葛根素对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧时脂质过氧化损伤的保护作用

目的 观察葛根素（puerarin,Pue)对缺氧－复氧损伤造成的大鼠乳鼠心肌细胞脂质过氧化反应的作用。方法 分别测定各个时点对照组、模型组及各给药组（1，0．1，0．01g/L Pue)培养上清中SOD活性和MDA含量，细胞MTT代谢率的变化。结果 缺氧及复氧都可造成SOD活性下降、MDA含量升高及MTT代谢率下降，复氧后2h最为显著（P＜0．01）。3种剂量Pue均能对抗这3个指标的异常变化，但浓度越小，作用越弱。结论 Peu能减轻缺氧时产生的自由基损害，减少SOD的消耗，并可能促进其合成，亦可保护心肌细胞的线粒体功能，这些作用呈剂量依赖趋势。     

急性胰腺炎患者IL-6、TNFα水平测定及临床意义

目的研究急性胰腺炎患者IL-6、TNFα分泌情况及其临床意义。方法选择30例急性胰腺炎患者和28例健康对照,用生物学方法检测血浆中IL-6、TNFα的水平。结果急性胰腺炎患者血浆中IL-6、TNFα分别为(76．4±10．1)k u/L、60．7％±12．3％,均高于正常对照组(20．8±6．1)ku/L、12．4％±4．7％,随疾病的恢复逐渐趋于正常(28．5±9．1)ku/L、18．8％±6．4％。结论急性胰腺炎患者血浆中的IL-6、TNFα水平均高于正常组,说明二者参与这一炎症过程。     

不同方法提取和处理中华绒螯蟹组织蛋白的过敏原组分分析

目的:分析不同方法提取和处理中华绒螯蟹组织的蛋白组分及过敏原组分,为检测中华绒螯蟹特异性IgE提供最佳抗原制备方法。方法:分别采用PBS提取法、丙酮抽提法和裂解液提取法提取中华绒螯蟹组织蛋白,并用裂解液提取法分别提取加热前、后的蟹蛋白;采用SDS-PAGE和双向电泳分析蛋白组分,采用Western blot分析过敏原组分。结果:不同方法提取的蛋白组分、sIgE与蛋白结合的强度和所识别的蛋白组分存在一定差异。PBS提取液蛋白主要分布在94、85、76、66、18kD,丙酮提取液蛋白主要分布在94、85、76、36 kD,裂解液提取液蛋白主要分布在200、125、51、43、38 kD。PBS提取液与sIgE结合的阳性反应条带主要分布在76、66、53、43、38、18 kD;丙酮提取液主要分布在94、76、66、50、43、38、18 kD;裂解液提取液主要分布在200、105、94、76、43、38、18 kD。加热前、后蟹蛋白过敏原组分差别不大。结论:裂解液提取法提取的中华绒螯蟹过敏原更适于制备测定特异性IgE的抗原。加热不影响蟹过敏原组分和与特异性IgE的结合活性。     

牛奶中高分子质量蛋白致敏作用的初步研究

目的探讨牛奶中高分子质量蛋白在牛奶过敏过程中的致敏作用。方法选取牛奶过敏患者血清30例,皮肤点刺试验阳性,血清特异性Ig E(s Ig E)检测结果均为阳性且≥1+。健康对照血清1例,血清s Ig E检测阴性,无过敏史。空腹采血,收集血清于-20℃冻存备用。利用Sephadex G200凝胶层析获得牛奶高分子质量蛋白,通过蛋白免疫印迹法(Wetern blot)和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清s Ig E的结合活性。结果 SDS-PAGE显示Sephadex G200凝胶层析纯化得到的高分子质量蛋白主要包括3条带,分子质量约为67、80和160 ku,推断其可能是牛血清白蛋白、乳铁蛋白和免疫球蛋白。经Western blot分析,3种高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清均能反应,并且在67 ku附近条带最明显。经ELISA分析,高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清的阳性反应率比β-乳球蛋白略高(分别是46.7%、43.3%)。结论牛奶中高分子质量蛋白组分能够诱导特异性抗体产生,这些组分在牛奶过敏过程中具有重要的致敏作用。     

促红细胞生成素ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

[目的]建立一种检测血清促红细胞生成素（EPO）的双抗体夹心ELISA方法,建立试剂盒,并且对其临床检测方法学进行研究。[方法]EPO抗体包被96孔板,以正常人血清和临床血清为标本,用ELISA法观察其灵敏度、回收率、线性试验、稳定性。[结果]最佳包被抗体浓度为1：600,最佳抗原工作浓度为1：100,酶标抗体工作浓度为1：5000。标准曲线的回归方程为Y=0．017x＋0．3002,相关系数r=0．9710。灵敏度为0．46mU／ml,高低浓度样品平均回收率分别为106．74％、104．78％,批内变异为3．04％～7．96％,批间变异则为1．38％～12．92％。[结论]该方法建立了一种定量检测EPO的ELISA试验,敏感性、特异性、准确度均良好,提供了临床上快速、准确、方便检测EPO的工具。     

血清促红细胞生成素的双抗体夹心ELISA法和ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

目的建立血清促红细胞生成素（EPO）的EUSA试剂盒及一种检测血清EPO的双抗体夹心ELISA方法,并对其临床检测方法学进行研究。方法EPO抗体用缓冲液稀释,150μL/孔滴加到96孔板,用以包被。以正常人血清和临床血清为标本,用ELISA法观察其灵敏度、回收率、线性试验、稳定性。结果最佳包被抗体浓度为1：600,最佳抗原工作浓度为1：100,酶标抗体工作浓度为1：5000。标准曲线的回归方程为：y=0．017x＋0．3002,r=0．9710,P〈0．05。灵敏度为0．46U／L,高、低浓度样品平均回收率分别为106．74％、104．78％。血清标本20、80U/L批内变异分别为3.044％、7．964％,批间变异分别为1．379％、12．915％。结论双抗体夹心ELISA法检测血清EPO,其敏感性、特异性、准确度均良好,为临床快速、准确、方便检测EPO提供了实验依据．     

卵巢癌患者TH1／TH2型细胞因子的测定

[目的]探讨THl／TH2型细胞因子水平与卵巢癌患者发生、发展之间的关系。[方法]采用夹心酶联免疫吸附实验和逆转录PCR法,对36例卵巢癌及32例健康对照组外周血淋巴细胞中TH1／TH2型细胞因子的蛋白水平及其mRNA水平进行了测定。[结果]与健康对照组相比,卵巢癌患者外周血淋巴细胞培养上清中的IL-2、IFN-v水平显著降低,而IL-4、IL-6和IL-10则显著增高,具有统计学意义。相应的外周血淋巴细胞mRNA水平与蛋白水平相同。(结论]卵巢癌患者异常分泌的TH1／TH2型细胞因子水平与卵巢癌的发生、发展密切相关。     

促性腺激素及IL-6对卵巢癌细胞株核因子-κB表达的影响

目的:探讨促性腺激素及IL-6对卵巢癌细胞株核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响. 方法:应用不同剂量的人重组促性腺激素及人重组白介素-6(hrIL-6)与卵巢癌细胞株OVCAR-3, Caov-3共培养,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观测其对卵巢癌细胞生长的影响,同时应用RT-PCR和ELISA方法检测卵巢癌细胞NF-κB水平,以分析其信号传导途径. 结果:促性腺激素对卵巢癌细胞株具有促增殖作用,分别增加35%～202%(P＜0.05);67.7%～192%(P＜0.01),并使细胞内NF-κB亚单位表达增加1.53倍～3.98倍(P＜0.05),与对照组相比差异具有显著性. 在处理组卵巢癌细胞培养液中加入50 mg/L抗IL-6中和性抗体,上述2种卵巢癌细胞株的生长均有所减慢,NF-κB表达下降. 结论:提示促性腺激素对卵巢癌细胞株的促增殖过程可能由IL-6介导,促性腺激素、IL-6及NF-κB共同影响卵巢癌细胞的生长.     

抗氨基甲酰化蛋白抗体联合抗环瓜氨酸肽抗体诊断类风湿关节炎的价值

目的 探讨抗氨基甲酰化蛋白(CarP)抗体联合抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体诊断类风湿关节炎(RA)的价值。方法 选取101例RA患者纳入RA组,35例非RA关节病变患者纳入疾病对照组,同期40例健康体检者纳入健康对照组。采用ELISA法测定三组抗CarP抗体和抗CCP抗体表达。分析抗CarP抗体和抗CCP抗体单独检测及并联试验诊断RA与临床诊断的一致性,通过四格表诊断试验分析诊断RA的准确性,ROC曲线分析抗CarP抗体和抗CCP抗体单独及联合检测诊断RA的价值。结果 RA组抗CCP抗体和抗CarP抗体表达高于疾病对照组和健康对照组(P<0.01)。抗CarP抗体和抗CCP抗体并联试验诊断RA与临床诊断的一致性较好(Kappa值=0.755,P<0.01),诊断RA的灵敏度和阴性预测值均提高。抗CarP抗体与抗CCP抗体联合检测诊断RA的AUC大于抗CarP抗体和抗CCP抗体单独检测(0.919 vs. 0.735和0.883)(P<0.05)。结论 抗CarP抗体在RA患者中高表达,其与抗CCP抗体并联试验诊断RA时具有较高的灵敏度和阴性预测值,有望成为诊断早期RA及...     

酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402细胞的抑制作用及对NK细胞杀伤活性的影响

[目的]研究三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide,YSL)对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的抑制作用及对自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性的影响。[方法]建立人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤模型,观察YSL对肿瘤生长的抑制作用;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测YSL对正常小鼠及人肝癌BEL-7402荷瘤鼠的NK细胞杀伤活性的影响。[结果]YSL[160μg(/kg·d)]能抑制BEL-7402的生长,肿瘤抑制率为72.23%,且能增强BEL-7402荷瘤裸鼠及正常小鼠NK细胞杀伤活性,与生理盐水组相比均具有显著性差异(P<0.05)。[结论]YSL对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤有抑制作用,并具有增强正常及荷瘤小鼠NK细胞杀伤肿瘤细胞活性的作用。