联合血液学指标和超声建立甲状腺结节术前良恶性鉴别模型

目的 结合大量临床诊断病例的验证分析,寻找术前甲状腺结节相关指标,建立甲状腺结节良恶性鉴别早期辅助诊断模型.方法 研究解放军总医院收治甲状腺结节住院患者并及时收集其术前血液样本用于生化、甲功、血常规等相关指标测定.回顾性验证分析术前病人一般资料、临床血液学数据、超声结果与术后病理诊断的相关性.结果 入选Logistic回归方程指标包括年龄(Age)、血清促甲状腺激素(TSH)、血清高密度脂蛋白(HDL)、中性粒细胞计数(N)、超声结果(Ult)5项,建模方程为Logit(P)=1.673-0.069X1+0.301X3-1.499X8+5.335X10+ 21.182X12,模型组联合ROC曲线下面积为0.882;验证组为0.812.结论 通过模型分析初步建立甲状腺结节术前良恶性鉴别的血液学指标应用基础,联合超声为手术选择提供客观依据.     

基于液态活检的4种甲基化检测方法的比较及临床应用价值评价

目的 基于分泌卷曲相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2,SFRP2)基因,评价荧光定量法(Methy Light)、微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)、核酸质谱、靶向亚硫酸氢盐二代测序4种甲基化检测方法。方法 对4种甲基化检测方法的检测限(limit of detection, LOD)、定量限(limit of quantitation, LOQ)及稳定性方面进行比较,其中稳定性用变异系数(coefficient of variation,CV)来评估。结果 SFRP2基因在Methy Light、ddPCR、核酸质谱和靶向亚硫酸氢盐二代测序中的LOD分别为1.2500ng/孔、0.0625ng/孔、0.0625ng/孔、1.2500ng/孔,在LOD方面,ddPCR和核酸质谱的表现较好;SFRP2基因在MethyLight、ddPCR、核酸质谱和靶向亚硫酸氢盐二代测序中的LOQ分别为0.800%、0.032%、4.000%、0.032%,在LOQ方面,ddPCR和靶向亚硫酸氢盐二代测序的表现较好;SFR...     

尿液中GSTP1基因甲基化数字PCR方法的建立和优化

目的 基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)建立一种检测前列腺癌(prostatic cancer, PCa)尿液谷胱甘肽硫转移酶P1(glutathione S-transferase pi-1,GSTP1)基因甲基化的方法,并对其进行优化。方法 本研究收集20例前列腺癌尿液样本,设计并筛选引物和探针,通过调整亚硫酸氢盐转化时间及ddPCR反应体系中引物浓度、探针浓度、退火温度、循环次数、变性时间和退火延伸时间对ddPCR检测方法进行优化。结果 尿液DNA亚硫酸氢盐转化的最佳时间是2h 10min,最佳引物浓度是700nmol/L,最佳扩增温度为58.3℃,最佳循环次数是50次,最佳变性时间是30s,最佳退火延伸时间是60s,本研究范围内探针浓度对ddPCR影响不大,可根据实验自行调整探针浓度。结论 本研究建立并优化了ddPCR检测前列腺癌尿液样本GSTP1基因甲基化方法,提高了ddPCR检测尿液中痕量DNA的性能。     

高通量核酸分析技术在体外诊断领域的应用前景

分子诊断技术是以目的核酸作为诊断目标,通过核酸扩增技术或者核酸杂交技术检测核酸的变化,并以此作为疾病诊断的依据.相对于传统的检测方法如显微镜技术或微生物培养,核酸分析技术的优越性在于其高灵敏度和特异性,核酸分析技术不仅在疾病诊断方面具有优势,而且在疾病的易感性,疾病的分型、分期以及预后判断和疗效检测都具有十分重要的意义.目前核酸检测技术已广泛应用于科学研究和临床检测,如感染性疾病和遗传性疾病筛查、肿瘤的分子诊断和药物基因组研究等,是临床检验医学的一个重要组成部分.     

甲基化循环肿瘤DNA的检测及应用

癌症目前仍是医学界面临的第一大难题,其早期诊断、预后风险预测及治疗疗效评估有利于提高患者的生存率.目前临床上诊断癌症主要依靠肿瘤组织病理、内窥镜等检查,但都存在侵入性和异质性的问题.而在肿瘤细胞DNA中发生的分子变化如突变、易位和甲基化等,在循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)中也能...     

外周血多参数基因诊断模型对于原发性肝细胞癌诊断价值的评价

目的建立一种基于外周血mRNA的原发性肝细胞癌多参数基因诊断模型。方法 GeXP法检测9个基因（GPC3、HGF、ANXA1、FOS、SPAG9、HSPA1B、CXCR4、PFN1和CALR）的含量。103例早期原发性肝癌患者和54例健康对照人群用于建立诊断模型。52例早期原发性肝癌患者和34例健康对照人群用于验证模型。使用二元Logistic回归分析、判别分析、分类树和人工神经网络建立多参数基因诊断模型用于评价其诊断价值。受试者工作曲线、曲线下面积、敏感性和特异性用于诊断价值的评价。结果 9个基因的人工神经网络模型具有最好的诊断价值,其曲线下面积、敏感性和特异性分别为0.943,98%和85%。验证后,其敏感性和特异性分别为96%和86%。结论多参数基因诊断模型的诊断价值优于单一基因诊断价值,可以作为潜在的早期原发性肝癌辅助诊断方法。     

女性生殖道人乳头状瘤病毒感染亚型分布分析

目的 对人乳头状瘤病毒(HPV)感染人群进行调查分析,并对不同亚型HPV感染的人群分布及合并感染状况进行分析.方法 采用导流杂交技术,对妇产科门诊确诊的236例慢性宫颈炎及阴道异常出血妇女,进行阴道拭子HPV感染分型筛查.结果 在236例检测者中,HPV-DNA检测阳性172例,感染人群呈年轻化趋势;HPV 16、52、56、58亚型是中国女性中感染率较高的HPV亚型,占研究所检测常见亚型的37.0％;与其他亚型相比,HPV16和HPV18可能更容易引发多型HPV感染;在对各年龄段患者感染亚型数目的调查分析中,发现＞55岁人群中感染的HPV亚型最高.结论 HPV的感染趋于年轻化趋势,宫颈癌的发展过程与HPV的持续性感染,以及各亚型的相互作用密切相关,且高龄女性具有更高的宫颈癌患病风险,因此应增大HPV-DNA筛查力度.     

数字PCR检测尿液循环DNA甲基化的方法学性能评价

目的 基于尿液中的谷胱甘肽硫转移酶P1(glutathione S-transferase pi-1,GSTP1)基因,对微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测循环DNA甲基化的方法学进行性能评价。方法 根据甲基化检测试剂盒相关IVD产品的注册指南,主要从引物探针特异性、灵敏度、批内精密度、批间精密度、准确度5个方面对数字PCR检测尿液循环DNA甲基化进行性能评价。结果 GSTP1基因仅在前列腺癌样本中生成明显阳性微滴,在胃癌、肝癌、肾细胞癌、肺癌、膀胱癌、尿道癌、结直肠癌和胰腺癌中不生成阳性微滴,引物探针特异性良好;GSTP1基因的检测限为0.1ng/孔,当DNA输入量大于等于0.1ng/孔时,DNA甲基化情况都可以被检测到,灵敏度较好;批内精密度变异系数均小于6.25%,批间精密度变异系数均小于8.33%,符合CLSI参考文件的标准,表示精密度良好;通过比较数字PCR与荧光定量PCR(Methylight)检测前列腺癌尿液样本GSTP1甲基化情况,相关系数为0.9949,表明两种方法相关性较好,证明数字PCR准确度良好。结论 数字PCR检测尿液循...     

肿瘤细胞DNA损伤修复机制与化疗敏感性

在肿瘤化疗中,药物所致DNA损伤起着极其重要的作用.其损伤很大程度上刺激了DNA修复能力的增强,从而严重制约化疗药物的药效.而DNA修复能力的下降可使肿瘤细胞对药物产生超敏反应,达到更好的辅助化疗效果.因此作为一种辅助化疗的方法可以通过改变基因使肿瘤细胞DNA修复能力下降.