磁性阳离子高分子脂质体结合野生型p53投递系统的构建

目的用合成的磁性阳离子高分子脂质体与野生型p53(WTp53)基因质粒结合,构建靶向纳米载体投递系统,为进一步行静脉内皮细胞转染奠定基础。方法应用大肠杆菌重组质粒扩增法扩增WTp53质粒DNA,合成的磁性阳离子高分子脂质体为羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐/胆固醇(OQCMC/Chol)包覆油溶性Fe3O4的载体粒子。在不同的pH值及不同的WTp53质粒DNA和载体粒子质量比的条件下,将WTp53质粒DNA与OQCMC/Chol超微磁性载体粒子进行混合,并分别进行DNA结合实验和沉淀实验。观察电泳结果,并用SPSS 13.0统计软件进行数据分析。在DNaseⅠ模仿体内酶的环境下,将其加入制备好的超微载体投递系统中,电泳后观察投递系统对DNA的保护作用。应用透析系统模拟体内环境,观察超微投递系统载体与基因分离情况,并利用紫外分光光度计测量超微载体投递系统累积缓释曲线。结果应用透射电镜观察OQCMC/Chol超微磁性载体粒子和WTp53结合后的投递粒子。在pH 7条件下,WTp53质粒DNA和载体粒子质量比为1∶0.6,p53质粒DNA与OQCMC/Chol超微磁性载体粒子经过直接静电作用几乎100%结合,并证实该投递系统对DNA具有较好的保护作用。超微载体投递系统在7～12 h左右有明显的突释波峰,到第54小时以后,超微载体释放浓度变化缓慢,并可持续释放9 d以上。结论成功构建磁性阳离子高分子脂质体结合WTp53投递系统,将为进一步行细胞转染奠定可靠的基础,并为构建血管内靶向定位基因投递新方法和新技术提供可靠理论依据。     

毒胡萝卜素对小鼠肺成纤维细胞内钙离子水平及caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨钙泵抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)对体外小鼠肺成纤维细胞内钙离子（Ca2+）水平及凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（caspase-3）表达的影响。方法 小鼠肺成纤维细胞(L929)分为3组:空白对照组(不做处理)、转化生长因子β₁（TGF-β₁）组、TG组,后两组均用5 ng/mL TGF-β₁诱导24 h,TG组在诱导后再用4 μmol/L TG作用24 h。细胞处理48 h后,分别收集各组细胞,采用透射电子显微镜观察细胞超微结构变化,激光共聚焦显微镜观察各组细胞内Ca2+水平,免疫细胞化学方法检测caspase-3蛋白表达。结果 透射电子显微镜示,空白对照组细胞凋亡较少,TGF-β₁组无明显凋亡细胞,TG组有大量成纤维细胞凋亡。TGF-β₁组Ca2+水平和caspase-3蛋白水平均低于空白对照组（P<0.05）,TG组细胞内Ca2+水平和caspase-3蛋白水平均较TGF-β₁组、空白对照组升高（P<0.05）。结论 TG可使小鼠肺成纤维细胞细胞内钙稳态失衡,增加caspase-3蛋白表达,促进细胞凋亡。     

靶向HIV-1细胞受体基因CCR5的不对称siRNA的稳定性和体内分布研究

目的:探讨靶向HIV-1细胞受体基因CCR5的不对称siRNA (asiRNA)在血清和动物体内的稳定性和在动物体内分布情况.方法:用内皮抑素同脂质胶束联合递送asiRNA,琼脂糖凝胶电泳法检测asiRNA的血清稳定性,ELISA法和活体荧光成像法检测asiRNA的体内分布.结果:改变合适的实验条件和asiRNA的修饰,可提高asiRNA的血清稳定性.用ELISA法检测出静脉给药15 min后双链asiRNA在血液、肝、肺和肾内浓度较高,用活体荧光成像法检测出静脉给药24h后asiRNA向肾内汇集排泄,两种检测方法测得asiRNA在脾内浓度较低.结论:两种检测方法方便实用,灵敏度不同,均可用于阳离子脂质体递送asiRNA的体内分布检测.     

17β-雌二醇对小鼠肺成纤维细胞凋亡及Ⅰ型胶原表达的影响

目的探讨不同浓度17β-雌二醇(17β-E2)对小鼠肺成纤维细胞凋亡及Ⅰ型胶原表达的影响。方法将体外培养的小鼠肺成纤维细胞分为5组:空白对照组,SiO2组,SiO2+不同剂量17β-E2组(10-8、10-7、10-6 mol/L),于作用24、48、72h后收集细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组化法检测Ⅰ型胶原表达。结果与空白对照组比较,SiO2处理组小鼠肺成纤维细胞凋亡率明显降低(P0.05),而SiO2+17β-E2处理组各时点随着17β-E2剂量增大凋亡率明显升高(P0.05),随处理时间延长,各剂量17β-E2组成纤维细胞凋亡率明显升高(P0.05);各处理组Ⅰ型胶原表达有明显差异,与空白对照组比较,SiO2组Ⅰ型胶原表达均明显增高(P0.05),而17β-E2处理组Ⅰ型胶原表达均明显低于SiO2处理组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 17β-E2促进小鼠肺成纤维细胞凋亡,抑制Ⅰ型胶原表达,进而抑制肺纤维化。     

17β-雌二醇对SiO 2刺激的小鼠肺成纤维细胞表达Caveolin-1和Ⅲ型胶原的影响

目的 探讨不同浓度17β-雌二醇(17β-E2)对二氧化硅(SiO2)刺激的小鼠肺成纤维细胞表达Caveolin-1和Ⅲ型胶原的影响.方法 将体外培养的小鼠肺成纤维细胞分5组:空白对照组,SiO2 (100 mg/L)组,SiO2(100mg/L)+不同剂量17β-E2组(10-8、10-7、10-6 mol/L),17β-E2作用48 h后收集各组细胞,应用免疫组化法检测Caveolin-1和Ⅲ型胶原表达.结果 SiO2处理组小鼠肺成纤维细胞与空白对照组比较Caveolin-1表达降低(P＜0.05),而SiO2+17β-E2处理组随着17β-E2剂量增大Caveolin-1表达明显升高(P＜0.05);各处理组Ⅲ型胶原表达差异有统计学意义(P＜0.05),SiO2组与空白对照组比较增高(P＜0.05),而17β-E2处理组均低于SiO2组(P＜0.05);相关分析显示,17β-E2与Caveolin-1的表达呈正相关(r=0.926,P＜0.05),与Ⅲ型胶原表达呈负相关(r=-0.914,P＜0.05),Caveolin-1与Ⅲ型胶原表达亦呈负相关(r=-0.887,P＜0.05).结论 17β-E2可能通过上调肺成纤维细胞Caveolin-1的表达,抑制Ⅲ型胶原表达而发挥抗纤维作用.     

羧甲基壳聚糖季铵盐作为基因载体及动物体内分布研究

基因疗法是治疗肿瘤的新手段[1-2]。但目前面临的主要障碍是缺乏合适的基因治疗载体[3-4]。由于病毒性基因载体存在导向性差、携带能力低、免疫原性和潜在致瘤性等缺点[5]。因此,针对其缺点研制非病毒载体近来成为研究的热点,主要包括真核细胞表达质粒载体、阳离子聚合     

磷酸钙/磷脂-MPEG组装复合纳米粒促进耐药细胞MCF-7/MIT的药物摄取研究

背景与目的:乳腺癌耐药是导致临床上化疗失败的一个重要原因,逆转乳腺癌耐药已经成为急待解决的问题.纳米递送系统作为药物载体有很多优点,将其作为抗癌药物载体是逆转肿瘤耐药的有效策略之一.本文研究一种新型的纳米递送系统:磷酸钙/磷脂-MPEG组装复合纳米粒对乳腺癌耐药相关蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)高表达的乳腺癌盐酸米托蒽醌(mitoxantrone,MIT)耐药细胞MCF-7/MIT药物摄取的影响,从而探讨该纳米递送系统对MCF-7/MIT细胞耐药性的逆转作用.方法:设计并制备了磷酸钙/磷脂组装复合纳米粒,考察了载盐酸米托葸醌纳米粒的包封率和体外药物释放规律,定量比较了MCF-7和MCF-7/MIT细胞对载药纳米粒和游离药物的摄取,并采用激光共聚焦显微镜观察方法比较细胞摄取载药纳米粒和游离药物后药物在细胞内分布情况.结果:磷酸钙/磷脂组装复合纳米粒呈均匀的多孔球形,粒径＜100 nm,包载药物盐酸米托蒽醌的包封率为(89.45±0.05)%,药物释放呈初期突释和后期缓释两相.载药纳米粒与游离药物作用于细胞1 h后,在MCF-7/MIT细胞内的药物摄取量前者是后者的1.89倍,在MCF-7细胞内的药物摄取量前者是后者的2.33倍,载药纳米粒可以携带药物进入细胞核,而游离药物未见明显的核内分布.结论:磷酸钙/磷脂-MPEG组装复合纳米粒可以促进乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7/MIT细胞对抗癌药物盐酸米托蒽醌的摄取,并能携带药物进入细胞核,是一种有潜力的逆转肿瘤耐药纳米药物载体.     

新型盐酸米诺环素缓释凝胶对牙周致病菌的缓释抑菌作用

目的:评价新型盐酸米诺环素缓释凝胶对牙周主要致病菌的体外缓释抑菌效果。方法:采用超声乳化法制备20 g/L盐酸米诺环素缓释凝胶及非缓释凝胶,以琼脂纸片扩散法检测二者在1、3、5 h和1、3、5、7 d七个时间点的释放液对Pg、Fn、Av、Pi.的抑菌活性,测量抑菌环直径。结果:缓释凝胶组对于Pg、Fn、Av、Pi抑菌作用均可持续到7 d;而非缓释凝胶组对Pg、Fn、Av的抑菌作用仅能维持到3 d,对Pi的抑菌作用可持续到5 d。结论:新型盐酸米诺环素纳米缓释凝胶对Pg、Fn、Av、Pi抑菌作用均可持续到7 d以上,具有较好的缓释抑菌效果。