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目的 构建Twist基因逆转录病毒载体,研究其对人正常乳腺上皮细胞MCF10A的影响.方法 酶切pcDNA3/myc-Twist获得myc-Twist,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,构建重组质粒pB AB E-myc-Twist.通过酶切、测序鉴定Twist基因正确后,在体外将质粒pBABE-myc-Twist和其对照分别与包装质粒pAmpho共同转染人胚肾上皮细胞系293T细胞,进行逆转录病毒的包装,并感染人正常乳腺MCF10A上皮细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选,获得成功转入Twist的MCF10A-Twist细胞和MCF10A-Vector对照细胞.通过RT-PCR和Western blot法验证Twist细胞在MCF10A-Twist和MCF10A-Vector细胞内的表达.免疫荧光技术和Western blot法检测细胞内上皮间质转化(EMT)标志蛋白的表达.Transwell(R)法检测细胞的迁移和侵袭能力.结果 重组逆转录病毒载体质粒pBABE-myc-Twist经酶切和测序鉴定构建正确;Twist基因被逆转录病毒成功导入MCF10A细胞,并在靶细胞内稳定表达,RT-PCR检测到Twist mRNA在MCF10A-Twist细胞中表达,Western blot法检测发现myc-Twist蛋白在MCF10A-Twist细胞中表达;免疫荧光和Western blot法检测显示在MCF10A-Twist细胞中E-cadherin表达显著下调、vimentin表达明显上调;与MCF10A-Vector细胞相比,Transwell(R)法检测发现MCF10A-Twist细胞迁移和侵袭能力明显增加(P<0.01).结论 Twist诱导MCF10A细胞发生EMT转化,并促进其迁移和侵袭. 相似文献
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目的考察香茅醇(citronellol,CT)对人喉癌上皮细胞HEp-2和人乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响,并制备CT自乳化递送系统(self-emulsified drug delivery system,SMs),对HEp-2体外抗肿瘤活性和细胞摄取能力进行评价。方法采用MTT法考察CT对HEp-2和MCF-7细胞增殖能力的影响;通过伪三元相图法优化香茅醇自乳化递送系统(CT-SMs)处方,进行外观形态、粒径和Zeta电位表征。采用MTT法检测CT-SMs对HEp-2细胞增殖能力的影响;荧光倒置显微镜定性和流式细胞仪定量考察HEp-2细胞对CT-SMs的摄取情况。结果经一定质量浓度CT处理后,MCF-7细胞增殖未受影响,差异无统计学意义(与对照组相比,P0.05),而HEp-2细胞的增殖能力受到明显抑制(与对照组相比,P0.05),呈剂量-时间依赖性;CT-SMs最佳处方是K_m(乳化剂与助乳化剂比例)为Kolliphor~?HS15-无水乙醇7∶3,CT-Km为3∶7。制备的微乳平均粒径为(354.0±9.5)nm,外观圆整呈类球形,分布均匀,Zeta电位为(-13.4±0.3)m V。细胞摄取实验结果表明,相同质量浓度的CT-SMs和CT处理HEp-2细胞后,CT-SMs较CT摄取量更多,分别为545.70±11.56、230.00±17.76。结论。采用滴加水法成功制备了CT-SMs,其处方工艺可行,制得的自微乳质量稳定可控。CT-SMs可明显抑制HEp-2细胞的增殖。 相似文献
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目的优化1,8-桉叶油素(1,8-cineole,1,8-Cin)自微乳给药系统(1,8-cineole self-microemulsion drug delivery system,1,8-Cin-SMEDDS)处方,对其进行表征并进行细胞摄取考察。方法通过绘制伪三元相图,确定1,8-Cin-SMEDDS有效自乳化区域,进行初步处方筛选。以粒径和载药量为指标,采用星点设计-效应面法对1,8-Cin-SMEDDS处方进行优化并验证。荧光显微镜观察高糖损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对1,8-Cin-SMEDDS的摄取情况。结果 1,8-Cin-SMEDDS的最佳处方是大豆油(7.5%)与1,8-Cin(22.5%)为混合油相,HS15(56%)为乳化剂,乙醇(14%)为助乳化剂,滴加纯水至8m L得半透明略带蓝色乳光液体。透射电镜观察其外观呈球形液滴,激光粒度Zeta电位测定仪测得平均粒径为(131.68±1.44)nm,Zeta电位为(-10.03±1.63)m V;HPLC法测得包封率为(99.890±0.012)%,载药量为(224.750±0.028)mg/g。HUVEC细胞摄取实验结果表明,细胞对1,8-Cin-SMEDDS的摄取高于游离1,8-Cin。结论 1,8-Cin-SMEDDS制备方法简便,重复性好,所得1,8-Cin-SMEDDS外观良好,包封率高,理化性质稳定,且能促进细胞摄取。 相似文献
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目的基于ISO15189:2012要求,对一种国产HBV-DNA实时荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒的性能参数进行验证,以评价其是否可应用于临床检测。方法依据《医学实验室质量和能力认可准则》相关文件对试剂盒的正确度、精密度、检测下限、线性范围、特异度和抗干扰能力进行性能验证。结果试剂盒正确度符合要求(靶值对数值±0.4)。低值和高值的批内精密度CV为4%、0.65%,标准差(s)为0.19、0.04;低值和高值的中间精密度CV为4.75%、1.33%,s为0.17、0.09。HBV-DNA定量的检测下限定为100IU/mL。线性范围为1.00×102~5.00×108 IU/mL。特异度符合要求。血红蛋白浓度不大于28g/dL、总胆红素浓度不大于30mg/dL、三酰甘油浓度不大于3 200mg/dL,对检测结果没有影响(靶值对数值±0.4)。结论试剂盒的性能参数符合厂家声明,可以应用于临床检测工作。 相似文献
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目的筛选胃癌血浆外泌体中差异表达的miRNA,分析其对胃癌诊断的敏感性与特异性及与胃癌患者的疾病特点之间的相关性。方法收集南京医科大学第一附属医院消化内科病理确诊为胃癌的住院患者与消化内科及体检中心的无癌健康对照人群的血液样本,离心后试剂盒抽提血浆外泌体及其RNA,通过透射电子显微镜观察、蛋白质印迹分析(Western blotting)鉴定标志蛋白及纳米粒径分析(nanoparticle tracking analysis, NTA)对血浆外泌体进行鉴定,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)鉴定与胃癌发病相关的miRNA。结果共纳入胃癌患者80例和健康对照80名。成功对2例血浆外泌体(GC1和NC1)进行鉴定以证实其相关特性。在初始筛选阶段,对12例胃癌和12名健康对照者的血浆外泌体RNA进行qRT-PCR验证并依据其各自的2~(-△Ct)值,分析受试者的诊断ROC曲线下面积(AUC)。与健康对照者相比,胃癌的血浆外泌体miR-452-5p表达量显著升高(P=0.002),miR-452-5p的AUC值为0.798(95%CI:0.552~0.883)。而后纳入新的68对样本对筛选结果进一步验证,miR-452-5p的表达趋势与初始筛选一致,且诊断AUC值为0.733(95%CI:0.647~0.818)。分析已验证的miR-452-5p表达水平与胃癌病理特征无相关性(P0.05)。结论血浆外泌miR-452-5p可能为检测胃癌的新型潜在生物标志物,然而其对疾病的病理特性的影响仍需更大样本量的实验进一步研究。 相似文献
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目的:比较五加补骨方及阿仑膦酸钠对3周尾吊模拟失重大鼠前后肢骨胳及肌肉丢失的干预作用.方法:自2009年3月至5月,6周龄雄性Wistar大鼠40只,按体重用随机区组法分为:五加补骨方组(HUC)、阿仑膦酸钠组(HUA)、空白组(CON)、模型组(HU),每组10只.动物实验周期为4周,HUC组全程给予五加补骨方(含刺五加、熟地黄、怀牛膝、牡蛎等)水煎剂,按体重10 ml/kg剂量每日灌胃1次,药液浓度0.704 g/ml;HUA组全程给定量阿仑膦酸钠片溶解混悬剂灌胃,按体重10 ml/kg剂量每周灌胃1次,药液浓度0.9 mg/ml;CON组和HU组均以上述方法全程给予蒸馏水.自第2周始,HU、HUC、HUA组均以尾部悬吊模拟失重3周.第4周末处死大鼠,分别测量血清钙、磷含量及碱性磷酸酶活性(ALP),肱骨和股骨骨密度(BMD)、肱骨和胫骨生物力学性能(biomechanical property)以及肱二头肌和腓肠肌重量指数.结果:与CON组比较,HU组血清Ca显著升高(P<0.05),后肢BMD、力学性能及肌肉指数均显著降低(P<0.01);与CON组比较,HUA组血清Ca显著升高(P<0.05).HUC组血清ALP显著高于其他3组(P<0.01).与HU组比较,HUC组及HUA组股骨BMD均显著升高,胫骨最大载荷、最大桡度及弹性载荷均有升高趋势;与HU组相比,HUC组及HUA组腓肠肌萎缩分别缓解12.5%和50%(P>0.05),肱骨BMD均无显著变化,而HUA组肱骨最大桡度(P<0.01)及弹性桡度(P<0.05)均较HU组有显著降低.结论:中药复方和阿仑膦酸钠均可有效抑制模拟失重造成的后肢骨及肌肉丢失,改善其力学结构.中药复方在缓解上肢力学性能改变方面表现出一定优势.在治疗航天失重骨丢失类疾病上,五加补骨方与阿仑膦酸钠效果相当. 相似文献
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目的 探讨早期呼吸功能训练对肺癌根治术术后患者肺功能及生活质量的影响.方法 按随机数字表法将110例肺癌根治术术后患者分为观察组和对照组,各55例,对照组患者术后给予常规护理干预,观察组患者在此基础上给予呼吸功能锻炼.干预前和干预3个月后,比较两组患者的肺功能指标[第一秒用力呼吸容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC]、血气分析指标(血氧饱和度、血氧分压)、生活质量;干预后,比较两组患者的并发症发生情况.结果 干预后,两组患者FEV1水平、FVC水平、FEV1/FVC、血氧饱和度和血氧分压均高于本组干预前(P﹤0.05),且观察组患者FEV1水平、FVC水平、FEV1/FVC、血氧饱和度和血氧分压均高于对照组(P﹤0.05).干预后,两组患者简明健康状况调查问卷(SF-36)各维度评分和总分均高于本组干预前(P﹤0.05),且观察组患者SF-36量表各维度评分和总分均高于对照组(P﹤0.05).干预后3个月,观察组患者的并发症总发生率为9.09%,低于对照组的23.64%(P﹤0.05).结论 早期呼吸功能训练可明显改善肺癌根治术术后患者的肺功能及生活质量,降低并发症发生率. 相似文献
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目的:探讨俯卧位定点压迫止血法在经皮肾穿刺活检术中的有效性。方法将352例经皮肾穿刺活检术患者随机分为试验组与对照组,在传统护理基础上试验组175例患者术后采用俯卧位定点压迫止血法,对照组177例患者采用腹带包扎止血法,比较两组患者术后并发症发生率。结果试验组急性尿潴留和腰痛发生率低于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05),但两组患者的胃肠痉挛、肉眼血尿、肾周血肿和低血压比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论俯卧位定点压迫止血法在经皮肾穿刺活检术中可减少急性尿潴留和腰痛的发生率,减轻患者痛苦,值得临床推广。 相似文献