浸润性乳腺癌组织中LAMA2基因甲基化水平及其与患者临床病理特征和预后的相关性

目的:探讨浸润性乳腺癌患者组织中基因编码层粘连蛋白2（LAMA2）基因的甲基化率并分析其临床意义。方法:选取101例行择期根治术治疗的浸润性乳腺癌患者为研究对象,采用焦磷酸测序和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测癌组织及癌旁组织中LAMA2的甲基化率及其表达情况,并分析其与临床病理特征的相关性以及预后因素。结果:101例乳腺癌组织中LAMA2甲基化率为96%,甲基化率显著高于相应的癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05)。同时,在乳腺癌组织中,LAMA2启动子区域高甲基化的癌组织样本中LAMA2的mRNA表达较低（P＜0.05）。LAMA2甲基化与肿瘤直径、腋窝淋巴结转移、组织学分级和HER-2表达相关,差异有统计学意义(P均<0.05)。Cox 比例风险模型分析提示,淋巴结转移和LAMA2甲基化是乳腺癌的独立预后因素(RR=32.127、1.222,95%CI=1.296~796.112、1.103~1.355,P=0.034、0.000)。结论:LAMA2甲基化及其异常表达可能与乳腺癌有关。LAMA2与乳腺癌的发生发展密切相关,首次报道其甲基化程度可作为乳腺癌恶性程度和预后的潜在生物学标志。     

乳腺癌HOXA4基因甲基化的检测及其临床意义

目的探讨乳腺癌患者HOXA4基因启动子甲基化的情况及其与临床病理特征的相关性。 方法运用NEBNext^? Ultra? RNA Library Prep Kit for Illumina^?进行基因表达芯片测序,运用随机数字表法选择2014年深圳市宝安区妇幼保健院收治的9例乳腺癌患者,分析癌组织与相应癌旁组织异常差异表达的基因。运用Illumina Infinium HD Methylation 450K Assay进行DNA甲基化测序,分析乳腺癌甲基化差异基因。基于肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库信息,分析乳腺癌的差异表达基因和差异甲基化基因。挑选显著高甲基化与低表达的基因,结合生物信息学,确定HOXA4为候选基因。运用随机数字表法收集2014—2017年深圳市宝安区妇幼保健院收治的另外86例乳腺癌患者,采用焦磷酸测序法和RT-PCR,检测乳腺癌组织及其癌旁乳腺组织中HOXA4基因甲基化率和mRNA表达,用Fisher确切概率法分析甲基化率与患者临床病理特征的关系。用Cox比例风险模型进行风险因素的单因素和多因素分析。分别用0、0.5、1、5、10、20 μmol/L的甲基化抑制剂RG108处理乳腺癌MCF-7细胞5 d后,检测HOXA4 mRNA的表达。 结果基因表达数据芯片分析发现在乳腺癌组织中有1 680个显著上调的基因和1 249个下调基因,整体水平上在不同区域乳腺癌患者甲基化水平较癌旁组织高(P均<0.001)。86例乳腺癌组织中HOXA4基因的甲基化率为94% (81/86),其中,30例高甲基化,52例低甲基化;而在对应癌旁组织中,HOXA4基因甲基化率为57%(49/86),其中49例低甲基化,无高甲基化(P<0.001)。有HOXA4甲基化组的癌组织样本中HOXA4 mRNA表达低于无HOXA4甲基化组的癌组织样本(P＝0.003)。HOXA4基因甲基化水平与乳腺癌淋巴结转移、ER表达有关(P＝0.039、0.017)。单因素分析结果显示患者的TNM分期、组织学分级、淋巴结转移及HOXA4甲基化是DFS的危险因素(RR＝4.008,95%CI＝1.296～12.393,P＝0.016;RR＝10.111,95%CI＝2.607～39.217,P＝0.001;RR＝4.588,95%CI＝1.201～17.523,P＝0.026;RR＝1.051,95%CI＝1.007～1.098,P＝0.024)。多因素分析显示组织学分级是乳腺癌患者DFS的独立预后因素(RR＝14.461,95%CI＝2.429～86.100,P＝0.003)。采用不同浓度的RG108来处理MCF-7细胞后,各组HOXA4 mRNA表达比较,差异有统计学意义(χ²＝4.472,P＝0.029)。 结论HOXA4基因启动子甲基化在乳腺癌的发生、发展中起着重要作用,有潜力作为新的分子生物学指标,用于乳腺癌临床诊断。     

“益气养阴通络法”通过调控SIRT1延缓糖尿病肾病进展的研究

目的:观察SIRT1在"益气养阴通络法"治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的作用。方法:将179例确诊为Ⅲ期和Ⅳ期DN患者随机分为基础治疗对照组(76例)和"益气养阴通络法"综合治疗组(103例),评价两组患者临床症状疗效、尿微量白蛋白(Alb)及肌酐清除率(Ccr);并通过免疫组化和免疫荧光法分析SIRT1在人肾组织中的表达情况及在DN患者中的变化情况;进一步通过逆转录病毒沉默原代大鼠肾小管上皮细胞(TEC)SIRT1后,观察TEC在AGE-BAS刺激后的凋亡情况。结果:经过6个月治疗,"益气养阴通络法"综合治疗组中医症状积分改善、微量白蛋白排泄率降低及肌酐清除率升高的患者比率明显高于基础治疗对照组(P<0.01);停药6个月后进行随访,"益气养阴通络法"综合治疗组的远期疗效也优于基础治疗对照组(P<0.01)。免疫组化和免疫荧光显示,SIRT1在人肾组织的足细胞、内皮细胞及小管上皮细胞等均有表达,并且上述表达在DN患者中明显降低;而经"益气养阴通络法"治疗后SIRT1表达明显增强。进一步通过体外实验证实,沉默SIRT1后,cleaved caspase3蛋白表达在AGE-BSA刺激的TEC中明显升高。结论:"益气养阴通络法"在治疗DN过程中有着显著作用,而上述疗效可能是通过上调肾脏固有细胞中SIRT1实现的。     

环乳晕切口乳腺纤维瘤手术对患者术后哺乳的影响

目的:探讨环乳晕切口乳腺纤维瘤手术对患者术后哺乳的影响。方法:回顾某院2011年1月~2015年12月期间收治的412例乳腺纤维瘤患者临床资料,其中158例接受传统非乳晕切口手术的为对照组,254例接受环乳晕切口手术的为观察组。从手术时间、术中出血量及术后哺乳率方面比较两组患者的情况。结果:观察组患者手术时间(37.47±3.12)min、术中出血量(4.25±0.24)ml与对照组(27.55±3.82)min、(3.45±0.27)ml比较,差异有统计学意义(P0.05)。随访2年,观察组哺乳率74.85%与对照组79.44%,差异无统计学意义(P0.05)。结论:针对乳腺纤维瘤患者来说,可采用在环乳晕切口切除肿瘤的方式,这种方法瘢痕隐蔽,美容效果良好,并且不会影响患者术后生育哺乳,值得推广。