人白细胞介素2-Linker-PE38重组毒素的构建

目的　构建人白介素 2 linker PE38融合基因 ,为进一步表达具有特异性杀伤作用的融合蛋白奠定基础。方法　用PCR方法扩增绿脓杆菌外毒素 (PEA)衍生物PE38基因及柔性连接肽linker片段 ,并与人白介素 2 (Interleukin2 ,IL2 )基因连接插入质粒pET2 8a中。结果　构建的表达载体经核苷酸测序分析无突变发生。结论　成功地构建了表达质粒pIL2 linker Pe38。     

EGF-Ang融合蛋白的构建、表达及活性研究

目的：构建由人表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）和人血管生成素（angiogenin, Ang）组成的人源化的融合蛋白，并检测其对肿瘤细胞的靶向杀伤能力。方法：利用基因工程技术将EGF和Ang基因连接起来，克隆到高效表达载体pET28a(+)中，构建重组表达质粒pEGFAng，并在大肠杆菌中表达该融合蛋白（EGFAng）。经DEAESepharose FF阴离子交换柱层析纯化后，用MTT法检测复性蛋白的细胞毒性。结果：SDSPAGE和薄层扫描分析表明外源蛋白的表达量占菌体裂解蛋白总量的18.6%。细胞活性检测表明EGFAng重组蛋白能明显地抑制Hep2细胞的生长，而不影响MA104细胞的正常生长。结论：融合蛋白EGFAng在体外对过度表达EGFR的Hep2细胞具有明显的杀伤作用。