TNF—α对人肝癌细胞E—钙粘蛋白、α5β1整合蛋白及粘着斑激酶蛋白表达的影响

目的：研究应用肿瘤坏死因子（TNF-α）单独处理SMMC－7721肝癌细胞不能引起肝癌细胞凋亡的原因。方法：采用免疫组化ABC法，结合图像分析仪及流式细胞术和Western印迹方法测定SMMC－7721细胞表面E－钙粘蛋白（E－cadherin)、α5β1整合蛋白（α5β1intergrin)、粘着斑激酶（FAK）表达及粘着斑激酶磷酸化的程度。结果：在肿瘤坏死因子的作用下，E－钙粘蛋白的表达略有下降，但无明显差异。整合蛋白α5亚基的表达明显下降，而整合蛋白β1亚基表达基本无变化。粘着斑激酶的蛋白表达随着肿瘤坏死因子浓度的增加略有下降，但变化不明显，粘着斑激酶的磷酸化程度无明显的变化。结论：单独用肿瘤坏死因子处理SMMC－7721肝癌细胞后，并没有阻断由整合蛋白，α5β1亚基及E－钙粘蛋白介导的2条信号通路，且由胱冬肽酶（caspases)介导的凋亡也没有被完全启动，不足以引起细胞的凋亡。     

整合蛋白α5,β1亚基的过表达对肝癌细胞粘附和迁移的影响

目的：研究整合蛋白α5,β1亚基的过表达与肝癌细胞粘附能力、迁移能力、集落形成能力、以及与肝癌细胞凋亡的关系。方法：用已建立的单独转染α5,β1整合蛋白亚基的细胞株α5/3-7721,β1/6-7721和共转α5和β1整合蛋白亚基的细胞株α5β1/6-7721;采用结晶紫染色法测定细胞的粘附能力、细胞的迁移能力;应用荧光染色法和流式细胞仪法测定细胞凋亡速度。结果：转染后细胞与主要胞外基质蛋白-纤连蛋白的粘附分别为对照细胞的1.39,1.34,1.7倍;与层粘连蛋白（Ln)的粘附为对细胞的1.3、2.6、1.98倍;α5,β1整合蛋白转移株细胞在Fn上的迁移能力分别增加1.22、0.78、1.38倍。集落形成能力分别下降38%,35%和52%。在无血清培养时,α5,β1整合蛋白转染株细胞的凋亡百分率分别提高2.4、0.53、1.79倍。结论：将α5β1整合蛋白导入人肝癌细胞引起α5β1整合蛋白表达,可显著改变细胞的生长,粘附和迁移能力,从而导致体外集落形成能力明显下降,细胞凋亡增加。     

黏着斑激酶对肝癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨降低黏着斑激酶（FAK）的表达对FAK高表达的人肝癌细胞株SMMC－7721恶性生物学行为影响。方法用Western杂交法比较不同肝癌细胞株FAK含量的差别,构建FAK反义质粒,转染至FAK高表达的细胞株,研究其多种细胞生物学行为的变化。结果SMMC－7721FAK含量比正常人肝细胞L02明显增高,转染FAK反义质粒后、SMMC－7721细胞生长受到抑制,软琼脂培养克隆形成率下降;细胞周期分析,S期细胞下降15％;黏附能力下降;细胞表面整连蛋白含量不变。结论在SMMC－7721中存在FAK过表达,降低FAK表达能部分逆转该肝癌细胞株的恶性表型。