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人自然杀伤细胞抑制性受体P58.2基因克隆与鉴定 总被引:2,自引:2,他引:0
目的:P58.2基因克隆与鉴定。方法:采用RT—PCR技术,从正常人外周血单个核细胞中扩增自然杀伤细胞抑制性受体P58.2基因全长cDNA,经酶切后构建重组克隆载体,双酶切和测序鉴定。结果:RT—PCR获得了预期的扩增产物P58.2全长cDNA,成功构建了pSPORT1-P58.2重组克隆载体,酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与GenBank登记的人P58.2cDNA全长碱基序列一致。结论:pSPORT1-P58.2重组克隆载体构建成功;P58.2基因序列与文献报道一致,为下一步构建表达载体和基因转染等工作打下良好的基础。 相似文献
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Tju103和CTLA4-Ig诱导MHC半相合小鼠骨髓移植耐受比较 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:观察Tju103和CTLA4—Ig各自对MHC半相合小鼠骨髓移植免疫耐受的诱导。方法:半相合供鼠T细胞与受鼠抗原、Tju103(或CTLA4—Ig)共育后与骨髓细胞混合移植,观测移植后受情况。结果:A.单纯照射组:全部小鼠于照射后11d内死于造血衰竭;B.白血病CTX治疗组:全部小鼠于接种白血病细胞后16—23d死于白血病;C.单纯移植组:全部小鼠于移植后21d内死于移植物抗宿主病(GVHD);D.CsA预防组:5只小鼠于移植后8—22d死亡,1只死于白血病,各有2只死于GVHD和感染,5只活过30d;E.Tju103处理组:4只小鼠于移植后9~26d死亡,2只死于GVHD,各有1只死于白血病和感染,6只活过30d;F.CTLA4—Ig处理组:2只小鼠于移植后17—26d死亡GVHD,8只活过30d。结论:Tju103和CTLA4—Ig均明显延长生存期,降低GVHD发生和严重程度,CTLA4—Ig保留有抗感染和移植抗白血病(GVL)作用,而Tju103没有。 相似文献
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人p58.2重组逆转录病毒载体的构建及稳定包装细胞系的鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建并鉴定携带人p5 8 2基因的重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系。方法 用PCR技术从pSPORT1-p5 8 2扩增出编码p5 8 2N端 1~ 3 45个氨基酸的全长基因 ,定向克隆入逆转录病毒载体pMSCVneo中 ,酶切鉴定 ;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定产病毒的细胞株。结果 双酶切鉴定 ,成功构建重组逆转录病毒载体 ;重组逆录病毒载体转入包装细胞 ,经G418筛选 ,形成了抗性克隆 ,并测得病毒滴度为 3×10 5cfu/ml,提示构建携带人p5 8 2基因的逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论 构建人p5 8 2基因的逆转录病毒载体可行 ,并且可望成为一种很好的对血液系统疾病进行基因治疗的方法 相似文献
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目的 构建并稳定携带人p5 8.2基因的重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系。方法 用PCR技术从pSPORT1 -p5 8.2扩增出编码p5 8.2N端 1~ 345个氨基酸的全长基因 ,定向克隆入逆转录病毒载体pMSCV neo中 ,酶切鉴定 ;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT6 7,G4 1 8筛选建立稳定产病毒的细胞株。结果 双酶切鉴定 ,成功构建重组逆转录病毒载体 ;重线逆录病毒载体转入包装细胞 ,经G4 1 8筛选 ,形成了抗性克隆 ,并测得病毒滴度为 3× 1 0 5cfu/ml,提示构建携带人p5 8.2基因的逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论 构建人p5 8.2基因的逆转录病毒载体可行 ,并且可望成为一种很好的对血液系统疾病进行基因治疗的方法 相似文献
5.
目的:克隆有特异调控活性的人CD34基因5’端转录调控序列。方法:根据已知的CD34抗原基因5’-端启动子调控序列,自行设计2对引物,用巢式-PCR方法从染色体DNA中成功的克隆661bp长度的CD34抗原转录调控序列(CD34TRS,CD34TRS片段插入启动子报告质粒pEGFP-1,观察重组质粒pCD34EGFP在造血系细胞和非造血系细胞中的调控表达作用。结果:经限制性内切酶酶切鉴定及DNA序列分析证实,克隆的CD34启动子序列与文献报道的顺序基本一致,能特异调探EGFP基因在造血细胞系细胞K562中表达。结论:所克隆的人CD34分化抗原转录调控序列有特异调控真核基因表达作用,本研究为构建造血干细胞特异性表达载体奠定了基础。 相似文献
6.
李江琪 《国外医学:输血及血液学分册》1999,22(5):297-300
造血干细胞是理想的血液疾患基因治疗靶细胞,具有整合功能的逆转录病毒是应用最广泛的基因转载体。从莫洛尼小鼠白病毒衍生的逆转录病毒载体(MLV)对人造血干细胞转染效率低、不能长期稳定表达,已成为开展造血干细胞基因治疗的障碍。本文就提高基因转移效率、改进MLV载体特性和研究新的逆转录病毒载体等几方面的进展作一综述。 相似文献
7.
异基因MHC Ⅰ修饰对骨髓细胞的免疫学特性的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:观察异基因MHC Ⅰ修饰对骨镑细胞的免疫学特性的影响,探讨MHC Ⅰ类分子在诱导免疫耐受中的作用机制。方法:由逆转录病毒载体pMSCV介导,将BALB/C小鼠的MHC Ⅰ类分子H—2D^d基因导入C57BL/6小鼠的骨骼细胞,流式细胞仪检测转染后基因的表达。MTT法检测混合淋巴细胞反应,乳酸脱氢酶释放法测定BALB/C小鼠NK细胞对H-2D^d修饰后C57BL/6小鼠骨髓细胞的杀伤活性。结果:重组逆转录病毒感染的C57BL/6小鼠骨髓细胞对BALB/C小鼠脾细胞的刺激强度或应答程度,与未转染和空载体病毒感染的C57BL/6小鼠骨髓细胞相比都显著减弱。BALB/C小鼠NK细胞对转染H-2D^d基因后的C57BL/6小鼠骨髓细胞的杀伤显著降低。结论:在骨髓移植中用受者MHC Ⅰ分子修饰供者骨髓细胞可能诱导免疫耐受。 相似文献
8.
李江琪 《国际输血及血液学杂志》1999,(5)
造血干细胞是理想的血液疾患基因治疗靶细胞,具有整合功能的逆转录病毒是应用最广泛的基因转移载体。从莫洛尼小鼠白血病病毒衍生的逆转录病毒载体(MLV)对人造血干细胞转染效率低、不能长期稳定表达,已成为开展造血干细胞基因治疗的障碍。本文就提高基因转移效率、改进MLV载体特性和研究新的逆转录病毒载体等几方面的进展作一综述。 相似文献
9.
人间充质干细胞对裸鼠体内造血重建影响的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
间充质干细胞 (MSC)是骨髓中除造血干细胞和内皮祖细胞以外的另一种成体干细胞 ,有广泛的分化潜能 ,近年来其体内造血支持作用日益受到重视 ,我们对此进行了研究。材料和方法1 主要材料与仪器 骨髓取自胸科切除的非血液病患者肋骨。低糖DMEM干粉培养基为Gibco公司产品 ,胎牛血清为杭州四季青公司产品 ,BALB/c裸鼠购自广州南方医科大学动物中心 ,6~ 8周龄 ,雌雄不限 ,体重 18~ 2 3g,无病原菌条件下饲养。脐血取自广州南方医科大学附属珠江医院妇产科足月产妇 ,产前检测排除HIV、肝炎病毒等感染。CFU Mix甲基纤维素集落培养基Meth… 相似文献
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