载氧血红蛋白纯化工艺研究

目的改善心脑血管缺氧载氧药物是一种创新药物。由于它半径比红细胞小400~1 000倍,易于通过毛细血管,给缺血组织及时供氧,迅速缓解或纠正缺氧状态,达到治疗抢救目的。血红蛋白的纯化工艺是载氧药物研制的重要工艺步骤。方法本研究建立了一套通过热敏法分离纯化人脐带血血红蛋白的工艺以及较为完善的纯化血红蛋白质量检测指标。结果与现有的纯化方式相比,热敏法操作简便,仪器设备造价低廉,纯化与病毒灭活同时进行,得到的纯化产品损失少,纯度高,各项理化指标达到国际水平。结论本工艺适用于规模制备纯化血红蛋白,为进一步研制治疗心脑血管缺氧载氧药物创造了有利条件。     

体循环模拟装置的研制

为研究左心室辅助装置而研制出一套体循环模拟装置。它是由血泵、体动脉腔、阻力器和体静脉腔组成。以密闭气腔模拟血管顺应性(Ccmpliance),分别以双密闭气腔和单密闭气腔模拟动脉系统和静脉系统。由波纹管、锥形阀和弹簧构成阻力器模拟外周阻力血管作用。本装置具有升支比较陡峭、降支段有明显重搏波基本符合人体主动脉压力波形以及(?)-CC曲线与正常人体动脉流曲线相似的特点。     

阳离子交换色谱柱上聚合血红蛋白研究

采用柱上聚合的方法制备血红蛋白溶液，解决传统血红蛋白聚合过程中由于戊二醛的活性过高导致平均分子量大、产物分子量分布宽的问题。该方法利用阳离子交换剂对修饰度（聚合度）小的血红蛋白吸附能力大的原理，使其在柱上富积，同时加入戊二醛进行聚合反应。结果表明该方法能比较有效地缩小聚合血红蛋白的分子量分布。     

化学修饰血红蛋白替代红细胞载氧的研究

用血代用品替代传统的输血一直是人们努力的方向。化学修饰血红蛋白是红细胞代用品 的热点之一，对血红蛋白化学修饰的目的是适当降低血红蛋白同氧的亲和力，将血红蛋白大分子化，提高纯化后的终产品得率。本文就化学修饰血红蛋白替代红细胞载氧的有关研究情况做了综述。     

北柴胡适生地分析及数值区划研究

采用生物适生地分析系统,对北柴胡的适宜产地进行数值区划,并与资源普查结果相比较,以探索药材产地适宜性区划的现代方法。结果发现以北京延庆为基点,以水热距为距离和分级指标,得出了北柴胡全国的783个适宜产地,主要分布在纬度27．5-54．2°,经度75．17-134．17°之间,其中1级适宜产地的分布范围为纬度35．22-44．47°,经度102．33-124．05°之间,主要在山西、陕西、河北的北部,内蒙的中南部及辽宁的西南部,该结果与我国北柴胡的自然分布产区非常相似。结果表明采用生物适生地分析系统,结合柴胡资源调查资料,可以较好地对北柴胡的适宜产地进行数值分级区划。     

北柴胡适生地分析及数值区划研究

采用生物适生地分析系统,对北柴胡的适宜产地进行数值区划,并与资源普查结果相比较,以探索药材产地适宜性区划的现代方法。结果发现以北京延庆为基点,以水热距为距离和分级指标,得出了北柴胡全国的783个适宜产地,主要分布在纬度27．5-54．2°,经度75．17-134．17°之间,其中1级适宜产地的分布范围为纬度35．22-44．47°,经度102．33-124．05°之间,主要在山西、陕西、河北的北部,内蒙的中南部及辽宁的西南部,该结果与我国北柴胡的自然分布产区非常相似。结果表明采用生物适生地分析系统,结合柴胡资源调查资料,可以较好地对北柴胡的适宜产地进行数值分级区划。     

血红蛋白最佳聚合工艺匹配条件的研究

目的 探讨以戊二醛为交联剂的血红蛋白类氧载体（HBOCs）的聚合工艺匹配条件的优化研究,进一步降低终产品的平均分子质量和超大分子含量,提高聚合血红蛋白的有效转化率.方法 在前期对人胎盘血红蛋白与戊二醛交联的单因素影响水平的研究基础上,选取戊二醛的加样速度、血红蛋白的质量浓度和戊二醛与血红蛋白的摩尔比3个因素做正交试验以优化血红蛋白聚合工艺的匹配条件.结果 戊二醛与血红蛋白的摩尔比对聚合血红蛋白分子质量分布的影响最大,其次是血红蛋白的质量浓度,最后为戊二醛的加样速度.对平均分子质量的影响分析,不同的戊二醛与血红蛋白摩尔比条件下的平均分子质量间的差异均具有统计学意义（P＜0.05）,而不同的血红蛋白质量浓度和戊二醛的加样速度条件下的平均分子质量间的差异均无统计学意义（P＞0.05）;对有效转化率的影响分析,不同的戊二醛与血红蛋白摩尔比和不同的血红蛋白质量浓度条件下的有效转化率间的差异均具有统计学意义（P＜0.05）,不同的戊二醛加样速度条件下的有效转化率间的差异均无统计学意义（P＞0.05）;对超大分子含量的影响分析,不同的戊二醛与血红蛋白摩尔比条件下的超大分子含量间的差异均具有统计学意义（P＜0.05）,不同血红蛋白的质量浓度和戊二醛的加样速度条件下超大分子含量间的差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 通过以上实验分析,优化确定了血红蛋白聚合工艺的最佳匹配条件.     

丹参F3'5'H基因克隆及其序列分析

目的:为了验证丹参类黄酮-3′,5′-羟基化酶(Flavonoid 3′,5′-hydroxylase,F3′5′H)基因与丹参花色表型的相关性,本研究克隆并分析了紫花丹参99-3株系和一些白花丹参中的F3′5′H基因。方法:本研究通过提取紫花丹参和白花丹参中的总RNA,再将其反转录得到cDNA,以此cDNA为模板,利用PCR方法扩增获得F3′5′H基因全长序列。再利用生物信息学分析方法,分析了该基因编码蛋白质的理化性状、结构域、系统进化等特点,并预测了该蛋白质的亚细胞定位、跨膜区等;利用实时定量PCR方法检测了该基因的表达特异性;利用毛状根遗传转化方法获得了该基因的过表达阳性毛状根株系。结果:F3′5′H基因全长1551 bp,编码516个氨基酸,相对分子质量为57.4 kDa。该基因在丹参花中高丰度表达。在42份(紫花25份;白花17份)丹参样品中发现一个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)位点在紫花和白花丹参中呈现与花色相关的稳定变化。系统发育分析表明丹参F3′5′H与美女樱的F3′5′H具有较高序列同源性。获得了过表达F3′5′H的毛状根株系。结论:本研究在丹参中克隆到F3′5′H基因,对其序列进行了分析,为进一步研究丹参F3′5′H基因的功能奠定基础。     

植入性高分子材料的组织病理学观察

绝大多数医用高分子材料化学性能稳定,但由于含有各种添加剂和未聚合单体在与组织长期接触中可能会引起各种反应.因此,自1975年以来,我们先后对医用室温硫化,高温硫化,硅橡胶,天然胶原纤维及止血纤维等材料进行了研究.将这些材料分别植入动物体内,于3、7、15、30、90、180、360、720、1080天处死动物,取出材料及其周围组织作病理学观察.结果表明所有材料植入后7天均有明显的炎症反应,随时间的延长而有所减轻,直到90天,仅材料周围有少许炎性细胞.同时形成较薄的纤维组织囊,但时间延长其囊壁厚度并无明显改变.对于较软的、表面光滑的及体内固化的材料在植入初期反应较轻,而后期确无明显差异.实验结果表明这种组织反应除与手术创伤有关外,且与材料的物理化学性能有关.     

聚合人脐带血红蛋白对复苏失血性休克大鼠肺组织的影响

目的探讨不同浓度聚合人脐带血红蛋白(PolyCHb)复苏对失血性休克大鼠肺组织的影响。方法建立Wistar大鼠失血性休克控压模型:将40只健康雄性Wistar大鼠随机均分为假手术(sham)组、生理盐水(对照)组、2%、4%及6%PolyCHb组(8只/组)。sham组:大鼠麻醉后仅行股动、静脉插管;后4组建立大鼠失血性休克控压模型,分别给予生理盐水、生理盐水加相应浓度的PolyCHb复苏。分别在大鼠放血前(基础值)、休克、液体回输后0 h(复苏后0 h)、6 h(复苏后6 h)观测各组大鼠平均动脉压(MAP)、动脉二氧化碳分压(PaCO_2)、肺氧合指数(PaO_2/FiO_2);复苏后6 h以放血法处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白含量,取肺组织,测定湿/干重比(W/D)值,另取肺组织制备成10%的组织匀浆,测定丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果 1)复苏后0 h,2%、4%、6%PolyCHb组与对照组的MAP(mmHg)为117.25±5.97 vs 132.00±5.98 vs 147.75±5.82 vs 101.13±6.15(P<0.05)。2)复苏后6 h,4%、6%PolyCHb组与对照组相比,MAP(mmHg)分别为114.75±5.26 vs 118.63±13.81 vs 88.38±8.00(P<0.05);2%、4%PolyCHb组和对照组的PaCO_2(mmHg)为37.62±3.62 vs 37.13±4.70 vs 25.38±4.10(P<0.05);2%PolyCHb组和对照组的PaO_2/FiO_2值为463.69±44.74 vs 403.57±59.73,BALF蛋白浓度值(mg/mL)为0.13±0.04 vs 0.23±0.06(P<0.05), MDA(nmol/mg protein)为1.17±0.11 vs 1.47±0.20,MPO(U/g tissue)为0.37±0.08 vs 0.76±0.23(均为P<0.05);2%、4%、6%PolyCHb组和对照组的SOD(U/mg protein)为2.04±0.27 vs 1.87±0.30 vs 1.63±0.10 vs 1.83±0.04(均为P>0.05)。结论具有携氧功能的低浓度PolyCHb可以减轻失血性休克大鼠肺损伤;但随着PolyCHb浓度的升高,大鼠氧化应激增强,反而加重肺损伤。