激活性受体NKG2D研究进展

NKG2D是一个重要的激活性受体 ,分布广泛。与其他已知的受体 配体相比 ,NKG2D在配体识别及信号传递途径方面有显著特点     

NK细胞中的信号传导

NK细胞的免疫应答是由细胞表面受体分子介导的激活性信号和抑制性信号调控的。抑制性受体胞浆区内免疫受体酪氨酸抑制基序 (ITIM)的磷酸化募集酪氨酸或脂类磷酸酶 ,调控细胞内经Syk、ZAP70或PI 3激酶途径激活的信号分子。最近对一些基因缺失动物如Syk和ZAP70缺失小鼠的研究表明NK细胞拥有广泛及强大的受体系统来保证其正常发育和发挥效应。本文拟对NK细胞信号传导研究的新进展作一综述。     

丙酮酸钠对2型糖尿病大鼠体外贮存红细胞形态结构和功能的影响

目的：观察加有丙酮酸钠的红细胞保存液对2型糖尿病（T2DM）大鼠体外贮存红细胞（RBC）形态结构和功能的影响。方法：雄性SPF级SD大鼠30只,随机分为3组（n=10）：非T2DM常规RBC保存液（A组）、T2DM常规RBC保存液（B组）、T2DM丙酮酸钠RBC保存液（C组）。尾静脉取血滤白细胞后,分别于贮存0 d(T0)、7 d(T1)、14 d(T2)、21 d(T3)、28 d(T4)观测各组RBC的形态结构,检测RBC中二磷酸甘油酸（2,3-DPG）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）及乳酸（LA）的含量,对体外贮存14 d的RBC进行PKH26标记,于静脉回输后1h、4 h、10 h、16 h测定RBC在体内的存活率。结果：T0时A组RBC形态完好,明显优于B组和C组;随贮存时间延长,各组RBC形态逐渐变成棘球形,B组和C组RBC棘形发生率明显高于A组,C组棘形发生率低于B组（P<0.05）;与A组比较,不同时点B组和C组2,3-DPG含量下降,ROS、MDA增加（P<0.05）,其中C组2,3-DPG含量高于B组、ROS和MDA含量低于B组（P<0.05）...     

早孕期弓形虫感染对大鼠胎盘IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平的影响

研究早孕期弓形虫感染对Wistar大鼠胎盘IL-4、IL-10及IFN-γ表达水平的变化,从而探讨弓形虫感染致不良妊娠的分子免疫学机制。将Wistar孕鼠随机分为2组:①对照组12只;②早孕感染组12只。早孕感染组每只孕鼠于妊娠第5天腹腔注射1×105个弓形虫强毒株(RH株)速殖子,对照组不做任何处理。所有孕鼠均于孕19 d颈椎分离处死,无菌获取胎盘,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-ti me PCR)及酶联免疫吸附测定(ELISA)检测其胎盘IL-4、IL-10及IFN-γ mRNA及蛋白表达水平的变化。结果:①实验组与对照组IL-4、IL-10及IFN-γmRNA相对表达水平分别为(0.006±0.010)、(0.119±0.080)、(0.82±0.354)和(0.596±0.444)、(0.478±0.224)、(0.297±0.180),三者之间均具有显著性差异(P<0.01);②实验组与对照组IL-4、IL-10及IFN-γ蛋白表达水平分别为(4.63±1.26)、(239.24±83.16)、(105.47±67.88)和(2.40±1.33)、(103.03±79.72)、(208.02±74.95),三者之间均具有显著性差异(P<0.01)、(P<0.05)、(P<0.05);③实验组与对照组mRNA水平IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10分别为(390.67±264.12)(37.65±21.10)和(1.31±0.96)、(0.79±0.60)两者之间均具有显著性差异(P<0.01);④实验组与对照组蛋白水平IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10分别为(176.51±212.95)、(7.26±8.81)和(23.09±12.95)、(0.44±0.21)。两者之间均具有显著性差异(P<0.01)、(P<0.05)。大鼠早孕期弓形虫感染后,胎盘局部Th1型细胞因子表达增高,Th2型细胞因子表达降低,打破了正常妊娠所需的Th1/Th2平衡状态,使平衡倾向于Th1,可能是弓形虫孕期感染致不良妊娠的重要分子机制之一。     

单核巨噬细胞的计数方法研究

目的 摸索一种准确、简单、快速的计数单核巨噬细胞的方法，并对贴壁的单核巨噬细胞计数方法作了探讨。方法 用单核巨噬细胞染色液对鼠腹腔及肺泡灌洗细胞进行染色后计数。比较：(1)通过贴壁前后细胞总数的变化来计数贴壁的单核巨噬细胞数量。(2)通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT比色法)获得贴壁的单核巨噬细胞数量这两种计数方法的优缺点。结果 用单核巨噬细胞染色液计数，单核巨噬细胞被染成红至红褐色，而其它细胞不显颜色，计数比较容易，且具有良好的重复性。MTT法计数中，单核巨噬细胞数在10^3—10^5之间时与吸光度值成比较明显的直线关系。血细胞计数板计数贴壁细胞数比MTT。比色法具有更好的重复性。结论 单核巨噬细胞染色液是一种比较理想的计数单核巨噬细胞的方法。利用血细胞计数板计数贴壁前后白细胞总数的变化是一种最简单便捷的获得贴壁单核巨噬细胞数的方法。     

共伴侣分子Cdc37从人热休克蛋白90复合体解离中ATP的作用机制

目的 探讨ATP导致共伴侣分子细胞分裂周期蛋白37(Cdc37)从人热休克蛋白90(HSP90)复合体解离的可能机制,为抗肿瘤新药研发提供理论依据。方法 用免疫共沉淀法（IP）捕获人组织淋巴瘤细胞（U937细胞）中HSP90复合体后,进行以下实验：（1）用流式细胞术（FCM）检测经过ADP、17-烯丙基胺格尔德霉素（17-AAG）、亚胺二磷酸腺苷（AMPPNP）、ATP处理后HSP90复合体中的Cdc37含量,并分别与经二甲基亚砜（DMSO）处理的对照组进行比较,研究ATP导致Cdc37从HSP90复合体解离是单纯由ATP结合导致还是依赖ATP水解;（2）用FCM检测对照组及ATP处理后复合体中Cdc37和其他共伴侣分子中S期激酶关联蛋白1 G2等位基因抑制因子（Sgt1）、HSP70相互作用蛋白（HIP）、FK-506结合蛋白（FKBP5）、应激诱导蛋白1(STIP1)、热休克蛋白90腺苷三磷酸酶同系物1激活剂（AHSA1）的变化情况,并用IP-western blot(IP-WB)进行验证,研究ATP导致Cdc37从HSP90复合体解离是否伴随其他共伴侣分子解离;（3）用IP-WB...     

弓形虫感染对人早孕母胎界面细胞因子转录水平的影响

研究弓形虫感染时IL-4、IL-10在绒毛滋养层细胞和IFN-γ在蜕膜NK细胞中mRNA水平的变化,从而探讨弓形虫感染致不良妊娠的分子免疫机制。选取正常妊娠5~10周妇女行人工流产术后的绒毛及蜕膜组织14例,利用绒毛组织分离滋养层细胞和蜕膜组织分离蜕膜NK细胞。分别将绒毛滋养层细胞和蜕膜NK细胞平均分为实验组和对照组,加入弓形虫培养和单独培养48 h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测滋养层细胞IL-4、IL-10 mRNA表达水平和蜕膜NK细胞IFN-γmRNA表达水平。结果:实验组和对照组IL-4、IL-10、IFN-γmRNA平均表达水平分别为(0.05±0.02)、(0.06±0.03)、(0.33±0.09)和(0.31±0.13)、(0.18±0.06)、(0.08±0.03),三者之间均具有显著性差异(P<0.05、P<0.01、P<0.05);实验组IFN-γ/IL-10、IFN-γ/IL-4的比值分别为(3.96±0.84)和(3.21±0.41),对照组则分别为(0.60±0.21)、(0.78±0.25),两组间同样均具有显著性差异(P<0.01、P<0.01)。早孕期弓形虫感染可致母胎界面Th1型细胞因子表达增高,Th2型细胞因子表达降低,从而打破正常妊娠状态下二者的平衡,可能是早孕期弓形虫感染导致不良妊娠的重要分子机制。     

早孕期弓形虫感染对大鼠胎盘RT.BMl及RTl-E基因转录的影响

通过检测正常妊娠和早孕期弓形虫感染的Wister大鼠胎盘RT.BMl和RTl-E mRNA的表达水平,发现二者在正常妊娠中的规律,进而探索早孕期弓形虫感染对胎盘RT.BMl和RTl-E mRNA表达的影响,以阐明弓形虫感染致不良妊娠结局的分子免疫机制.将48只孕鼠随机分为感染组和正常组,每组24只.感染组于妊娠第5天腹腔注射1×105个弓形虫强毒株(RH株)速殖子/只,正常组不作任何处理.两组于孕第9、13、15、17天分别处死6只孕鼠,无菌剖腹,观察胎鼠情况,计数死胎及活胎数.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测胎盘RT.BMl和RTl-E mRNA表达水平.结果:①正常组活胎数204只,死胎3只,死胎率1.4%,感染组活胎数133只,死胎27只,死胎率16.9%,死胎率明显高于正常组(P<0.05);②正常组RT.BMl mRNA在孕第9、13、15、17天的相对表达水平为(3.21±1.32)、(4.35±1.29)、(3.96±1.49)、(11.1±2.15),前三个时间点表达水平基本一致(P>0.05),第17天则明显增高(P<0.01);RTl-E mRNA在各时间点相对表达水平为(0.79±0.45)、(2.15±1.03)、(2.13±1.74)、(2.394±1.85),第9天明显低于后三个时间点(P<0.05);③感染组各时间点RT.BMl mRNA相对表达水平为(12.4±2.86)、(11.5±3.67)、(6.89±1.59)、(17.3±3.06),第9、13、15天与正常组相比有显著差异(P<0.01);而RTl-E mRNA分别为(1.834±0.886)、(4.72±1.59)、(4.24±2.26)、(3.83±2.26),第9、13、15天与正常组相比均有显著差异(P<0.01)、(P<0.05)、(P<0.01).结果显示弓形虫感染量合适,动物模型成功建立;RT.BMl和RTl-E mRNA在大鼠胎盘的表达水平与妊娠进展密切相关;大鼠早孕期弓形虫感染可致胎盘局部RT.BMl和RTl-E表达增高,从而打破正常妊娠所需的胎蕊局部免疫平衡状态,可能是早孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子机制之一.     

circFTO靶向JAK2/STAT3信号通路促进鼻咽癌的恶性进展

目的:探讨circFTO在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)组织中的表达及其调控鼻咽癌恶性进展的机制。方法:使用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)检测鼻咽癌癌组织和癌旁组织中circFTO的表达水平及circFTO亚细胞定位。采用RT-qPCR检测鼻咽癌细胞系中的circFTO表达水平。同时构建circFTO干扰载体转染鼻咽癌细胞,并利用流式细胞术、EDU实验、CCK-8、Western blot等探索circFTO在鼻咽癌中的功能。结果:circFTO在鼻咽癌组织和细胞中表达上调,且circFTO主要定位在细胞质中(P<0.01)。沉默circFTO能显著抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移能力,促进鼻咽癌细胞的凋亡和凋亡相关蛋白的表达(P<0.05)。沉默circFTO会将鼻咽癌细胞的细胞周期阻遏于G₀/G₁期(P<0.000 1)。此外,机制研究表明,沉默circFTO会显著下调鼻咽癌细胞中pJAK2和pSTAT3蛋白的表达,同时...     

微量酶联夹心杂交法定量检测TNF-α mRNA

目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微板酶联夹心杂交技术, 对人单核细胞分泌的TNF-α mRNA进行定量检测。方法:设计两条特异探针, 其中一条为捕获探针, 5'端带有氨基修饰, 可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合, 而且是"竖直"地包被在微孔内, 另一个为检测探针, 3'端带有生物素标记。提取人单个核细胞总RNA, RT-PCR后的扩增产物经变性后加入已包被好捕获探针的微孔板中, 加入检测探针与已杂交的产物结合, 最后加入亲和素-辣根过氧化物酶(avidin－HRP)显色系统催化底物显色, 450 nm波长下检测吸光度进行定量。结果:该方法检测TNF-αmRNA的灵敏度, 明显高于琼脂糖凝胶电泳, 而且具有良好的重复性, 等量PCR产物作10个复孔, 吸光度的CV值为7.2%, 批间的CV值为9.1%。在本实验中, 我们首次尝试着用客观的数据来表示正常人中1×10⁶个PBMCs中TNF－αmRNA的平均表达量, 发现该表示方法直观明了, 结果稳定, 而且简便可行, 不需要特殊的仪器及昂贵的试剂。结论:本方法具有高灵敏度、高特异性、精确、简单易操作, 结果数据化等优点, 适合于微量细胞因子mRNA的定量检测。