不同Stat6表型乳腺癌细胞IL-4/Stat6信号通路调节基因表达的研究

目的:探讨不同乳腺癌细胞株Stat6活化分型的可行性及IL-4的作用机制.方法:流式细胞仪测定不同Stat6表型细胞株ZR-75-1和BT-20的早期凋亡率;应用Affymetrix基因芯片测定IL-4刺激前后的基因表达谱变化.结果:Stat6null表型细胞与Stat6high相比早期凋亡增加(40%vs 12%);在Star6null细胞株有2 193个基因/转录产物表达升高,而Stat6high细胞株中2 600个基因/转录产物表达升高,且Stat6high细胞和Stat6null细胞中与凋亡和转移相关的基因表达谱明显不同;但不论在Stat6high还是Stat6null细胞株,IL-4均上调CCL26、SOCS1、CISH、EGLN3和SIDT1基因,而下调DUSP1、FOS和FOSB基因.结论:在乳腺癌细胞中,IL-4可能像在免疫细胞中一样,通过Stat6或非Stat6途径而发挥功能.     

结直肠癌细胞IL-4／Stat6信号传导活性与调节基因差异性表达相关性研究

目的：IL-4介导的Star6信号传导活性在人细胞之间有差异，称为Stat6活化表型。旨在探讨Stat6活化表型及其产生的分子学基础。方法：结直肠癌细胞株HT-29与Caco-2的Star6活化表型用EMSA半定量法测定。Stat6通路调节因子基因水平的表达用RT-PCR法检测。蛋白水平的表达用Western blotting法检测。结果：EMSA分析表明，HT29为高活化表型（Star6^high）而Caco2为零活化表型（Star6^null）。RT-PCR分析显示，与Star6^high HT-29比较，Star6^null Caco-2癌细胞高表达负调节基因SOCS1和SHP1，而低表达正调节因子PP2A催化亚单位编码基因PP2CA和PP2CB。Westernb lotting分析法证实Caco-2癌细胞高表达SOCS1和SHP1蛋白。结论：Star6通路正、负调节基因的表达失衡可能是产生不同Star6活化表型的分子机制之一。     

MCM2基因和蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨微型染色体维持蛋白2(minichromosome maintenance proteins 2,MCM2)基因和蛋白水平在乳腺癌组织中的表达变化及其临床意义。方法应用RT-PCR技术,半定量检测在54例乳腺癌组织、12例乳腺良性疾病组织和10例正常乳腺组织中MCM2 mRNA的表达水平。应用Western-blotting技术检测MCM2蛋白在上述组织中的表达变化。结果正常乳腺组织、良性和恶性乳腺肿瘤组织中MCM2 mRNA和蛋白表达水平比较存在统计学差异(P<0.05),且随着肿瘤恶性程度的升高呈逐渐增高趋势。MCM2 mRNA和蛋白表达量在不同TNM分期和不同病理类型乳腺癌组织间存在统计学差异(P<0.05),但Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅲ期与Ⅳ期间MCM2表达却无统计学差异(P>0.05)。结论MCM2可以用于判断乳腺癌的恶性程度和病理分级的高低,可能为乳腺癌的未来基因治疗提供一个新的潜在分子靶点和理论依据。     

结直肠癌细胞IL-4/Stat6信号传导活性与调节基因差异性表达相关性研究

目的:IL-4介导的Stat6信号传导活性在人细胞之间有差异,称为Stat6活化表型。旨在探讨Stat6活化表型及其产生的分子学基础。方法:结直肠癌细胞株HT-29与Caco-2的Stat6活化表型用EMSA半定量法测定。Stat6通路调节因子基因水平的表达用RT-PCR法检测。蛋白水平的表达用Western blotting法检测。结果:EMSA分析表明,HT-29为高活化表型(Stat6high)而Caco-2为零活化表型(Stat6null)。RT-PCR分析显示,与Stat6highHT-29比较,Stat6nullCaco-2癌细胞高表达负调节基因SOCS1和SHP1,而低表达正调节因子PP2A催化亚单位编码基因PP2CA和PP2CB。Westernblotting分析法证实Caco-2癌细胞高表达SOCS1和SHP1蛋白。结论:Stat6通路正、负调节基因的表达失衡可能是产生不同Stat6活化表型的分子机制之一。     

肝癌细胞中IL-18表达及其调控机制的研究

目的探讨肝癌细胞调节IL-18生物学功能的主要分子机制。方法体外培养正常人类肝细胞株QSG-7701和原发性肝癌细胞株（MHCC97-L和HCCLM3）,采用RT-PCR法,分别检测这3种细胞株中IL-18及其相关正负调节基因mRNA的表达变化。结果与2种原发性肝癌细胞株比较,正常人类肝细胞株中IL-18及其正调节基因粒细胞蛋白水解酶3（proteinase-3）mRNA表达量较高,但正调节基因caspase-1和负调节基因caspase-3 mRNA表达水平无统计学差异。结论原发性肝癌细胞中IL-18 mRNA表达减弱,可能与proteinase-3表达失衡有关。     

Axl及其配体Gas6在宫颈鳞癌中的表达与意义

目的:探讨Axl及其配体Gas6蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达情况及其与临床特征的关系。方法:收集87例经手术切除的宫颈鳞癌组织、42例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织和28例正常宫颈组织。采用免疫组化SP法分别检测Axl及其配体Gas6蛋白的表达情况,并分析其表达在良恶性组织之间和不同临床病理状态下的差异。结果:Axl及Gas6蛋白在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率较高,而在CIN组及正常宫颈组织中较低,差异有统计学意义(P<0.05)。Axl及Gas6蛋白的表达在不同宫颈鳞癌组织分化程度和盆腔淋巴结转移之间差异有统计学意义(P<0.05)。而在年龄、临床分期和肿瘤大小之间无统计学意义,P值均>0.05。经Spearman等级相关分析发现宫颈鳞癌组织中Axl和Gas6蛋白表达存在正相关(rs=0.74,P=0.03)。结论:Axl及其配体Gas6蛋白的表达水平与宫颈鳞癌发生、增殖、侵袭及盆腔淋巴结转移关系密切。深入机制的研究可能使Axl蛋白成为宫颈鳞癌靶向治疗一个新的潜在的分子靶点。     

MCM2在乳腺癌的表达及其意义

目的:探讨微型染色体维持蛋白(minichromosome maintenance proteins ,MCMs)家族中的MCM2蛋白在乳腺癌中的表达及其意义.方法: 采用免疫组化染色方法,检测10例正常乳腺上皮、15例乳腺良性肿瘤及60例乳腺癌组织中MCM2蛋白的表达,并以标记指数(labelling index,LI)量化其表达.结果: MCM2在乳腺癌中的表达主要在细胞核,间质细胞亦有少量阳性着色.MCM2的LI在乳腺癌患者不同年龄之间无显著性差异(P＞0.05),但在不同TNM分期和不同病理组织学分级(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)及淋巴结转移之间均有显著性差异,且呈逐渐升高趋势.各组中MCM2标记指数均高于ki-67.MCM2和Ki-67在乳腺癌中的表达呈平行关系(P<0.001).结论: MCM2是反映细胞增殖的良好指标,作用优于ki-67,其表达指数与乳腺癌的组织分型、细胞增殖及恶性程度有关.MCM2的表达可以提示乳腺癌的恶性程度高低和良性肿瘤的恶变可能性,有助于临床判断患者的预后以及选择治疗方法.     

槲皮素对IL-1β刺激肺上皮细胞表达ICAM-1的影响

目的:研究槲皮素对重组人白介素-1β(IL-1β)刺激肺上皮细胞株A549细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响,并探讨可能的分子机制。方法:IL-1β处理A549细胞,用不同浓度槲皮素干预;RT-PCR法检测ICAM-1 mRNA的表达;Western blotting检测核转录因子NF-κB及其抑制剂IκB的表达。结果:IL-1β能刺激A549细胞表达ICAM-1,这种现象可以被槲皮素抑制,并有一定浓度依赖关系,IL-1β可增加NF-κB的活化,抑制IκB的表达,而槲皮素作用后,NF-κB活化抑制,IκB表达增加。结论:槲皮素通过调节NF-κB的活化而抑制IL-1β诱导A549细胞表达ICAM-1,提示槲皮素可能通过对炎症因子负性调控而发挥其抗炎作用。     

FAP-1在乳腺癌中的表达及意义

目的:研究Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)在乳腺癌组织中的表达及其与临床分期、病理分级、淋巴结转移和患者年龄的关系。方法:SP法检测正常乳腺组织、乳腺癌及乳腺良性肿瘤组织中FAP-1蛋白的表达水平。结果:FAP-1蛋白在正常乳腺组织中未见表达,在良性肿瘤中的表达率为26%,在交界性肿瘤与恶性肿瘤中的阳性表达率分别为69%和80%;FAP-1蛋白的表达与乳腺癌的临床分期、病理分级和淋巴结转移状况有关,而与年龄无关。结论:FAP-1在乳腺癌组织中广泛表达,可能成为判断乳腺癌恶变程度及预后的重要指标。     

恩度联合化疗对不同Stat6活化表型直结肠癌细胞的作用

目的研究恩度联合化疗对直结肠癌细胞的抑制作用,并进一步观察不同Stat6表型的直结肠癌细胞对恩度联合化疗药物敏感性的差异。方法采用MTT法检测不同浓度的恩度单药或联合5-Fu及奥沙利铂对2种不同Stat6活化表型的直结肠癌细胞(Caco-2和HT-29)的增殖抑制作用。用流式细胞仪检测不同药物处理组对2种直结肠癌细胞早期凋亡率的影响。结果恩度单药作用于Caco-2和HT-29细胞没有显示出明显的增殖抑制和凋亡促进的作用(P>0.05)。而恩度联合1种或2种化疗药物[(5-Fu)和奥沙利铂(OXP)]对这2种癌细胞的生长抑制和凋亡促进的能力明显升高(P<0.05和P<0.01)。恩度联合化疗药物对Caco-2细胞生长抑制率和早期凋亡率均高于HT-29细胞(P<0.05)。结论恩度联合化疗药物能更好的抑制直结肠癌细胞的增殖能力,不同Stat6活化状态可能成为评价化疗疗效的潜在指标之一。