用PCR技术扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的重链变区基因并进行克隆和序列分析

本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞中抽提总RNA,应用酸酚法抽提得到的总RNA,其质量较好,28S RNA:18S RNA约为2:1,基本上无细胞DNA     

一种简便的适用于特异扩增单抗可变区基因的杂交瘤细胞的RNA制备方法

在分子生物学实验中,欲合成cDNA必先制备高纯度、未降解的RNA。目前较为常用的有氯化铯超速离心,但因该法操作时间长需要昂贵的实验试剂和设备,给实验带来较大的不便。本文介绍一种简便的     

应用完全酶解法构建杂交瘤2F_7DNA基因文库

人-鼠嵌合抗体。在人体内应用时,将消除或大大减低由鼠的Ig在人体中引起的异种蛋白反应,这对单克隆抗体的临床应用,将开辟更为广扩的前景。本实验室研制的鼠型杂交瘤单克隆抗体2F_7,在体外已显示对人体小细胞肺癌有良好的反应性,与正常组织极少有交叉反应。抗体与小细胞肺癌抗原,有较好的结合常数、在带人体小细胞肺癌的裸鼠体内,也显     

CRLP与DNA修复相关性的初步研究

目的 探讨细胞经紫外处理后CRLP与DNA修复的相关性。方法 将插入反义CRLP的pcDNA3.1/V5-His质粒用脂质体介导法转染BEL7402肝癌细胞，G418筛选获得的细胞用15J/m^2的紫外作用，4h后用Annexin V-EGFP试剂处理细胞，荧光激活细胞分选法测定细胞凋亡比例。另外用RT－PCR和Northern杂交的方法检测了肿瘤细胞株和多组织中的CRLP的表达。结果 转染反义CRLP质粒的细胞株经紫外处理后，统计学处理表明凋亡比率显著高于对照；该基因在所检测的肿瘤细胞株和各类组织中均有表达。结论 CRLP基因的表达受到抑制以后可能通过影响细胞DNA修复能力降低细胞抗紫外杀伤的能力。     

用基因定点突变技术改建—免疫球蛋白重链可变区基因的通用表达载体

本文介绍了一种简便的、具有高突变率的基因定点突变方法。应用Bio-Rad Muta-Gene Phagemid Kit,在一装有表达载体上的抗NP(4-hydroxyl-3-nitrophenacetyl)免疫球蛋白重链可变区基因的J_a区引进BstE Ⅱ酶切位点,从而改建成一种能用于表达免疫球蛋白重链可变区基因的通用表达载体。应用该Kit,基因定点突变率达43％。     

正常小鼠肝RNA对肝癌细胞逆转的遗传稳定性的初步研究

本实验室曾报道人体肝癌BEL 7402细胞株,经与正常小鼠肝RNA温育24小时后,以~3H-亮氨酸对血清白蛋白的参入证明,人体肝癌细胞不仅能合成小鼠血清白蛋白,并可显著促进合成人血清白蛋白(比未经处理的癌细胞高3.6倍)。由此说明,我们所制     

原位分子杂交的基本原理和方法——附肝组织HBV-DNA检测技术

应用biotin标记探针的原位分子杂交技术(insitu hybridization)检测石蜡切片(或细胞涂片)的病毒感染疾病,已受到广泛的重视。原位分子杂交具有灵敏度高、专一性强等特点,而用biotin标记的探针与同位素标记探针比较,更具有性质稳定、无需放射防护、测定时间短等优点,是现今检测病毒感染的新技术。     

肝细胞肝癌相关新基因FP248的功能研究

目的FP248基因是本实验室通过高通量基因功能筛选得到的一个与细胞生长相关的新基因,本研究旨在研究其在肝癌发生发展中的作用.方法用Northern blot,Southern blot方法检测FP248在肝癌及其癌旁组织中mRNA表达差异和DNA的变化.通过体外细胞转染和体内裸小鼠成瘤实验观察FP248对肝癌细胞SMMC-7721生长的作用,并用Atlas Hu-man cDNA Expression Array探讨FP248影响肝癌细胞SMMC-7721的作用机理.结果FP248的mRNA在57%(4/7)的肝癌中表达高于其相应的癌旁组织,而且肝癌组织中DNA有扩增.FP248的过表达在体内外均可明显促进SMMG-7721细胞的生长.Atlas结果显示FP248过量表达后可上调许多与细胞生长密切相关的基因,同时还参与调节细胞粘附分子.结论基因FP248与肝癌的发生发展有密切关系,是一个与人肝癌发生发展相关的新基因.