荧光磁性纳米粒子与PSA单链抗体复合探针对前列腺癌的靶向显像和治疗

摘 要 目的: 研究荧光磁性纳米粒子与前列腺癌特异性抗原(prostate cancer specific antigen,PSA)单链抗体片段结合的复合纳米探针作为前列腺癌核磁共振靶向显像剂与治疗剂的可行性。方法：荧光磁性纳米粒子（FMCNPs）与前列腺癌特异性单链抗体片段(ScFv)桥联制备成复合纳米探针（FMCNPsScFv），应用高分辨电镜、荧光光谱仪与磁强度计进行鉴定。将FMCNPsScFv与前列腺癌LNCaP细胞共培养，观察其进入癌细胞的靶向性；采用MTT法评价复合纳米探针的细胞毒性。建立裸鼠前列腺癌细胞移植模型，进行免疫组化和病理学鉴定；荷前列腺癌裸鼠尾静脉注射复合纳米探针，采用荧光成像系统观察纳米探针在裸鼠体内的分布消除过程；利用核磁共振观察复合纳米探针肿瘤靶向显像效果；给予体外磁场照射(100 W功率)30 min,观察肿瘤体积的变化。结果：成功制备复合纳米探针FMCNPsScFv；细胞培养实验显示复合纳米探针能够进入前列腺癌细胞质；在显像浓度范围内复合纳米探针细胞毒性很低，不影响细胞增殖。成功制备裸鼠前列腺癌模型。荧光成像系统显示复合纳米探针快速地在裸鼠各重要器官分布，并逐渐集中于肿瘤部位；核磁共振显示纳米探针在24 h内能够清晰显示前列腺癌图像；体外磁场照射4 d后，注射复合纳米探针的裸鼠肿瘤组织生长显著慢于对照裸鼠的肿瘤组织（P<0.05）。结论：制备的复合纳米探针FMCNPsScFv能有效地靶向前列腺癌组织，可用于前列腺癌的核磁共振成像，也能用于体外磁场作用下的肿瘤治疗。     

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤1例

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(T-AILT)是较罕见的外周T细胞肿瘤,占非霍奇金淋巴瘤(NHL)1％～2％,占外周T细胞淋巴瘤15％～20％[1].AILT具有特殊的临床表现、形态学特征和免疫表型,过去认为是一种非恶性免疫性疾病,称为血管免疫母细胞性淋巴结病(AILD).近年来研究证实,AILT是一种独立的侵袭性外周T细胞肿瘤.故WHO(2001)淋巴造血组织肿瘤分类中已将AILD归为AILT.本文分析我院收治的1例AILT,探讨该病的临床病理特征、诊断及治疗.     

沉默BRCAA1基因对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及其可能的机制

目的：研究沉默乳腺癌相关抗原1（breast cancer—associated antigen1，BRCAA1）基因对胃癌细胞株MGC-803的抑制作用及其可能的机制。方法：构建BRCAA1基因shRNA载体，将构建的shRNA—BRCAAI质粒与阴性对照质粒shRNA—N转染胃癌MGC-803细胞，24h后用荧光显微镜观察转染效率，实时定量PCR检测BRCAA1和GAPDH基因mRNA表达水平。MTT法检测转染后24、48与72h的细胞增殖水平，Annxin—VPE／7AAD检测转染24h后的细胞凋亡水平，Westernblotting检测转染48h后细胞的凋亡相关蛋白表达水平。结果：BRCAA1siRNA表达质粒转染MGC-803细胞24h的转染效率为（81．2&#177;2．6）％。转染后48hMGC．803细胞的BRCAA1mRNA水平下降了61．4％，MGC-803细胞增殖的抑制率达45．0％，转染siRNA细胞的凋亡率明显高于未转染细胞和对照质粒转染细胞[（14．4&#177;1．6）％vs（5．4&#177;2．0）％，（4．4&#177;2．5）％，P〈0．05]。转染siRNA细胞的凋亡相关蛋白Rb与Bax的表达量显著增加（P〈0．05），Bcl-2的表达量显著减少（P〈0．05）。结论：BRCAAI基因的沉默可有效抑制人胃癌MGC．803细胞的增殖和诱导细胞凋亡，其机制与其促进Rb和Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达有关，     

基因对胃癌MGC 803细胞的抑制作用及其可能的机制

目的:研究沉默乳腺癌相关抗原1（breast cancerassociated antigen 1,BRCAA1)基因对胃癌细胞株MGC803的抑制作用及其可能的机制。方法：构建BRCAA1基因shRNA载体，将构建的shRNABRCAA1质粒与阴性对照质粒shRNAN转染胃癌MGC803细胞，24 h后用荧光显微镜观察转染效率，实时定量PCR检测 BRCAA1和GAPDH基因mRNA表达水平。MTT法检测转染后24、48与72 h的细胞增殖水平，AnnxinV PE/7AAD检测转染24 h后的细胞凋亡水平，Western blotting检测转染48 h后细胞的凋亡相关蛋白表达水平。结果：BRCAA1 siRNA表达质粒转染MGC803细胞24 h 的转染效率为（81.2±2.6）％ 。转染后48 h MGC803细胞的BRCAA1 mRNA水平下降了61.4％，MGC803细胞增殖的抑制率达45.0%，转染siRNA细胞的凋亡率明显高于未转染细胞和对照质粒转染细胞\[（14.4±１.6）% vs（5.4±2.0）％，（4.4±2.5）％，P<0.05\]。转染siRNA细胞的凋亡相关蛋白Rb与Bax的表达量显著增加（P<0.05），Bcl2的表达量显著减少（P<0.05）。结论：BRCAA1基因的沉默可有效抑制人胃癌MGC803细胞的增殖和诱导细胞凋亡，其机制与其促进Rb和Bax蛋白表达、抑制Bcl2蛋白表达有关。     

FGFR3真核表达载体的构建及其在人白血病细胞系K562中的表达

目的：构建成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）真核表达载体MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN,并检测FGFR3蛋白在人白血病细胞系K562中的表达。方法:通过PCR法获得FGFR3全长基因（fgfr3-WT）和截短失活型的FGFR3（fgfr3-DN）,经双酶切后与真核表达载体MSCV/puro连接,构建MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN重组表达质粒。经PCR、双酶切及测序鉴定正确后,脂质体介导转染至人白血病细胞系K562中,经puromycin抗性筛选后,Western blotting法和流式细胞术检测细胞中FGFR3蛋白的表达。结果：PCR法鉴定MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN重组质粒,2个质粒分别扩增出2　400 bp的fgfr3-WT全长基因片段和1　200 bp的fgfr3-DN截短型片段,表明成功扩增fgfr3-WT全长基因和1　200 bp的fgfr3-DN基因;双酶切MS
CV/puro-fgfr3-WT重组质粒,获得2　400 bp的目的基因片段;测序显示,fgfr3-WT片段大小为2　400 bp,Blast对比分析表明测序结果与GenBank中的FGFR3序列完全一致。fgfr3-DN片段大小与预先设计的序列完全一致,表明成功构建野生型FGFR3和突变失活型FGFR3真核表达载体;Western blotting 检测,与对照组（K562-MSCV）比较,MSCV/puro-fgfr3-WT转染组（K562-WT）FGFR3蛋白表达水平增加,表达水平是对照组的10倍以上;MSCV/puro-fgfr3-DN转染组（K562-DN）的截短型的FGFR3（K562-DN）高表达,而对照组和K562-WT转染组则无此片段;流式细胞术检测,K562-WT组有57.5%的细胞高表达FGFR3,K562-DN组有41.5%的细胞高表达FGFR3-DN。结论：成功构建高表达野生型和突变型FGFR3的人白血病细胞系K562。     

乳腺外科本科生教学课件中高清组图、动态图片和三维动画的应用

乳腺外科教学本身存在课时较少、内容较多、教学形式相对固定等特点,使传统的乳腺外科教学模式比较枯燥单一。如何通过利用网络、多媒体等技术改良教学模式,提高教学效果是目前乳腺外科教学的重点。我们在乳腺外科本科生教学中,利用多种新的多媒体技术在教学课件中融入了高清组图、动态图片及三维(3-dimension,3D)动画等多媒体元素,从而制作了一套全新的规范化、形象化的多媒体课件。     

乳腺浸润性微乳头状癌的研究进展

乳腺浸润性微乳头状癌（IMPC）是乳腺癌的一种少见类型,癌细胞以“极性倒置”的方式排列并伴有显著的微乳头形态和生长方式。IMPC发病率低,易发生淋巴结侵袭和转移,临床预后差。IMPC多与浸润性导管癌混合存在,二者在临床征象、体格检查等方面存在诸多共性,但IMPC具有独特的形态学特征,病理学分级较高,更易发生侵袭及转移,病理检查的恶性程度亦较高。IMPC的细胞膜上皮抗原染色表现为癌细胞团外周及基质中间腔缘特异性着色,E钙粘素在癌细胞团内的连接处呈强表达,同时多项病理学特征均与其生物学特性密切相关。本文旨在对IMPC近年来的研究进展进行综述。     

NAD的耗尽与补充对髓核细胞的退行性变的影响

目的 明确调节细胞内NAD水平对体外髓核细胞退行性变指标的影响.方法 分组利用FK866及NMN处理大鼠尾椎椎间盘髓核细胞.CCK-8法检测髓核细胞的增殖的影响.WST-8法检测NAD含量;RT-PCR测定退变相关指标的表达水平.结果 FK866处理下的髓核细胞NAD含量减少,退行性变水平增加(P<0.05);NMN处...     

HIV-1 env蛋白的制备活性鉴定与快速检测方法的建立

目的 制备具有生物活性的HIV-1 env蛋白,利用量子点的特殊光学性能结合免疫分析技术,建立快速、简便的免疫凝集分析检测HIV-1 gp41抗体方法.方法 以HIV-1 env基因质粒为模板,采用体外快速翻译系统(RTS)线性模板试剂盒制备线性模板,用RTS100试剂盒合成env蛋白,用磁珠法纯化蛋白,用Western Blot方法鉴定蛋白活性.纯化后的HIV-1 env蛋白采用量子点标记,与样品液中的抗HIV-1 gp41抗体进行免疫反应,根据量子点的荧光信号的变化,定量检测样品液中抗gp41抗体的浓度.结果 体外快速翻译系统表达出相对分子量约为97KD的env蛋白;Westem blotting证实纯化后的蛋白具有生物活性,量子点标记的env蛋白与山羊抗HIV-1 gp41抗体发生了免疫凝集反应.使量子点发生荧光淬灭,荧光信号强度与抗体浓度呈负相关.结论 HIV-1 env蛋白可采用RTS系统进行大量表达,分离纯化后的env蛋白具有生物学活性,建立的量子点标记的免疫凝集反应方法检测HIV gp41结果准确,方法简便.