白藜芦醇对BGC-823细胞人程序化死亡分子5表达及凋亡的影响

目的：探讨白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞中凋亡相关基因人程序化死亡分子5（PDCD5）表达的影响,并观察白藜芦醇诱导BGC-823细胞凋亡的效应。方法：分别用25、50、100和200μmol/L的白藜芦醇处理BGC-823细胞24、48和72h后,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测PDCD5表达的变化;运用流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡情况。另设空白对照组和溶剂对照组。结果：同一时间点,6组PDCD5蛋白及mRNA的表达差异均有统计学意义（F蛋白=211.881、242.438和184.866,P均〈0.001;FmRNA=207.366、148.411和158.661,P均〈0.001）;同一浓度,24、48和72h时点各组比较,PDCD5蛋白及mRNA的表达差异均无统计学意义（F蛋白=0.950、1.870、2.218和2.232,P均〉0.05;FmRNA=1.267、2.376、1.221和2.292,P均〉0.05）。各组BGC-823细胞凋亡指数比较,差异有统计学意义（F=230.069,P〈0.001）。结论：凋亡相关基因PDCD5可能在白藜芦醇诱导胃癌BGC-823细胞凋亡过程中发挥重要作用。     

真核起始因子4E反义寡核苷酸对人食管癌EC-1细胞中真核起始因子4E表达的影响

目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核酸(ASODN)对人食管癌EC-1细胞中eIF4E表达的影响.方法:将针对eIF4E不同基因位点的2条反义寡核苷酸(ASODN1、2)和1条无义寡核苷酸(N-ODN)转染EC-1细胞(设5、10、15 μmol/L 3个转染浓度),分别培养24、48、72 h,并设空脂质体转染作为空白对照,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测转染后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达的变化.结果:ASODN 1、2转染EC-1细胞培养24、48、72 h后,各组中eIF4E蛋白和mRNA的表达均降低,2者分别与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05);ASODN1、2组每个时间段内随浓度增加ASODN抑制效应增强,差异具有统计学意义(F=9.423、10.284、10.496、7.621、8.420和9.089,P＜0.05),组间相同时间点、相同浓度的抑制效应比较差异无统计学意义(P＞0.05);N-ODN组和空白对照组对eIF4E的表达均无抑制效应.结论:特异性的ASODN能有效抑制人食管癌EC-1细胞中eIF4E的表达.     

siRNA对人食管癌EC9706细胞真核起始因子4E表达的影响

目的探讨siRNA对人食管癌EC9706细胞中eIF4E表达的影响。方法针对GeneBank中eIF4E基因的不同靶点,设计并合成两条特异siRNA及一条无义siRNA寡核苷酸模板,利用体外转录法合成siRNA,在脂质体介导下以150ng/μl、200ng/μl和250ng/μl三种浓度转染EC9706细胞,分别培养24h、48h、72h,同时设正常对照组。采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测转染前后EC9706细胞中eIF4E蛋白和mRNA的表达;应用流式细胞技术检测转染前后EC9706细胞周期的变化情况。结果转染siRNA后细胞形态发生明显改变。不同浓度的两条特异siRNA转染细胞后,eIF4E蛋白及mRNA表达量均较正常对照组降低,并且具有显著的剂量依赖性（P<0.05）,但两转染组之间相比,差异无统计学意义（P>0.05）;无义siRNA未表现出对eIF4E基因表达的抑制效应（P>0.05）;两条特异siRNA转染组与无义siRNA转染组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。三种不同浓度siRNA转染细胞72h后与无义转染组及正常对照组相比,G₀/G₁期细胞比例显著增加,S期细胞比例相对减少,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论特异性siRNA能有效抑制人食管癌EC9706细胞中eIF4E基因的表达,抑制细胞增殖。