抗CCR7单链抗体的筛选及初步鉴定

目的从噬菌体抗体库中筛选抗CCR7单链融合抗体,并对其生物学特性进行初步检测。方法PCR检测大肠杆菌中ScFv基因插入率;琼脂糖凝胶电泳鉴定SfiI和NotI双酶切质粒的结果;分别以乳腺癌细胞及CCR7多肽片段为靶抗原对抗体库进行4轮和3轮筛选富集。将阳性克隆转化E.coliHB2151进行可溶表达。抗体亲和层析纯化后,经Western blot鉴定,通过ELISA法检测可溶性ScFv抗体的免疫活性。免疫细胞化学和放射免疫显像鉴定scFv抗体与乳腺癌细胞结合的特异性。结果ScFv基因插入率为90%(18/20),双酶切鉴定检测到目的条带。经4轮细胞筛选,3轮抗原筛选抗CCR7抗原的噬菌体抗体得到了明显富集,在E.coliHB2151中实现可溶表达。Western blot结果显示获得抗体相对分子质量为34ku左右。免疫细胞化学检测与放射免疫显像均证实单链抗体与表达CCR7的乳腺癌细胞MDA-MB-435s特异性结合。结论成功从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗CCR7单链抗体。抗体在体内体外均与肿瘤细胞表达特异抗原结合。     

SRT 与3D-CRT 治疗肺癌脑转移瘤价值的临床研究

目的对比研究立体定向放疗(SRT)与三维适形放疗(3D-CRT)在肺癌脑转移瘤治疗中的临床价值。方法回顾分析2009至2011年间本科收治的74例肺癌脑转移瘤患者(脑转移病灶数小于或等于3个、单个病灶小于或等于3cm),分别接受单独三维适形放疗或单独立体定向放疗,比较两组患者中位生存期、局部控制率及放疗不良反应。结果全组患者中位生存期为9.3个月,肿瘤局部控制率分别为73.5%、79.6%,两组患者放疗不良反应比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SRT是脑转移瘤患者的一种有效治疗手段,与常规放疗相比,局部控制率、中位生存期无明显差异,放疗不良反应无增加,但治疗时间较3D-CRT更短,是一种有效的治疗手段。     

调强适形放射治疗同步多西他赛联合奥沙利铂化疗治疗不可切除食管癌的临床研究

目的 分析调强适形放射治疗(intensity modulated radiation therapy,IMRT)同步多西他赛联合奥沙利铂化疗治疗不可切除食管癌的临床效果与安全性.方法 回顾性分析重庆大学附属肿瘤医院2014年2月至2017年2月收治的139例不可切除食管癌患者的临床资料,按照其治疗方式,将接受IMRT...     

人源抗Peroxiredoxin Ⅰ肺腺癌噬菌体抗体的制备及鉴定

目的构建人源噬菌体抗体库,从中筛选出抗PeroxiredoxinⅠ(PrxⅠ)肺腺癌人源单链抗体。方法提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接得到单链抗体(ScFv);将双酶切后的ScFv基因片段克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,得到初级噬菌体抗体库。PCR检测TG1中ScFv基因插入率;1%琼脂糖凝胶电泳鉴定SfiI和NotI双酶切质粒的结果;以肺腺癌细胞株D549及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白PrxI为靶抗原对抗体库进行筛选富集。将阳性克隆用IPTG诱导表达。用SDS-PAGE及Westernblotting鉴定该抗体;用ELISA法、免疫细胞化学法鉴定该抗体与人肺腺癌细胞的结合特异性。结果成功构建噬菌体单链抗体库。ScFv基因插入率为77%,双酶切鉴定检测到目的条带。在亲和筛选过程中,肺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍。随机选取10个克隆,通过ELISA法检测到其中6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率为60%。SDS-PAGE及Westernblottin...     

放化疗联合治疗局部晚期鼻咽癌的临床观察

  目的  在局部晚期鼻咽癌根治性放疗联合紫杉醇、顺铂化疗中, 分析同步治疗与序贯治疗对治疗疗效的影响。  方法  144例局部晚期鼻咽癌病例进行随机分组, 同步治疗组: 放疗联合TP同步化疗; 序贯治疗组: 一疗程TP诱导化疗+根治性放疗+3疗程TP辅助化疗。放疗采用三维适形技术, 化疗采用紫杉醇联合顺铂方案。放疗及化疗方案联合治疗与同步治疗相同。  结果  全部病例至少随访2年, 同步治疗组与序贯治疗组: 局部控制率分别为81.2%与76.3%;远处转移率分别为9.7%与19.4%;2年无瘤生存率分别为76.4%与66.7%。  结论  研究表明局部晚期鼻咽癌接受同步放化疗, 无瘤生存率提高, 远处转移率降低; 不良反应与序贯治疗相比, 主要是放射性黏膜炎发生率和严重程度增加, 但经对症处理, 患者一般都能耐受。      

抗人肺癌单链抗体噬菌体库的构建及特异性单链抗体的鉴定

目的 构建人源噬菌体抗体库,并从中筛选出抗肺癌人源单链抗体。方法 提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因（VH）和轻链可变区基因（VL）,再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将VH 和VL连接得到单链抗体（ScFv）。将双酶切后的ScFv基因片段克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,得到初级噬菌体抗体库。以肺腺癌细胞株A549为抗原对抗体库进行4轮筛选富集,鉴定抗体库性能。将得到的阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测。结果 成功构建噬菌体单链抗体库。经筛选富集,噬菌体收获率得到增加,第4轮是第1轮的115倍。随机选取10个克隆,通过ELISA法检测到其中7个与A549细胞呈阳性反应,阳性率为70%。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗肺癌单链抗体。结论 成功构建人源单链抗体噬菌体库,从中获得具有较高特异性的抗人肺癌单链抗体。     

抗Peroxiredoxin Ⅰ肺腺癌噬菌体抗体的筛选及其在荷瘤裸鼠体内的分布

目的：通过对已构建的肺腺癌相关人源单链抗体库进行筛选,得到抗过氧化物酶Peroxiredoxin Ⅰ (Prx Ⅰ）肺腺癌单链抗体,评价抗体在动物模型体内分布及靶向显像作用。方法：PCR法检测大肠杆菌TG1中单链抗体single-chain variable fragment (scFv) 基因插入率;凝胶电泳鉴定Sfi Ⅰ和Not Ⅰ双酶切质粒结果;以肺腺癌细胞株A549和在肺癌中高表达的抗氧化蛋白Prx Ⅰ为靶抗原,对抗体库进行富集筛选。阳性克隆用IPTG诱导表达并检测。放射性核素131I标记纯化抗体,进行荷瘤裸鼠体内分布及SPECT放射免疫显像研究。结果：scFv基因插入率为77%（23/30）,双酶切鉴定证实目的条带。通过亲和筛选,肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮是第1轮的180倍。选取10个克隆经ELISA法检测,其中6个克隆与A549细胞呈阳性反应,阳性率60%（6/10）。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体。竞争ELISA显示抗〖JP3〗体能有效结合A549细胞。核素标记抗体的放射化学纯度为(95.6±3.7)%,比活度为(2.8±0.2) TBq/g体内分布研究显示抗体与肺腺癌组织有效结合。尾静脉注射48 h后,瘤/血和瘤/肌肉放射性比值均达最大值,分别为(4.06±0.13)和(5.17±0.97) %ID/g。SPECT示抗体与肿瘤有效结合。抗体注射后48 h的T/NT值（3.73±0.20）明显高于12 h（1.26±0.15）、24 h（2.18±0.16）和72 h（2.85±0.18）(均P<0.01）。结论：利用肺腺癌细胞A549和Prx Ⅰ为靶抗原,从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体。在体内抗体能与肺腺癌组织特异性结合。     

人源噬菌体抗体对Peroxiredoxin Ⅰ高表达肺腺癌细胞增殖的抑制作用

背景与目的:研究表明过氧化物酶Peroxiredoxin Ⅰ(Prx Ⅰ)与癌症的发展有密切关系。我们已通过噬菌体展示技术构建了肺腺癌相关的人源单链抗体库。本研究对该库进行筛选,得到抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体,并检测其对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法:PCR法检测TG1中scFv基因插入率,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定Sfi Ⅰ和Not Ⅰ双酶切质粒的结果,以A549细胞及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白Prx Ⅰ为靶抗原分别对抗体库进行3轮筛选富集。将阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测。放射性核素计数法测定细胞单链抗体内摄水平,MTT法及流式细胞术检测单链抗体对A549细胞的增殖抑制和凋亡情况,免疫印迹法检测抗体作用A549细胞后Prx Ⅰ的表达水平。结果:scFv基因插入率为77%,双酶切鉴定检测到目的条带。在亲和筛选过程中,肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍。ELISA法检测到在随机选取的10个克隆中,有6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率60%。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗PrxI肺腺癌单链抗体。被A549细胞内摄的单链抗体介导了细胞的凋亡以及细胞内Prx...     

人源噬菌体抗体对Peroxiredoxin I高表达肺腺癌细胞增殖的抑制作用

背景与目的：研究表明过氧化物酶Peroxiredoxin I （Prx I）与癌症的发展有密切关系。我们已通过噬菌体展示技术构建了肺腺癌相关的人源单链抗体库。本研究对该库进行筛选,得到抗PrxI肺腺癌单链抗体,并检测其对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法：PCR法检测TG1中scFv基因插入率,1％琼脂糖凝胶电泳鉴定蹄I和Not I双酶切质粒的结果,以A549细胞及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白PrxI为靶抗原分别对抗体库进行3轮筛选富集。将阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测。放射性核素计数法测定细胞单链抗体内摄水平,MTT法及流式细胞术检测单链抗体对A549细胞的增殖抑制和凋亡情况,免疫印迹法检测抗体作用A549细胞后PrxI的表达水平。结果：scFv基因插入率为77％,双酶切鉴定检测到目的条带。在亲和筛选过程中．肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍。ELISA法检测到在随机选取的10个克隆中．有6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率60％。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗Prx I肺腺癌单链抗体。被A549细胞内摄的单链抗体介导了细胞的凋亡以及细胞内PrxI蛋白表达水平的下降。结论：从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗PrxI肺腺癌单链抗体。单链抗体与肺腺癌细胞有特异性亲和力,并能有效抑制其增殖。     

螺旋断层放疗在胸中下段食管癌治疗中对心脏功能保护的研究

【摘要】目的:对比胸中下段食管癌螺旋断层放疗和适形调强放疗心脏的剂量分布,分析螺旋断层放疗前后的心肌酶谱,评估螺旋断层放疗在食管癌治疗中对心脏功能的保护作用。方法:筛选37例胸中下段食管鳞癌患者,为每位患者制定适形调强放疗和螺旋断层放疗计划,比较两种放疗方式的计划靶区（PTV）、心脏的剂量学参数。同时在螺旋断层放疗前一周及一周后进行心肌酶谱检查,并对放疗心肌酶谱进行对比分析。结果:螺旋断层放疗的PTV与心脏最大剂量,心脏V20、V30、V40、V50、V60均明显低于适形调强放疗,差异有统计学意义（P<0.05）;两种放疗方式的PTV适形度指数差异有统计学意义（P<0.05）,而PTV均匀性指数、TOMO前后心肌酶谱差异无统计学意义（P>0.05）。结论:螺旋断层放疗在靶区剂量分布优于适形调强放疗的条件下,能显著降低心脏的最大剂量,并且引起的早期心肌损伤不明显,对心脏起到更好的保护作用。