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目的：研究Twist对肝癌细胞迁移能力的影响。方法：RT-PCR 方法检测Hep-11和Hep-12中Twist的表达情况。将Twist-cDNA转染Hep-11筛选得到稳定高表达Twist的细胞克隆Twist-Hep- 11。构建pSuper-Twist-shRNA 干扰载体,瞬时转染Hep-12细胞。用Boyden 小室检测过表达和抑制Twist基因后对细胞迁移和侵袭能力的影响。RT-PCR 和Western blot检测Hep-11上调Twist后的EMT 标志分子的表达。结果：与Hep-11相比,Hep-12的Twist基因表达显著上调,Hep-12的迁移能力也强于Hep-11。Hep-11细胞过表达Twist后,其迁移能力明显增强;而干扰Hep-12细胞Twist表达后,其迁移能力亦明显下降。Hep-11过表达Twist后,N-cad、Vimentin 表达明显上调,E-cad 变化不明显。结论：Twist可以促进肝癌细胞的迁移,其机制可能与N-cad、Vimentin 表达上调有关。 相似文献
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目的 构建人非常规肌球蛋白myosin Va基因RNAi慢病毒载体,并探讨其对人肺巨细胞癌PG细胞运动和迁移能力的影响。 方法 针对已经筛选确定的myosin Va基因RNAi有效靶序列,合成靶序列及其阴性对照的寡聚DNA,并连接到pSuper载体获得中间实验质粒pSuper-shM5A及阴性对照pSuper-shCON;然后将H1 promoter-shM5A/shCON表达框重组到慢病毒载体plenti4上,分别得到plenti4-H1-shM5A和shCON 载体,并进行慢病毒包装。随后用病毒上清感染PG细胞,并筛选出zeocin抗性的稳定细胞系PG-shM5A和shCON。通过RT-PCR方法检测PG-shM5A和shCON细胞的myosin Va mRNA表达水平;用创伤愈合和Boyden小室实验测定PG-shM5A和shCON细胞的运动和迁移能力。 结果 限制性内切酶酶切和测序证实,成功构建myosin Va RNAi慢病毒载体plenti4-H1-shM5A。慢病毒包装成功后,感染PG细胞并获得zeocin抗性的细胞;用RT-PCR方法证明,myosin Va mRNA被抑制70%以上。创伤愈合和Boyden小室实验表明,感染携带myosin Va RNAi慢病毒的PG细胞运动和迁移能力显著下调。 结论 成功构建myosin Va RNAi慢病毒载体plenti4-H1-shM5A,它能有效抑制人肺巨细胞癌PG细胞的myosin Va表达并降低其运动和迁移能力,初步揭示了myosin Va与肿瘤细胞恶性行为的相关性。 相似文献
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