复方大黄散治疗软组织损伤

应用复方大黄散治疗软组织损伤100例,取得较好效果。处方:大黄500克,土鳖虫100克,红花100克,桃仁50克,细辛40克,研末混合备用,根据软组织损伤部位大小,取上药适量用75％酒精或白酒调成糊状,敷于患处,药上复盖油纸或塑料布块,用绷带固定,每日一次。     

结肠癌组织NRP-1和VEGF表达及其与预后相关性

目的结肠癌的发生发展过程与肿瘤血管生成密切相关,神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤血管生成中发挥重要作用。本研究旨在探讨结肠癌组织NRP-1和VEGF表达及其预后的关系。方法收集2010-08-01-2012-05-31南华大学附属南华医院普外胃肠病区手术切除、具有完整资料、术后经病理确诊的结肠癌及癌旁(>5cm)组织标本73例,采用免疫组织化学法检测NRP-1及VEGF在结肠癌及癌旁正常组织的表达;另外选取2016年南华大学附属南华医院切除结肠癌新鲜组织及癌旁组织(距癌组织>5cm)16对,采用蛋白质印迹法检测NRP-1及VEGF表达。结果免疫组化结果显示,与结肠癌癌旁组织比较,结肠癌组织中NRP-1及VEGF呈高表达,χ^2=55.857,P<0.001;χ^2=44.042,P<0.001。蛋白质印迹法检测结果显示,新鲜结肠癌组织中NRP-1及VEGF蛋白呈高表达,而癌旁组织中表达降低,差异有统计学意义,t=-63.238,P<0.001;t=-78.712,P<0.001。结肠癌组织中NRP-1和VEGF高表达均与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结有无转移有关联,差异有统计学意义,P<0.05;癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的数值与NRP-1表达有关联(χ^2=15.966,P=0.002),而与VEGF表达无统计学意义的关联,χ^2=0.061,P=0.862;Cox多因素回归分析显示,CEA(RR=4.851,95%CI:1.013~23.427)、肿瘤大小(RR=0.157,95%CI:0.017~1.228)、TNM分期(RR=5.419,95%CI:2.179~32.479)、淋巴结转移(RR=0.137,95%CI:0.023~0.728)是NRP-1阳性表达的独立影响因素;生存分析显示,NRP-1阳性表达组患者生存周期短于阴性患者,χ^2=5.081,P=0.029。结论NRP-1参与结肠癌的血管生成,并导致预后不良,提示NRP-1在结肠癌发生发展中起重要作用,为评估结肠癌预后及研究靶向药物提供新的思路。     

白藜芦醇对鼻咽癌细胞生长凋亡的影响及相关作用机制

目的 探讨白藜芦醇(RES)对鼻咽癌(NPC)细胞生长凋亡的影响及相关作用机制。方法 选取NPC细胞的CNE-1株与CNE-2Z株,采用CCK8比色法检测CNE-1与CNE-2Z细胞的半数抑制RES浓度(IC50),评估RES对NPC细胞活力的影响;采用ATP酶试剂盒超微量检测CNE-1与CNE-2Z细胞中总ATP酶(T-ATP)、钠钾ATP酶(Na+-K+-ATP)的变化情况,评估RES对NPC细胞ATP酶活力的影响;以免疫印迹(WB)检测CNE-1与CNE-2Z细胞中ATP蛋白与细胞核增殖抗原(PCNA)的表达情况,评估RES对调节NPC细胞生长凋亡相关基因与蛋白的影响;采用流式细胞技术检测NPC细胞的细胞周期分布与凋亡率。结果 RES对CNE-1与CNE-2Z细胞的活力表现出一定的剂量依赖性与时间依赖性,且随着RES浓度的增加,对CNE-1与CNE-2Z细胞活力抑制效果越显著(P0. 05);随着RES的浓度提高,CNE-1与CNE-2Z细胞的Na+-K+-ATP与T-ATP具有显著差异(F=45. 354,P0. 01,F=33. 209,P 0. 01; F=38. 586,P 0. 01,F=73. 706,P 0. 01);随着RES的浓度提高,对CNE-1与CNE-2Z细胞ATP酶的活力抑制越显著(P 0. 05);随着RES浓度的增加,NPC细胞的G1细胞与S细胞周期比率减少,NPC细胞增殖停滞于S期;随着RES浓度的增加,CNE-1与CNE-2Z的细胞凋亡率逐渐增加(P 0. 05),ATP与PCNA的蛋白表达量逐渐下降(P 0. 05)。结论 RES能抑制不同分化程度的NPC细胞的活性,降低细胞中ATP酶的活力,将NPC细胞阻滞与S期,下调ATP与PCNA蛋白的表达,可能是抑制NPC细胞生长增殖、诱导NPC细胞凋亡的机制之一。     

环氧合酶2抑制剂对非酒精性脂肪性肝病大鼠模型回肠Acsl基因家族表达的影响

目的研究环氧合酶2(COX-2)抑制剂对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型回肠Acsl基因家族表达的影响及意义。方法将45只SD大鼠随机分为3组:正常对照组(n=15只,普通饲料)、NAFLD模型组(n=15,高脂饲料)、尼美舒利组(n=15,高脂饲料+尼美舒利)。所有SD大鼠喂养到第12周处死。采集下腔静脉血,检测其总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。肝组织行HE染色和油红O染色,评价各组大鼠肝组织脂肪变性程度。实时荧光定量PCR法检测回肠Acsl家族各基因的表达情况。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与正常对照组大鼠比较,NAFLD模型组血清TC、TG值均明显增加,肝脏脂肪变性明显(P值均0.05);尼美舒利组与NAFLD模型组比较,血清TC、TG值均明显下降,肝脏脂肪变性程度减轻(P值均0.05);与正常对照组大鼠相比,NAFLD模型组大鼠回肠COX-2的表达明显升高(P 0.05);与NAFLD模型组大鼠相比,尼美舒利组回肠COX-2的表达明显降低(P 0.05);与正常对照组相比,NAFLD模型组回肠Acsl3、Acsl5基因的表达明显增加(P值均0.05);与NAFLD模型组相比,尼美舒利组Acsl3、Acsl5基因的表达明显降低(P值均0.05)。结论 COX-2抑制剂尼美舒利对NAFLD大鼠回肠Acsl基因家族表达有调控作用,提示COX-2抑制剂可能通过Acsl基因抑制NAFLD的进展。     

鼻渊通窍颗粒对儿童慢性鼻窦炎鼻黏膜纤毛传输功能及炎性细胞因子的影响

目的观察鼻渊通窍颗粒治疗儿童慢性鼻窦炎的临床疗效,并探讨其对鼻黏膜纤毛传输功能和炎性细胞因子的影响。方法慢性鼻窦炎患儿276例随机分为对照组和观察组,各138例。对照组给予阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂和氨溴索颗粒治疗,观察组在对照组基础上加服鼻渊通窍颗粒。对比2组临床疗效、鼻黏膜纤毛输送率(MTR)、鼻黏膜纤毛清除率(MCC),以及治疗前后血清白细胞介素-2(IL-2)、IL-6、IL-10、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TNF-β和C反应蛋白(CRP)表达水平差异。结果观察组总有效率90.58%,显著优于对照组的81.88%(P0.05);治疗后3和7 d,观察组MTR和MCC显著高于对照组(P0.01);2组IL-6和IFN-γ水平较治疗前上升,IL-2、IL-10、TNF-α、TNF-β和CRP较治疗前下降(P0.05或P0.01),除TNF-β,观察组上述炎症因子水平改善程度显著优于对照组(P0.05或P0.01)。结论鼻渊通窍颗粒能通过改善慢性鼻窦炎患儿的鼻黏膜纤毛功能及减轻炎症状态,改善其临床症状。     

利用CRISPR/Cas9慢病毒载体构建敲除大鼠肝星状细胞COX-2基因的细胞模型

目的通过构建CRISPR/Cas9慢病毒载体,转染HSC-T6细胞,获得能稳定表达Cas9蛋白的HSC-T6细胞和COX-2基因缺陷的HSC-T6-COX-2-/-细胞,为后期的功能研究提供良好的工具和手段,为临床上治疗肝纤维化提供新策略。方法设计合成COX-2基因特异性的sgRNA(COX-2-sgRNA-1、COX-2-sgRNA-2、COX-2-sgRNA-3),并将其连接至GV371载体上,提取重组后的质粒,将其与包装质粒共同转染到293T细胞,形成慢病毒颗粒,荧光法检测病毒滴度。按照MOI值计算病毒最适用量,先将Lenti-Cas9-puro转染至HSC-T6细胞,嘌呤霉素筛选得到HSC-T6-Cas9细胞,再用Lenti-COX-2-sgRNA-EGFP转染至HSC-T6-Cas9细胞获得HSC-T6-COX-2-/-细胞,通过Cruiser酶切检测及Western Blot等方法在基因和蛋白水平上进行敲除验证。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果通过测序验证COX-2-sgRNA表达载体构建成功。重组表达质粒和包装质粒共同转染到293T细胞,形成慢病毒颗粒,荧光法检测病毒滴度均在1×108以上。成功构建能稳定传代的Cas9蛋白的HSC-T6细胞和COX-2基因缺陷的HSC-T6-COX-2-/-细胞模型。HSC-T6-Cas9细胞中LV-Cas9-Puro mRNA相对表达量(541.93±105.76)高于CON组细胞(1.00±0.02),差异具有统计学意义(t=12.995,P<0.01)。通过Cruiser酶切检测及Western Blot试验,结果提示CRISPR/Cas9慢病毒表达载体能在靶点起作用,其中COX-2-sgRNA-2敲除作用最明显,并且COX-2蛋白表达水平较CON组和NC组相比显著下降(P值均<0.05),提示COX-2-sgRNA有活性。结论成功构建了针对COX-2靶基因的CRISPR/Cas9慢病毒载体,获得稳定的COX-2基因敲除的HSC-T6-COX-2-/-细胞。     

腹腔镜结直肠癌手术对患者高凝状态 及免疫功能的影响

目的 研究腹腔镜和开腹手术对结直肠癌患者高凝状态及免疫功能的影响。方法 收集2013 年2 月- 2015 年8 月该院行结直肠癌手术的121 例患者作为研究对象。其中行腹腔镜下手术73 例（腹腔镜组），行开 腹手术48 例（开腹组）；比较两组手术前后高凝状态指标D- 二聚体（D-D）、凝血酶原片段1+2（F1+2）、蛋 白C（Pro-C）和细胞免疫指标CD3+、CD4+ 及CD8+。结果 与同组术前比较，术后开腹组CD3+ 呈下降趋势 （t =-7.419，P =0.000），而腹腔镜组CD3+ 无变化（t =-0.218，P =0.901）；与开腹组术后比较，腹腔镜组术后 D-D 值呈升高趋势（t =2.312，P =0.018），Pro-C 值无变化（t =0.180，P =0.941）、F1+2 与CD4+ 值降低幅度较 小（t =3.827 和5.930，P =0.000 和0.008）、CD8+ 值升高幅度缓慢（t =-9.094，P =0.000）。结论 腹腔镜手术 是结直肠癌治疗的有效手术方式，但容易造成血液高凝状态，围手术期间应采取必要的预防措施。