褪黑素通过激活自噬抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长和转移

目的 探讨褪黑素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和转移的作用及其机制。方法 将MDA-MB-231细胞设置对照组以及1、3、5 mmol/L褪黑素处理组,Western blot检测自噬对细胞生长、转移的影响时,添加3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、3-MA联合褪黑素组。使用不同浓度褪黑素处理MDA-MB-231乳腺癌细胞24、48 h,并加入0.1%无水乙醇的细胞作为对照,CCK-8法检测细胞增殖活性确定最佳处理浓度和时间,筛选出3 mmol/L褪黑素用于后续实验。集落形成实验及划痕实验检测不同浓度褪黑素对乳腺癌细胞集落形成能力和迁移能力的影响;流式细胞术、免疫荧光检测3 mmol/L褪黑素对MDA-MB-231细胞凋亡率和自噬蛋白阳性着色情况;Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl2、Bax,上皮-间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、Snai1的水平。结果 CCK-8结果显示,与对照组相比,褪黑素呈浓度及时间依赖性抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.05）;集落形成实验显示,3个浓度褪黑素处理组的集落数低于对照组;褪黑素作用24 h后明显抑制乳腺癌细胞划痕愈合速度（P<0.01）,并诱导细胞凋亡率增加（P<0.01）;且与对照组相比,褪黑素组的促凋亡蛋白Bax表达增加（P<0.05）,抗凋亡蛋白Bcl2表达下调（P<0.05）,Bcl2/Bax的比值逐渐减低（P<0.01）;转录因子Snail减少,上皮细胞标志蛋白E-cadherin增加;单独使用褪黑素能够诱导细胞内自噬标记蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1表达增加,P62表达减少（P<0.05）以及Beclin1蛋白阳性着色增强,P62蛋白阳性着色减弱;3-MA+褪黑素组中自噬相关蛋白Beclin1（P<0.001）、LC3-ΙΙ/LC3-（Ι P<0.05）以及凋亡蛋白Bax（P<0.01）、上皮细胞标志蛋白E-cadherin（P<0.001）明显低于褪黑素组,抗凋亡蛋白Bcl2（P<0.05）、转录因子Snail以及Bcl2/Bax的比值（P<0.01）高于褪黑素组。 结论 褪黑素可通过诱导MDA-MB-231乳腺癌细胞发生自噬,抑制乳腺癌细胞增殖、转移并促进其凋亡,而减少自噬,可减弱褪黑素对乳腺癌细胞生长和转移的抑制作用。     

新型冠状病毒肺炎疫情背景下任务驱动小规模限制性在线课程教学模式在康复治疗学专业实践技能培养中的应用

<正>康复治疗学专业实践技能的培养和提升,不仅对康复治疗的结局至关重要,同时也影响着人才培养质量[1]。作为一门集理论性、实践性和社会性于一体的学科[2],康复治疗学专业要求学生既要充分理解专业理论知识,又要强化动手操作能力[3]。由于学制较短,同时要兼顾枯燥的理论知识及复杂的操作技能等,学生容易存在学习倦怠、消极、依赖心理[4—5],导致学习积极性和效果欠佳。因此,如何提升学生康复评定与训练的技能掌握程度,     

沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖及凋亡的影响

背景：研究报道敲低MKRN1可以抑制肿瘤细胞的生长,但MKRN1是否作为肿瘤相关蛋白在机体发挥作用还需进一步研究。由于siRNA介导的基因沉默是瞬时表达,持续时间短且常规慢病毒技术存在脱靶效应,利用四环素调控(Tet-on)慢病毒系统构建稳定沉默MKRN1基因的细胞系有着可逆的优势,且可规避上述缺点,对于深入研究MKRN1的生物学功能有重要的意义。目的：构建Tet-on慢病毒系统介导的MKRN1基因沉默载体,研究沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖、凋亡的影响。方法：采用RNAi技术,针对MKRN1基因设计3条shRNA(命名为sh1,sh2,sh3),将3条shRNA序列连入四环素诱导表达载体pTripz中验证连入序列;通过三质粒系统转染HEK-293T细胞,并用含有1 mg/L强力霉素的完全培养基培养,进行慢病毒包装,收取48 h及72 h病毒液,将其浓缩后感染HEK-293T细胞,感染48 h后用荧光显微镜观察病毒感染效率。通过实时荧光定量PCR、Western blot检测MKRN1的敲减效率;Western blot检测四环素诱导表达系统是否构建成功;通过...     

基于神经-血管单元空间构筑探讨针刺治疗缺血性脑卒中的研究进展CSCD

目的:基于脑缺血后神经-血管单元(NVU)空间构筑变化探讨针刺治疗缺血性脑卒中(IS)作用机制的研究进展。方法:通过查阅国内外文献资料,总结归纳神经科学领域中对NVU的研究成果,以及针刺治疗IS的研究现状,主要从NVU的结构功能和在IS中的空间构筑变化,以神经元为单维靶点,以神经元、脑微血管内皮细胞(BMEC)为二维靶点,以及以神经元、BMEC、胶质细胞为多维靶点的针刺研究等方面进行阐述。结果:以往关于针刺治疗IS的研究,大多仅停留在对神经元或血管新生调控的单一层面,较少涉及对NVU的整体及各组分间相互作用的研究,同时无论是基础研究还是临床研究,均缺乏以NVU空间构筑为切入点的系统治疗方案。针刺治疗IS具备多组分、多靶点、多环节作用的优势和特点,此与中医辨证论治、整体观念相吻合,一直是中医学和神经科学等领域的研究热点。针刺可抑制神经元凋亡,调节突触可塑性,重组、补偿大脑功能网络;针刺可诱导新生血管形成,调控脑部血流量,协同神经和血管间的耦合;针刺能调控星形胶质细胞能量代谢,抑制兴奋性毒性和炎症反应,基于双向调节效应,统筹、协调神经元、BMEC、胶质细胞间的相互作用。在诸多靶点中选择针对性干预措施,可为阐明针刺减轻脑缺血损伤的可能物质基础与有效作用靶点提供方向。结论:针刺治疗脑缺血作用机制与NVU关系密切,可通过双向调控NVU空间构筑变化,发挥协同神经保护作用,是促进脑缺血后功能恢复的关键。     

伊马替尼联合干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病临床观察

目的探讨甲磺酸伊马替尼(IM)联合亲缘异基因造血干细胞移植治疗进展期慢性粒细胞性白血病(CML)的临床疗效。方法回顾性分析2011年1月至2012年10月采用亲缘异基因造血干细胞移植联合甲磺酸伊马替尼治疗的进展期CML 8例的疗效。结果 8例患者移植后均获得造血重建,移植后中性粒细胞和血小板植活的中位时间分别为16d和18.5d;发生Ⅰ度急性移植物抗宿主病(aGVHD)1例,Ⅱ度aGVHD 5例,局限型慢性移植物抗宿主病(cGVHD)7例,广泛型cGVHD 2例;无白血病存活率为75.0%,移植相关死亡率为12.5%。总体存活率为87.5%,平均无病生存8月(7~17个月),BCR/ABL转阴时间1~5个月。结论亲缘异基因造血干细胞造移植前、后联合格列卫治疗进展期CML,具有降低移植前白血病细胞负荷,争取移植机会,促进供者完全嵌合状态的转变,延长患者生存,是一种安全有效的治疗方法。     

系统免疫指数、中性粒细胞淋巴细胞比值对川崎病静脉注射免疫球蛋白敏感性的预测价值

目的:探讨系统性免疫指数(SII)、中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)、血小板淋巴细胞比值(PLR)对川崎病(KD)患儿静脉注射免疫球蛋白(IVIg)敏感性的预测价值。方法:回顾性分析2019年9月至2021年7月郑州大学第一附属医院收治的115例首诊KD患儿的完整临床资料,根据静脉注射免疫球蛋白敏感性分为IVIg敏感组和IVIg不敏感组,收集KD患儿静脉注射免疫球蛋白前发热天数、白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、血小板计数、血沉(ESR)、C-反应蛋白,并计算中性粒细胞计数×(血小板计数/淋巴细胞计数)(SII)、中性粒细胞淋巴细胞比值、血小板淋巴细胞比值。结果:与IVIg敏感组相比,IVIg不敏感组NLR、C-反应蛋白水平较高,IVIg不敏感组PLT值、淋巴细胞计数、发热天数水平较低,差异均有统计学意义(P<0.05),IVIg不敏感组PLR、SII值较IVIg敏感组低,但差异无统计学意义(P>0.05)。NLR、C-反应蛋白、PLT最佳截留点分别为5.075、80.485mg/L、347×109/L。经多因素logistic回归分析显示,NLR、CRP水平升高,PLT水平降低,分别为KD患儿静脉注射免疫球蛋白敏感性的独立危险因素。结论:NLR对KD患儿静脉注射免疫球蛋白敏感性的预测性能更稳定,PLR、SII对KD患儿静脉注射免疫球蛋白敏感性的预测价值需要进一步探讨。     

唐巍教授针灸治疗动眼神经麻痹经验

[目的]总结分析唐巍教授针刺治疗动眼神经麻痹的中医学术思想及临床经验。[方法]通过跟师临证,整理唐巍教授医案等,对唐巍教授治疗动眼神经麻痹的辨治方法、选穴思路的独特之处加以归纳总结,并列举验案一则加以佐证。[结果]唐巍教授认为动眼神经麻痹总属先天不足,脏腑气血失调,引起内外之风邪,从而致病,涉及经脉主要有肝、胆、膀胱、小肠、三焦、脾、肾经、阴阳跷脉。治疗上将患者按虚实分类,重视从阴阳经搭配选穴,强调滋补先后天;辨证选穴并配合交会穴、奇穴以调畅腑气、补虚泻实;刺法以平补平泻为主。所举验案中患者诊断为肝肾失养型动眼神经麻痹,病机总属因实致虚,虚实夹杂,治以滋补肝肾、平衡阴阳、调畅精气,治疗后患者症状明显改善,未见复发。[结论]唐巍教授针刺治疗动眼神经麻痹,注重平衡阴阳,调节先天后天,选穴力求精准,辨证准确,疗效突出,值得进一步深入学习和推广应用。     

基于SIRT1/PGC-1α通路探讨电针联合丰富康复训练对脑缺血大鼠氧化应激的影响

目的 探讨电针联合丰富康复训练对脑缺血大鼠急性期神经损伤的保护机制。方法 随机选取15只SD大鼠为假手术组,另将模型复制成功的大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型大鼠60只随机分为模型组、电针组、丰富康复训练组（康复组）和电针联合丰富康复训练组（联合组）,每组15只。假手术组和模型组不进行干预,电针组和联合组于“百会”“大椎”进行电针治疗;康复组和联合组予以丰富环境与康复训练,每次30 min,每日1次,连续治疗3 d。观察大鼠缺血侧皮质区脑血流量、组织形态学、阳性细胞率的动态变化,检测缺血侧皮质中丙二醛（malonic dialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量;RT-PCR检测沉默信息调节因子1（silent information regulator 1,SIRT1）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶-3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）及半胱氨酸蛋白酶-9（cysteinyl aspartate specific proteinase-9,Caspase-9）mRNA的表达水平。结果 分组因素对缺血侧皮质中MDA、SOD水平和SIRT1、PGC-1α、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2 mRNA表达水平的主效应均有统计学意义（P＜0.05）。与假手术组比较,模型组大鼠脑血流量,SOD水平,SIRT1、PGC-1α、Bcl-2 mRNA表达水平均显著降低（P＜0.05）,阳性细胞率,MDA水平,Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平均显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,各治疗组SOD水平,SIRT1、PGC-1α、Bcl-2 mRNA表达水平显著上升（P＜0.05）,MDA水平和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）;联合组与电针组、康复组比较,上述各指标表达水平均有统计学意义（P＜0.05）;电针联合丰富康复训练对缺血侧皮质MDA、SOD水平和SIRT1、PGC-1α mRNA表达水平的影响具有交互作用（P＜0.05）,对Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2 mRNA表达水平的影响无交互作用（P＞0.05）。结论 电针联合丰富康复训练可通过调控SIRT1/PGC-1α通路,提高抗氧化能力,改善神经细胞损伤,发挥神经保护作用。     

移植后高血糖状态是异基因造血干细胞移植术后患者死亡的危险因素

目的:分析异基因造血干细胞移植术(allo-HSCT)后存在高血糖状态的患者,探讨影响移植术后患者长期生存的不利因素。方法:对469例allo-HSCT治疗的血液病患者进行回顾性分析,并根据移植后高血糖状态将226例患者分为空腹血糖调节受损组(129例),糖耐量异常组(58例)及糖尿病组(39例),比较各血糖异常亚组与移植后血糖正常组(243例)患者的总生存和无进展生存。结果:与血糖正常组患者比较,高血糖状态组患者的3年和5年总生存及无进展生存差异无统计学意义,但高血糖组患者中的糖尿病亚组患者3年和5年总生存与血糖正常组比较差异有统计学意义(P0.05),最常见的死亡原因是感染。结论:应加强allo-HSCT后患者血糖的监测,积极处理高血糖并发症,以延长移植后患者生存,改善生活质量。     

异基因造血干细胞移植后血小板减少的危险因素及艾曲泊帕治疗效果分析

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后血小板减少的危险因素及使用艾曲泊帕治疗效果分析。方法 回顾性分析2014年1月至2020年12月于贵州医科大学附属医院行allo-HSCT后140例患者的完整临床资料,分为血小板减少组及造血重建良好组,每组70例,其中血小板减少组又分为原发性血小板减少(PT,n=14)及继发性血小板减少(SFPR,n=56)患者,分别比较各组临床特征与生存情况,并分析14例血小板减少患者使用艾曲泊帕的治疗疗效。结果 多因素分析显示,移植前疾病未缓解和部分缓解、合并感染、首次确诊到移植时间>6个月、ABO血型不相合、输注单个核细胞数≤10×10⁸/kg、发生急性移植物抗宿主病(GVHD)、EB病毒感染、巨细胞病毒(CMV)感染、使用抗病毒药物为allo-HSCT后血小板减少的独立危险因素(P<0.05)。血小板减少组3年总生存率(OS)、无进展生存率(PFS)均低于造血重建良好组(P<0.05),SFPR患者3年OS、PFS均低于PT患者(P<0.05)。艾曲泊帕在移植后血小板减少患者中使用治疗有效率为7...