步推广.     

CLAG方案治疗复发难治急性髓系白血病的疗效观察

目的:评价CLAG方案（2-CdA+Ara-C+G-CSF）治疗复发难治急性髓系白血病的疗效及安全性。方法:回顾性分析我中心2015年6月至2016年8月应用CLAG方案治疗的12例复发难治急性髓系白血病患者。结果:12例患者均系复发难治急性髓系白血病,根据NCCN急性髓系白血病指南（2017年第1版）细胞遗传学及分子生物学标记,进行危险度分级,其中预后良好组3例,预后中等组5例,预后不良组4例。所有患者均给予1疗程CLAG方案化疗,其中8例（72.7%）达到完全缓解（CR）,2例（18.2%）达到部分缓解（PR）,总有效率（OR）90.9%。所有患者均出现Ⅲ-Ⅳ级血液学毒性,主要毒副反应为粒细胞缺乏及血小板减少所导致的感染和出血,其中肺部感染8例（72.7%）,侵袭性真菌病5例（45.5%）,革兰阴性杆菌败血症2例（18.2%）。6例患者（54.5%）发生Ⅲ-Ⅳ级出血,1例因弥漫性肺泡出血早期死亡。化疗所致恶心呕吐、肝肾毒性、口腔黏膜炎等非血液学毒性均为Ⅰ-Ⅱ级。结论:CLAG方案治疗复发难治性急性髓系白血病有效率较高。化疗所致骨髓抑制较重,但合并感染、出血可控制,非血液学毒性轻微,安全性较好,可作为复发难治急性髓系白血病挽救性治疗的首选方案。     

CLAG方案和MEA方案治疗复发/难治急性髓系白血病的疗效比较

目的:探讨CLAG方案（克拉屈滨+阿糖胞苷+重组人粒细胞刺激因子）和MEA方案（米托蒽醌+依托泊苷+阿糖胞苷）在治疗难治/复发急性髓系白血病（RR-AML）患者中的疗效及其安全性,并分析在难治性AML患者中应用两种方案的优劣性,为RR-AML的治疗提供依据。方法:回顾性分析44例RR-AML患者,比较CLAG组（n=20）和MEA组（n=24）临床疗效,并观察两种方案的不良反应发生情况,进一步比较CLAG方案和MEA方案在治疗20例难治性AML患者中的临床疗效。结果:CLAG组患者的完全缓解(CR)率40.0 %（8/20）高于MEA组29.2 %（7/24）,但是两组之间比较,差异并无统计学意义（χ2=1.104,P=0.766）;CLAG组患者中位无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）均优于MEA组,并且差异性显著有统计学意义（χ2=6.834,P=0.004;χ2=6.883,P=0.001）;CLAG组肺部感染发生率较MEA组高,且差异有统计学意义（χ2=8.826,P=0.033）,粒细胞缺乏发生率亦高于MEA组,但差异无统计学意义（P＞0.05）。难治性AML患者CLAG方案治疗的中位OS、PFS均优于MEA方案治疗患者,但差异均无统计学意义（χ2=1.037,P=0.820;χ2=0.463,P=1.000）。结论:CLAG方案可作为RR-AML患者一线挽救治疗方案,不良反应可控,以期再次达到CR,获得造血干细胞移植机会。     

敲除BMAL1基因促进HL-60细胞凋亡并抑制增殖

目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除节律基因BMAL1的HL-60细胞系,探讨BMAL1分子在人急性髓系白血病中的生物学功能。方法:针对BMAL1基因设计2条sg RNA,构建含有sg RNA的PX459敲除载体;应用T7核酸内切酶I检测设计的sg RNA活性;应用打靶载体瞬时转染HL-60细胞构建BMAL1敲除细胞系,应用Western blot检测BMAL1蛋白的表达,应用流式细胞仪检测敲除细胞系的凋亡水平,应用CCK-8试剂盒检测敲除细胞系的增殖能力。结果:成功构建了针对BMAL1的PX459-sg RNA载体;并筛选得到了活性较高的打靶载体。Western blot实验在敲除细胞中未检测到BMAL1蛋白的表达。进一步实验发现,BMAL1敲除的HL-60细胞凋亡水平明显升高,细胞增殖能力明显减弱。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功构建了BMAL1基因敲除的HL-60细胞系,并发现BMAL1敲除可以促进HL-60细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,初步揭示了BMAL1生物节律基因在急性髓系白血病中的生物学作用。     

血栓预防策略及研究进展

近年血栓性疾病发病率有渐增之势,其已成为主要疾病负担,也是导致人类死亡的主要原因之一.抗凝药预防和治疗血栓性疾病的有效性已得到临床证实,但抗凝治疗是一把双刃剑,一方面可降低血栓事件发生率,另一方面则会导致出血并发症,而精准抗凝治疗可以确保血栓性疾病患者更多获益.本文主要综述了血栓形成的机制、血栓预防的现状及研究进展,以...