肝癌相关抗原H2-calponin基因重组质粒的构建与表达

目的应用基因工程的方法构建H2-calponin(CNN2)基因工程表达质粒,体外表达、分离、纯化CNN2蛋白。方法以PCR扩增CNN2cDNA序列,用基因工程技术将CNN2基因重组到表达质粒pColdⅢ中,转化BL21(DE3)pLysS宿主菌,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamideg elelectrophoresis,SDS-PAGE)检测目的蛋白的表达情况,优化表达条件,以较大体积培养基因工程菌,菌体经超声波破菌后,过Ni-NTA亲和柱纯化,Western-blot检测表达纯化的融合蛋白。结果转化有pColdⅢ-CNN2重组质粒的基因工程菌能诱导表达CNN2蛋白,表达的目的蛋白占总菌体蛋白的35%;SDS-PAGE检测发现菌体上清液和沉淀物中均有目的蛋白片段,证实部分CNN2蛋白以可溶性形式表达;Western-blot检测结果提示表达纯化的蛋白能与抗CNN2抗体发生反应。结论成功构建出表达可溶性CNN2蛋白的重组质粒,诱导表达的蛋白具有CNN2免疫原性。     

外周血中亲环素A mRNA的表达水平测定

目的 探讨外周血中亲环素A (CyPA) mRNA表达水平与恶性肿瘤及非恶性肿瘤疾病的关系.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)测定恶性肿瘤组、非恶性肿瘤组及对照组外周血中CyPA mRNA相对表达水平.结果 外周血中CyPAmRNA相对表达水平从高到低依次为非恶性肿瘤组、恶性肿瘤组及对照组,非恶性...     

保温小室在组织芯片免疫组化中避免"边缘效应"的作用

目的 探讨保温小室在组织芯片免疫组化中避免"边缘效应"的作用.方法 采用常规免疫组化SP两步法,实验分为两组,一组采用保温小室,另一组采用免疫组化PAP笔,同时改良抗体滴加方法.结果 40例肺癌组织芯片采用保温小室,32例肝癌组织芯片、各40例胃癌及鼻咽癌组织芯片使用免疫组化PAP笔,分别计算边缘组织和中央组织平均光密度值.经统计发现不论是采用保温小室或免疫组化PAP笔,4种组织切片边缘与中央部位平均光密度值相比,差异无统计学意义.结论 采用保温小室较免疫组化PAP笔更为简单易行,在组织芯片免疫组化染色时避免"边缘效应"方面保温小室可取代免疫组化PAP笔.     

Calponin家族在肿瘤转移过程中的作用

近几年Calponin家族在肿瘤的发生发展过程中的作用受到广泛关注,以往的研究着重在作为一种钙调节蛋白参与细胞的收缩作用方面,认为Calponin主要通过研究抑制原肌浆蛋白MgATPase发挥在平滑肌中收缩的作用[1,2],但随着SEREX(Serological identification of antigens by recombinant expression cloning)等技术的发展,发现Calponin家族中H1-Calponin和H2-Calponin在肿瘤的发生发展过程中起到一定的抑制作用,深入了解Calponin家族在肿瘤转移过程中的抑制作用机制有助于更好的理解肿瘤的晚期转移,将肿瘤限制在局部,从而为患者争取手术的机会,对已发生转移的患者可以阻止肿瘤的继续转移,改善患者的预后.     

H2-Calponin蛋白在4种癌组织的表达及临床意义

 目的 探索肿瘤相关抗原H2-Calponin mRNA及其蛋白在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中表达及其临床意义。方法 用免疫组织化学和原位RT-PCR检测癌组织中H2-Calponin蛋白及其mRNA的表达分布和定位情况。结果 H2-Calponin蛋白主要分布在胞质;在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中阳性率分别为30.0%、27.5%、45.0%和51.8%,肝癌组织阳性率最高。H2-Calponin mRNA 定位主要在细胞核周;H2-Calponin mRNA在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中表达阳性率分别为17.5%、10.0%、20.0%和50.0%,在肝癌组织阳性率最高(P<0.05)。H2-Calponin在伴有转移的肝癌组织中的阳性表达率高于无转移的肝癌组织中的阳性表达率(P<0. 05),但该蛋白在4种不同癌组织中的表达与患者的性别、年龄、及癌组织的病理分级等因素无关。结论 肝癌组织高表达H2-Calponin蛋白和mRNA,可能具有肝癌特异性且与肝癌是否伴有转移相关。     

外周血中亲环素AmRNA的表达水平测定

目的探讨外周血中亲环素A（CyPA）mRNA表达水平与恶性肿瘤及非恶性肿瘤疾病的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT—FQ—PCR）测定恶性肿瘤组、非恶性肿瘤组及对照组外周血中CyPA mRNA相对表达水平。结果外周血中CyPA mRNA相对表达水平从高到低依次为非恶性肿瘤组、恶性肿瘤组及对照组，非恶性肿瘤组与恶性肿瘤组比较差异无统计学意义（P〉0．05），非恶性肿瘤组及恶性肿瘤组均高于对照组（P〈0．05）。结论外周血中CyPA mRNA相对表达水平升高与疾病的发生发展有关。