miRNA对肿瘤细胞活性影响的探讨

目的试探讨m iRNA对肿瘤细胞活性的影响。方法利用脂质体介导法将5种m iRNA的反义寡核苷酸(AMR)转染至不同的肿瘤细胞,以不相关序列为对照,37℃35%CO2孵箱培养72 h后,用MTT法检测细胞活性。结果不同的m iRNA对肿瘤细胞活性的影响是不同的,既便同一种m iRNA对不同肿瘤细胞活性的影响也有可能是不相同的。结论不同的m icroRNA对肿瘤细胞活性的影响是不同的,同一种m icroRNA对不同肿瘤细胞活性的影响也有可能是不相同的。     

MicroRNA对肿瘤细胞活性的影响

MicroRNA(miRNA)是一类非编码蛋白的短序列RNA片段,长度大约为21～23个核苷酸。它是通过结合到目标mRNA上抑制该mRNA翻译,起着调控基因功能的作用。本试验将4种miRNA的反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide ofmiRNA,AMR)转染至不同的肿瘤细胞后,用MTT法测定细胞活性来检测miRNA对肿瘤细胞活性的影响。1材料与方法1.1肿瘤细胞人胃癌细胞株MGC803、人胶质瘤细胞株U373、人上皮样宫颈癌细胞株HeLa、人结肠癌细胞株SW620均来自本中心细胞室。1.2主要试剂RPMI1640培养基(Gibco,美国);胎牛血清(中国医学科学院血液研究所);胰…     

人Argonaute2蛋白多克隆抗体制备及初步应用

目的:制备人Argonaute2(Ago2)的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法:用DNAstar软件寻找抗原性高的Ago2序列区域(命名为k-Ago2),构建k-Ago2的表达质粒,转化大肠杆菌并诱导表达。融合蛋白经切胶回收纯化后免疫大白兔制备抗体。以ELISA检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性及检测Ago2在细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察Ago2的细胞定位。结果:成功构建表达质粒,继而k-Ago2得以表达与纯化,免疫大白兔后得到Ago2多克隆抗体。ELISA检测抗体效价为1∶19 000,Western blot确定抗体具有高度特异性,并成功地用该抗体检测到Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。结论:Ago2多克隆抗体的成功制备,对RNAi机制的深入研究及其进一步的临床应用均具有重要价值。