RON变异体RON△170对自身酪氨酸磷酸化变异体RON△160的显性抑制作用

目的研究受体型酪氨酸激酶RON的变异体RON△170对RON的自身酪氨酸磷酸化变异体RON△160的作用。方法NIH-3T3和3T3-RON△160细胞转染质粒pcDNA3．1-RON△170,建立3T3-RON△170和3T3-RON△160△170细胞株;流式细胞仪检测RON△170蛋白的表达：免疫沉淀法检测RON的酪氨酸磷酸化：软琼脂培养法观察RON△170对3T3和3T3-RON△160细胞生长能力的作用。结果成功建立3T3-RON△170和3T3-RON△160△170细胞株．流式细胞仪胞膜蛋白检测法证明其稳定表达RON△170蛋白：免疫沉淀试验结果显示RON△170能明显抑制RON△160的RON酪氨酸磷酸化：软琼脂生长实验示3T3、3T3-RON△160、3T3-RON△170和3T3-RON△160△170细胞生长克隆数比较,差异有统计学意义（t=7．93,P〈0．05）。结论受体型酪氨酸激酶RON的变异体RON△170无酪氨酸磷酸化功能,且具有显性抑制变异体特性．     

从纤支镜刷落细胞提取微量RNA并检测Foxp3基因表达

目的建立纤维支气管镜刷落细胞提取微量核糖核酸（RNA）的方法，检测分析调节性T细胞（Treg）Foxp3基因在肺癌及肺良性疾病患者中的表达水平。方法以磁珠吸附法提取154例肺癌及肺良性疾病患者纤支镜刷脱细胞的微量RNA，以实时荧光定量RT—PCR的方法检测Treg特异性转录因子Foxp3基因在肺癌及肺良性疾病患者中的表达水平。结果平均总RNA提取量为5．08μgRNA／例，最低为3．20μg，最高为15．25μg。肺癌患者组中Foxp3 mRNA的表达水平（0.0000—13682．0805，四分位数间距0．0011）显著高于肺良性疾病组（0．0000—0．0061，四分位数间距0．0000）（Z=-3．508，P〈0．01），肺癌患者组中Foxp3的阳性率，（29．34％，27／92）亦明显高于肺良性疾病组（3．23％，2／62）（x^2=16．535，P〈0．01）。结论利用纤支镜毛刷刷取病灶部位涂片后毛刷中的剩余细胞．采用磁珠吸附的方法可以提取微量RNA，并用于基因表达水平的检测。     

RNA干扰介导的Adrml基因沉默对大肠癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨RNA干扰使Adrml基因沉默后对大肠癌细胞增殖的影响.方法 构建靶向Adrml基因的shRNA真核表达载体,转染大肠癌细胞RKO,筛选Adrml基因沉默的稳定克隆.实验细胞分为3组,即稳定转染Adrml-shRNA的实验组、仅含大肠癌RKO细胞的空白对照组和转染空载体的阴性对照组.采用Western blot法检测Adrml蛋白的表达水平.通过软琼脂细胞集落形成实验观察3组细胞的集落形成能力.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞的增殖和凋亡水平.应用流式细胞仪检测细胞周期的变化情况.结果 实验组大肠癌RKO细胞中,Adrml蛋白的表达受到明显抑制.实验组细胞的非贴壁依赖生长能力明显下降,偶见个别集落形成.实验组细胞的凋亡百分率为(12.4±1.1)%,明显高于阴性对照组[(1.3±0.2)%,P＜0.05].实验组G_0/G_1期和S/G_2期细胞所占的比例分别为(41.2±1.1)%和(58.8±1.1)%,实验组细胞被阻滞在G_1期.Adrml基因沉默能明显增强5-氟尿嘧啶(5-Fu)对大肠癌RKO细胞的生长抑制作用,并引起大肠癌RKO细胞大量凋亡.结论 RNA干扰介导的Adrml基因沉默能诱导大肠癌细胞发生凋亡并出现细胞周期阻滞,从而抑制肿瘤细胞的增殖.对于Adrml基因高表达的大肠癌患者,RNA干扰Adrml基因的表达并结合传统化疗有望成为新的治疗手段.     

纤维支气管镜毛刷洗脱细胞中CEA mRNA、CK20 mRNA表达的临床意义

目的基因水平检测肺部疾病患者纤维支气管镜刷落细胞中CEA mRNA、CK20 mRNA表达水平临床意义。方法共收集83例肺部疾病患者纤维支气管镜刷脱细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测CEA mRNA、CK20 mRNA在其中的表达。结果肺癌与肺良性疾病CEA mRNA、CK20 mRNA之间的相对表达量差异均有统计学意义（Z分别=-3.79、-1.98,P均〈0.05）。有81.39%的肺癌患者CEAmRNA、CK20mRNA超过阳性界限,同时进行的病理学诊断（毛刷涂片或活检）阳性率为58.13%。综合CEA mRNA、CK20mRNA、涂片和活检四项联合检测结果,肺癌患者阳性检出率高达90.69%。结论通过CEA mRNA、CK20 mRNA在肺癌中异常表达的检测和与病理学诊断的的综合分析,将有助提高肺癌的阳性检出率。     

大肠癌中蛋白酶体亚基PSMA7的高表达与肝转移的关系

目的 探讨蛋白酶体亚基PSMA7在大肠癌中的表达及意义.方法 应用免疫组化法检测手术切除的62例原发大肠癌组织、34例转移淋巴结和13例肝转移组织中PSMA7的表达.并分析PSMA7的表达与临床病理之间的关系.结果 PSMA7在正常大肠组织中均为阴性或弱阳性,而在38.7%(24/62)原发大肠癌组织、52.9%(18/34)转移淋巴结和100%(13/13)肝转移组织中高表达,且原发大肠癌组织的PSMA7高表达与肝转移密切相关(P=0.028).PSMA7高表达组的患者生存率明显低于PSMA7低表达组(P=0.0008).在生存率多因素分析中,PSMA7表达为影响患者预后的独立因素(P=0.004,相对危险度5, 057,95%可信区间为1.682-15.201).结论 PSMA7可能在大肠癌的进展中起重要作用,评估原发大肠癌组织中PSMA7的表达水平对判断是否继发肝转移有一定指导意义.