血小板源性生长因子-BB对大鼠血管平滑肌细胞表皮调节素表达的影响

目的: 研究表皮调节素(epiregulin)在血小板源性生长因子-BB ( platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB ) 促进大鼠血管平滑肌CS-54细胞株增殖中的作用.方法: 针对大鼠表皮调节素基因的mRNA序列合成siRNA,采用脂质体转染法将其转染CS-54细胞;用蛋白质印迹检测PDGF-BB及siRNA转染对CS-54细胞表皮调节素蛋白表达的影响;用MTT法分析干扰表皮调节素表达对PDGF促进CS-54细胞增殖效应的影响.结果: PDGF-BB促进细胞增殖,效应具有浓度和时间依赖性,在50 ng/ml PDGF-BB作用24 h时其效果最为明显;PDGF-BB可以刺激CS-54细胞表皮调节素蛋白的表达;表皮调节素siRNA转染细胞,可使表皮调节素蛋白表达水平明显降低,并明显阻断PDGF-BB对CS-54细胞增殖的促进作用(P<0.05).结论: PDGF-BB刺激CS-54细胞增殖的作用是通过诱导CS-54细胞表达表皮调节素蛋白实现的.     

留学生人体生理学全英文教学实践与探讨

留学生教育是高校教育国际化的标志。江苏大学留学生教育已有3a,在这个过程中,对留学生的生理学教学也取得了一定的教学经验和认识。本文阐述了生理学教研室在留学生理论课教学中通过不断实践、创新及改革,总结出的一套行之有效的全英文教学方法,该方法在提高留学生人体生理学教学质量上已显示出良好效应。     

一氧化氮对胃癌细胞AGS 生长的抑制及其机制探讨*

目的:探讨外源一氧化氮（nitric oxide,NO）对胃癌AGS 细胞生长及c-jun和c-fos表达的影响。方法:应用MTT 法评价NO供体硝普钠（sodium nitroprusside,SNP ）,SNP 的同源类似物铁氰化钠Na3Fe（CN）6 和一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS ）抑制剂N-硝基-L- 精氨酸甲酯（N-nitro-L-arginine methylester ,L-NAME ）对胃癌细胞生长的抑制作用,RT-PCR 和免疫印迹检测c-jun和c-fos的基因和蛋白表达。结果:SNP 剂量依赖性的抑制AGS 细胞的生长,其IC 50值为2.13mmol/L 。1mmol/L SNP 处理12、24、48h 后,细胞生长抑制率分别为（16.12± 0.85）% 、（20.33± 1.31）% 、（22.06± 2.03）%（P<0.05）,NOS 抑制剂L-NAME 预处理明显减弱了SNP 对癌细胞的生长抑制效应,Na3Fe（CN）6 对胃癌细胞生长无抑制。与对照组比较,SNP 使c-jun和c-fos的mRNA 和蛋白表达降低,NOS 抑制剂L-NAME 预处理逆转了SNP 的这种作用,Na3Fe（CN）6 对c-jun和c-fos的mRNA 和蛋白表达无影响。结论:NO可诱导胃癌细胞c-jun和c-fos表达降低,抑制癌细胞生长。      

cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ对胃癌细胞BGC-823迁移的影响

目的:研究cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ(cGMP dependent protein kinase Ⅱ,PKG Ⅱ)对胃癌细胞株BGC-823迁移活动的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法:以携带PKG Ⅱ基因的腺病毒结构Ad-PKG Ⅱ感染胃癌BGC-823细胞,用蛋白质印迹法及免疫荧光检测感染病毒后PKG Ⅱ的表达.用特异性PKG Ⅱ激活剂8-pCPT-cGMP作用感染病毒的细胞,通过Boyden 槽迁移率、刮除迁移分析法分析PKG Ⅱ高表达和活性增高对Ras同源性蛋白A(Ras homolog A, RhoA)激动剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导的胃癌细胞迁移的影响.结果:胃癌细胞株BGC-823 在感染Ad-PKG Ⅱ后高表达PKG Ⅱ,经cGMP类似物8-pCPT-cGMP 激活后,使RhoA活化诱导的细胞迁移活动受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:PKG Ⅱ能明显抑制胃癌细胞株BGC-823的迁移.     

NO对胃癌细胞系AGS增殖的影响

背景与目的:一氧化氮(nitric oxide,NO)参与机体内的多种生理和病理反应,它作为重要的生物介质在肿瘤发生、发展和死亡中的作用已成为肿瘤研究的热点.本实验通过研究NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对胃癌细胞系AGS的作用,探讨NO对胃癌细胞生长增殖的影响.方法:应用MTT法评价SNP对细胞生长的抑制,流式细胞术检测细胞周期的变化,RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3的mBNA基因表达,Western biot检测PCNA和caspase-3蛋自的表达.结果:SNP可剂量依赖性地抑制AGS细胞的生长,100、500、1 000、1 500、2 000 μmol/L SNP处理24 h,细胞生长抑制率分别为(2.02±2.96)%、(10.82±2.21)%、(18.95±3.35)%、(26.88 ±2.54)%、(42.57±1.27)%;SNP可以使细胞周期发生变化,与对照组比较100、500、1 000、1 500、2 000 μmol/LSNP处理24 h,S期细胞分别减少2.29%、7.8%、11.34%、20.49%、23.6%.G_0/G_1期细胞分别增加3.33%、9.3%、13.46%、21.37%、24.73%(P<0.05):随着SNP剂量增加和作用时间延长,PCNA mRNA和蛋白表达逐渐降低;caspase-3 mRNA表达无改变,但caspase-3酶原被裂解活化.结论:NO能抑制AGS细胞的生长和增殖,诱导细胞的凋亡,其作用呈显著的浓度依赖性.     

一氧化氮抑制胃癌细胞系SGC-7901增殖及C-FOS和C-JUN表达

目的 探讨一氧化氮（nitric oxide, NO）对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响及其机制。方法 MTT法测定细胞的生长,RT-PCR和Western印迹法检测C-FOS 和C-JUN的mRNA和蛋白表达。结果 SNP抑制SGC-7901细胞的生长(P < 0.05),并呈剂量和时间性降低C-FOS 和C-JUN mRNA及蛋白表达。结论 NO可能通过下调C-FOS 和C-JUN的表达而抑制胃癌细胞的增殖。     

PKGⅡ对胃癌SGC-7901细胞增殖相关的MAPK/ERK下游信号分子的抑制作用

目的:探讨cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ(cGMP-dependent protein kinaseⅡ,PKGⅡ)对人胃癌SGC-7901细胞增殖相关的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)下游核糖体S6激酶1(ribosomal S6 kinase1,RSK1)和原癌基因c-Jun、c-Fos的作用。方法:用腺病毒Ad-LacZ和Ad-PKGⅡ感染SGC-7901细胞,使细胞高表达PKGⅡ;用特异性PKGⅡ激活剂8-pCPT-cGMP[8-(p-chlorophenylthio)-cyclic GMP]作用于感染了腺病毒的细胞,再用表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)进行刺激。MTT法检测PKGⅡ对EGF刺激引起的SGC-7901细胞增殖的影响,RT-PCR法和蛋白质印迹法分别检测PKGⅡ对EGF引起的SGC-7901细胞中c-Jun、c-FosmRNA和p-RSK1、c-Jun、c-Fos蛋白表达的影响,免疫荧光显微镜下观察p-RSK1在SGC-7901细胞核内的分布情况。结果:8-pCPT-cGMP作用于感染了Ad-PKGⅡ的SGC-7901细胞后,EGF对SGC-7901细胞的增殖促进作用和EGF诱导的c-Jun、c-FosmRNA和蛋白的表达受到抑制,RSK1(Ser380)磷酸化水平明显降低;EGF刺激后,SGC-7901细胞核内大量累积p-RSK1,8-pCPT-cGMP作用后细胞核内p-RSK1减少。结论:激活的PKGⅡ可有效抑制EGF诱导的胃癌细胞的增殖、RSK1Ser380位点的磷酸化、p-RSK1在细胞核内的累积以及原癌基因c-Jun和c-Fos的表达。     

Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶重组腺病毒载体的构建、鉴定及初步应用

目的：构建携带Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶（PKGII）基因的重组腺病毒载体,并以此初步研究PKGⅡ对增殖相关的MAPK信号转导的影响。方法：将PKGⅡcDNA片段自载体pRC／CMV-GKⅡ（wt）中切出,克隆至穿梭质粒pENTR1A,用ClonaseⅡ将pENTR—PKG11中的PKGⅡcDNA片段定向克隆到pAd／CMV／V5．DEST中构建pAd／CMV／V5-DEST—PKGⅡ（Ad—PKGⅡ）。重组质粒Ad—PKGⅡ用PacⅠ酶酶切,使其线性化,再用脂质体转染法转染HEK293A细胞进行包装和扩增,微量全细胞病变法检测病毒滴度,蛋白质印迹法检测重组腺病毒Ad—PKGⅡ感染细胞后PKGⅡ的表达以及MAPK通路关键成分胞外信号调节激酶（ERK）活性的变化。结果：重组腺病毒滴度达5&#215;10^9 pfu／ml,蛋白质印迹法检测显示重组腺病毒感染CS54细胞后使其PKGⅡ表达明显增高;在BGC-823胃癌细胞株,PKGⅡ对EGF导致的ERK的激活有明显抑制作用。结论：成功构建了携带PKGⅡ基因的重组腺病毒,初步证明PKGⅡ对细胞增殖相关信号转导有抑制作用,为进一步研究PKGⅡ与肿瘤细胞发生发展的关系提供了基础。     

外源一氧化氮对胃癌SGC-7901细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨外源一氧化氮(nitric oxide, NO)对胃癌细胞生长和增殖的影响.方法:应用MTT法评价NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methylester,L-NAME)对胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用,RT-PCR和Western印迹法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达,FCM法检测细胞周期的变化.结果:SNP使细胞周期发生变化,与对照组比较,S期细胞减少,G_0/G_1期细胞增多,细胞由IC50/G_1期进入S期延缓;SNP抑制SGC-7901细胞的生长,PCNA mRNA、PCNA蛋白和Caspase-3蛋白表达降低.而NOS抑制剂L-NAME预处理逆转了SNP的这种作用.结论:NO可抑制胃癌细胞生长和增殖,加速细胞凋亡.