血液疾病FISH检测中细胞交联的处理方法比较

荧光原位杂交（ f1uorescence in situ hybridization,FISH）技术是通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交,该技术具有快速、安全及灵敏度高等特点［1］。目前已广泛应用于细胞遗传学、基因扩增、血液疾病检测、产前诊断等领域。尤其在血液疾病中,对疾病的发病机制、诊断及预后提供重要的诊断依据。但由于该操作过程复杂,影响荧光信号的因素较多,因此,准确把握溶液的pH值、各步骤的温度及时间,及时发现洗涤液是否浑浊可避免出现信号弱或无信号等情况的发生［2］。标本的前期处理是 FISH检测血液疾病成功的关键,若标本处理不当,结果不易判读,其中细胞交联是影响判读的主要因素,本文就针对骨髓/血液细胞标本制片中出现的细胞交联进行改进。为骨髓/血液标本FISH检测提供最佳的制片方法。     

T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用

目的：探讨T细胞受体( T cell receptors, TCR)基因重排检测对T细胞性淋巴瘤诊断的价值。方法收集T细胞性淋巴瘤30例和淋巴反应性增生组织30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的56条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析结果。结果30例T细胞性淋巴瘤标本中TCRβ、TCRγ、TCRδ的检出率分别为83．3%(25/30)、93．3%(28/30)、13．3%(4/30),三者联合检测的检出率为96．7%(29/30),30例淋巴反应性增生组织中均未检测出TCR基因重排。结论利用BIOMED-2引物系统检测TCR 基因重排可作为T细胞性淋巴瘤的辅助诊断工具。     

基础研究弥漫性大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白基因重排特点及规律研究

目的 探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)生发中心B细胞型(GCB)及非生发中心B细胞型(non-GCB)中Ig基因重排的特点及规律.方法 采用免疫组化法检测46例DLBCL中CD10、BCL-6、MUM1表达,采用Hans免疫分型方法将DLBCL分为GCB和non-GCB;同时提取所有样本基因组DNA,利用BIOMED-2克隆分析系统进行PCR扩增Ig基因,核酸分子异源双链凝胶电泳分析基因重排情况,并以15例反应性增生病变作为阴性对照.结果 46例DLBCL样本中GCB 12例、non-GCB 34例,其中45例样本扩增出Ig基因的克隆性重排条带,检测敏感性为97.8%,15例反应性增生病变均未检测到重排条带,检测特异性为100.0%.GCB和non-GCB重链IGH重排差异无统计学意义(P>0.05),但轻链IGκ-A、IGκ-B和IGλ重排差异有统计学意义(P<0.05).结论 GCB和non-GCB的Ig基因轻链重排条带分布具有显著的特点和规律,可为病理诊断和临床应用提供更为准确的依据.     

CD133+细胞在乳腺良恶性病变中的分布特点及其临床病理意义

研究CD133+细胞在乳腺普通型增生、乳腺不典型增生、乳腺原位癌、浸润性乳腺癌中的分布特点及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学方法对45例正常乳腺组织、41例普通型增生乳腺组织、39例不典型增生乳腺组织、51例乳腺原位癌组织、121例乳腺癌组织中CD133+的表达进行检测,分析CD133+细胞在乳腺良恶性病变中的分布特点。结果:CD133+在正常乳腺组织中不表达,在乳腺普通型增生、不典型增生、原位癌、浸润性癌的表达率逐渐增高,分别为31.7%（13/41）、48.7%（19/39）、64.7%（33/51）、74.4%（90/121）,有显著性差异（P<0.01）。CD133+的表达率随乳腺癌组织学分级［Ⅰ级63.6%（21/33）、Ⅱ级72.2%（26/36）、Ⅲ级82.7%（43/52）,P<0.05］和TNM分期［Ⅰ期57.1%（12/21）、Ⅱ期69.4%（34/49）、Ⅲ期68.7%（11/16）、Ⅳ期94.3%（33/35）,P<0.001］的增高而增高;有淋巴结转移或远处转移者分别高于无转移者、无远处转移者（P<0.05）;有复发者高于无复发者（P<0.05）;与患者年龄、月经状态、肿瘤的组织学类型、肿瘤大小、ER、PR、Her-2的表达无显著相关（P>0.05）。结论:CD133+细胞可能在乳腺增生与癌变过程中起重要作用;CD133+的乳腺癌细胞与乳腺癌的侵袭、转移和复发密切相关,CD133+是提示乳腺癌恶性程度和预后的指标之一。      

Ig/TCR基因重排分析联合EBER原位杂交检测在原发性胃肠道淋巴瘤诊断中的应用

目的 探讨Ig/TCR基因重排分析联合EBER原位杂交检测在原发性胃肠道淋巴瘤(gastrointestinal lymphomas,GIL)中的诊断价值.方法 选取常规石蜡包埋的GIL病理标本35例(包括成熟B淋巴细胞肿瘤29例,成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤6例),淋巴结反应性增生病变10例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析,并采用原位杂交方法检测EB病毒编码的小RNA(EBER).结果 35例GIL中,共检测出34例克隆性重排.其中29例成熟B细胞淋巴瘤均扩增出Ig克隆性重排,敏感性为100%,且联合应用IgH与IgK引物Ig单克隆性重排的检出率最高;6例成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤中5例扩增出TCR克隆性重排,敏感性为83.3%;10例淋巴结反应性增生病例均未检测到Ig及TCR克隆性重排条带,其检测特异性为100%.29例成熟B细胞淋巴瘤及10例淋巴结反应性增生组织经EBER原位杂交检测均为阴性,6例成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤中2例EBER原位杂交检测阳性,且均为鼻型NK/T细胞淋巴瘤.结论 BIOMED-2标准化的基因重排分析系统检测石蜡包埋组织中Ig基因和TCR基因克隆性重排的敏感性和特异性均很高,对GIL的诊断和鉴别诊断具有重要的临床应用价值,EBER原位杂交检测对基因克隆性重排阴性的淋巴瘤也具有一定的辅助诊断作用.     

人工饲养条件下死亡实验恒河猴肠道病理改变特点分析

目的 观察人工饲养条件下实验恒河猴肠道病理改变,探讨实验猴肠道疾病分布规律和病理改变特点,丰富实验猴自发病变基本研究资料.方法 对1998 ～2008年云南地区饲养的自然死亡的155只恒河猴(年龄2～20岁)的肠道进行病理检查,按年龄分为幼年组、成年组、老年组,并对观察结果进行统计学分析.结果 155例恒河猴中58例检出肠道病变,有慢性肠炎、急性肠炎、黏膜充血水肿、出血、糜烂、溃疡、穿孔、寄生虫共8种主要病变,出现率最高的为急性肠炎(20.00％).实验猴不同年龄组肠道病变类型分布基本相同,肠道病变率随年龄增长而增高,不同年龄组间统计学分析差异无显著性.结论 人工饲养条件下死亡实验猴肠道病变检出率较高,急性肠炎是实验猴的主要致死原因之一,实验猴肠道病理改变随年龄增长而病变加重.对实验猴饲养和研究时,应重视肠道病变因素,尤其是急性肠炎.死亡实验猴肠道病变研究对实验猴的质量控制和相关动物实验有重要指导价值.     

EB病毒与乳腺癌的相关性

目的：探讨EB病毒( Epstein-Barr virus, EBV)与乳腺癌发生、发展的相关性。方法随机选取不同发展阶段的乳腺病变组织246例,采用聚合酶链反应( polymerase chain reaction, PCR)、原位杂交( in situ hybridization, ISH)、激光捕获显微切割( laser capture microdissection, LCM)、免疫组化染色EnVision法检测EBV DNA、RNA、蛋白质水平,分析EBV与乳腺癌发生、发展的关系。结果免疫组化标记246例乳腺病变均未检测到EBV潜伏膜蛋白LMP1的表达。 PCR法在乳腺癌(12/23)、原位癌(0/10)以及乳腺良性病变(0/15)中检测到EBV DNA,但用地高辛标记的EBV DNA探针对48例乳腺良、恶性病变组织(包括PCR扩增阳性的12例乳腺癌标本)进行ISH检测,在癌细胞、乳腺上皮细胞和间质淋巴细胞内均未检测到阳性杂交信号。采用LCM PCR检测12例PCR扩增阳性和12例阴性乳腺标本的乳腺上皮细胞和间质淋巴细胞,在12例PCR阳性标本的间质细胞中扩增出EBV DNA,癌组织中未检出EBV DNA。用EBV RNA探针和ISH方法在75例乳腺良恶性病变组织中均未检测到EBER表达。结论在该文选择的标本中,乳腺癌发生、发展与EBV感染无关。     

抗p21Ras蛋白抗体研发及在肿瘤病理和肿瘤治疗中的研究进展

ras基因突变或过表达可导致多种肿瘤的发生，约30%的肿瘤中存在ras基因突变。p21Ras蛋白是ras基因表达的产物。抗p21Ras蛋白抗体的研发，为ras驱动肿瘤的病理诊断和治疗提供了新的研究方向。该文对抗p21Ras蛋白单克隆抗体、单链抗体、细胞内抗体、重组抗体的研发和应用情况进行简要综述。     

高海拔地区FISH法检测乳腺癌HER2基因的方法改进

目的 在高海拔地区改良并简化乳腺癌HER2 FISH法检测的预处理步骤,节省实验时间,扩大FISH检测试剂盒的临床应用.方法 以10例HER2免疫组化染色结果为＋ ＋以上的乳腺癌标本为研究对象,采用美国PanPath公司的HER2 FISH检测试剂盒,将其中的预处理步骤改良为高压煮沸处理,比较常规法与改良法对HER2基因扩增结果的影响.结果 两种方法检测乳腺癌HER2基因的阳性率无统计学差异,并且均能使细胞间质完全消化,细胞或重叠或孤立,细胞核中红绿信号清晰.结论 改良FISH法可以替代常规预处理步骤,简化了步骤,节省了时间,扩大了FISH检测试剂盒的临床应用.