肝癌组织、缺氧SMMC-7721细胞中HPA的表达变化及机制探讨

目的观察肝癌组织及缺氧培养的肝癌SMMC-7721细胞中乙酰肝素酶（HPA）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达变化,并探讨其机制。方法免疫组化法检测50例肝癌组织、28例肝癌癌旁组织、14例正常肝组织中的HPA、HIF-1α蛋白。分别采用RT-PCR和Western blot法检测常氧和缺氧培养的人肝癌SMMC-7721细胞中HPA mRNA及其蛋白。结果 HPA、HIF-1α蛋白在肝癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁和正常肝组织（P〈0.05）;肝癌组织中HPA、HIF-1α蛋白的表达呈正相关（r=0.295,P〈0.05）。缺氧培养20 h后,SMMC-7721细胞HPA mRNA表达量（6.234±0.457）显著高于常氧培养细胞的表达量（2.910±0.137）,两者相比,P〈0.05;其HPA蛋白表达量（65 kD为1.437±0.067,50 kD为1.706±0.066）也显著高于常氧培养细胞的表达量（65 kD为1.192±0.060,50 kD为1.580±0.265）,两者相比,P〈0.05。结论肝癌组织中HPA蛋白阳性表达率升高,缺氧肝癌SMMC-7721细胞中HPAmRNA及蛋白表达量均升高,可能与缺氧导致的HIF-1α表达上调有关。     

HIF-1α反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制

目的：本研究通过应用 HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）处理 SMMC-7721肝癌细胞,观察其对 SMMC-7721肝癌细胞增殖的作用和对细胞周期及凋亡率的影响及其机制。方法肝癌细胞系SMMC-7721分对照组和试验组。对照组细胞常规培养,试验组细胞施加 HIF-1α的 ASODN 干预,设浓度梯度和时间梯度。检测不同药物浓度、不同时间对 SMMC-7721细胞的增殖的作用及对细胞周期和凋亡率的影响。对 bcl-2、bax、surviving mRNA 表达产物相对定量,并对 SMMC-7721细胞胞浆 bcl-2、bax、survivin 蛋白进行相对定量分析。结果与对照组相比,各处理组 OD 值均有显著下降,细胞数量降低,且各实验组相比呈明显的时间-剂量依赖效应,差异有统计学意义（ P <0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞后,均可使各处理组 G0/ G1期细胞增多,S 期细胞减少,且呈时间-剂量依赖效应,差异有统计学意义（ P <0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞不同时间后,与对照组相比,各实验组 bcl-2 mRNA 和 survivin mRNA 表达均有显著下降,差异有统计学意义（ P <0.05）。而 bax 的 mRNA无明显变化趋势（ P >0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞不同时间后,与对照组相比,各实验组 bcl-2和survivin 的蛋白表达显著下降,bax 的蛋白表达显著增加,差异有统计学意义（ P <0.05）。结论 HIF-1α的 ASODN可以将 SMMC-7721肝癌细胞株阻滞于 G0/ G1期,影响细胞周期进程,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。HIF-1α促进增殖抑制凋亡的可能机制是上调肝癌细胞 Survivin 和 bcl-2的表达,下调 bax 的表达。针对 HIF-1α抑制剂的应用为肝癌的治疗提供了新思路。     

Ca2+信号通路对肝癌细胞乙酰肝素酶表达的影响

目的探讨Ca2+信号调节通路对肝癌细胞乙酰肝素酶的表达及分泌的影响。方法不同浓度的Ca2+及其激动剂毒胡萝卜内酯(TG)和抑制剂S-亚硝基-乙酰青霉胺(SNAP)作用于SMMC-7721细胞,RT-PCR检测肝癌细胞乙酰肝素酶mRNA表达的变化;W estern-b lot检测肝癌细胞及其培养上清乙酰肝素酶蛋白表达的变化。结果 Ca2+对肝癌细胞乙酰肝素酶mRNA的表达没有影响,随Ca2+浓度的增加,细胞培养上清和肝癌细胞胞浆乙酰肝素酶蛋白表达增加;Ca2+激动剂TG能诱导肝癌细胞内及培养上清中HPA蛋白表达,这种诱导作用能被TG抑制剂SNAP抑制。结论 Ca2+通过细胞内NO→cGMP调控的Ca2+信号通路促进肝癌细胞内乙酰肝素酶蛋白表达和分泌。     

miR-762在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：miR-762在多种恶性肿瘤中存在表达异常,参与肿瘤的增殖、凋亡及侵袭转移。观察miR-762在胰腺癌组织和细胞系中的表达及对胰腺癌细胞增殖、侵袭转移的影响。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）技术检测于河北医科大学第四医院行胰腺癌根治术的胰腺癌组织和细胞株中miR-762的表达。通过Lipofectamine ^TM 2000将miR-762模拟物（mimics）、miR-762抑制物（inhibitors）及其阴性对照序列（scramble序列）分别转染胰腺癌PANC-1细胞。采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）实验检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞侵袭转移能力;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）相关分子标志物表达。结果：胰腺癌组织中miR-762 mRNA表达量显著高于癌旁组织（P<0.01）。胰腺癌细胞株BxPC-3、PANC-1、AsPC-1、SW-1990中miR-762 mRNA的表达量也显著高于正常胰腺上皮细胞HPDE（P<0.01）。转染miR-762 mimics后PANC-1细胞miR-762 mRNA表达量显著增加,而转染miR-762 inhibitors后PANC-1细胞miR-762 mRNA表达量显著降低（P<0.01）。同时miR-762 mimics组450 nm处的吸光度（D ₄₅₀ ）值、细胞迁移距离和穿膜细胞数及间质表型细胞标志物N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）表达量显著增加,细胞凋亡率及上皮细胞标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达量显著降低;而miR-762inhibitors组D ₄₅₀ 、细胞迁移距离和穿膜细胞数及间质表型细胞标志物N-cadherin、vimentin表达量显著降低,细胞凋亡率及上皮细胞标志物E-cadherin表达量显著增加（P<0.05）。结论：miR-762在胰腺癌组织和细胞株中高表达,上调miR-762表达可能通过调控N-cadherin、vimentin、E-cadherin表达促进EMT进程,从而增强PANC-1细胞的增殖和侵袭转移能力。     

肝脏炎性肌纤维母细胞瘤1例

患者女性,65岁。持续发热1月余,体温最高达38．7℃。无腹痛、腹泻、黑便、便秘史。患病期间未感特殊不适,后于外院查CT发现肝占位病变。查体：生命体征平稳。全身皮肤及巩膜无明显黄染。腹平坦,全腹无压痛、反跳痛及肌紧张,肝脾未触及。胆囊无肿大,Murphy征（－）。     

Ca~（2＋）信号通路对肝癌细胞乙酰肝素酶表达的影响

目的探讨Ca2＋信号调节通路对肝癌细胞乙酰肝素酶的表达及分泌的影响。方法不同浓度的Ca2＋及其激动剂毒胡萝卜内酯（TG）和抑制剂S-亚硝基-乙酰青霉胺（SNAP）作用于SMMC-7721细胞,RT-PCR检测肝癌细胞乙酰肝素酶mRNA表达的变化;W estern-b lot检测肝癌细胞及其培养上清乙酰肝素酶蛋白表达的变化。结果 Ca2＋对肝癌细胞乙酰肝素酶mRNA的表达没有影响,随Ca2＋浓度的增加,细胞培养上清和肝癌细胞胞浆乙酰肝素酶蛋白表达增加;Ca2＋激动剂TG能诱导肝癌细胞内及培养上清中HPA蛋白表达,这种诱导作用能被TG抑制剂SNAP抑制。结论 Ca2＋通过细胞内NO→cGMP调控的Ca2＋信号通路促进肝癌细胞内乙酰肝素酶蛋白表达和分泌。     

基于加权基因共表达网络分析并验证胰腺癌增殖相关关键基因

目的基于加权基因共表达网络分析(WGCNA)筛选与胰腺癌细胞增殖相关的关键基因并进行验证。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因型-组织表达(GTEx)数据库生成的胰腺癌以及正常组织数据集产生差异表达基因(DEGs)。采用R软件包的limma算法识别DEGs, 校正后P<0.01且表达变化大于2倍的基因被鉴定为DEGs。采用Metascape数据库对DEGs的功能进行富集分析。使用R软件包进行WGCNA分析。使用R软件包的Survival功能进行生存分析;取30例就诊于河北医科大学第四医院胰腺癌患者的新鲜胰腺癌临床样本及癌旁组织, 应用荧光实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测部分筛目标基因mRNA表达水平。数据分析使用R软件及SPSS 25.0统计分析软件进行处理。结果 DEGs分析结果显示, 在胰腺癌组织中有12 044个基因表达上调, 有694个基因表达下调(P<0.01)。生存分析结果显示, 其中855个与患者预后显著相关的基因(P<0.01)。对影响预后的DEGs进行富集分析, 发现与DNA损伤修复、细胞周期转化、蛋白激酶活性调控等多种功...     

HIF-1α对人肝癌细胞MDR1表达的影响

目的 探讨缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factors,HIF-1)α对人肝癌细胞株多药耐药基因(multi-drug resistance gene 1,MDR1)mRNA和蛋白表达的影响.方法 以0、1.0、3.0、5.0μmol/L浓度的HIF-1α抑制剂YC-1和0、1.0、2.5、5.0μmol/L HIF-1α的反义寡核苷酸作用于人肝癌细胞株BEL-7402细胞,24h后RT-PCR法检测药物干预前后肝癌细胞株HIF-1、MDR1mRNA的变化;Western-Blot方法 检测肝癌细胞株HIF-1、MDR1蛋白表达的变化.结果 反转录-聚合酶链反应产物结果 显示,YC-1作用后,肝癌细胞HIF-1α m RNA表达差异无统计学意义,随着HIF-1α抑制剂浓度的增加,MDR1 mRNA的表达逐渐降低;随着HIF-1α反义寡核苷酸浓度的增加,HIF-1αmRNA和MDR1mRNA的表达逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05).Western-Blot检测结果 显示,随着HIF-1α抑制剂浓度增加,BEL-7402细胞HIF-1α、MDR1蛋白表达逐渐减少;随着HIF-1α反义寡核苷酸浓度增加,BEL-7402细胞HIF-1α、MDR1蛋白表达亦逐渐减少.药物干预组与对照组、各浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIF-1α可以促进肝癌细胞MDR1mRNA和蛋白的表达.