Disulfiram 联合Cu对耐药白血病细胞的作用及与JNK通路的关系

目的研究disulfiram(DS)联合Cu(DS/Cu)对耐药白血病细胞株HL60/ADM的逆转耐药作用及与JNK通路的关系。方法MTT法检测DS/Cu对HL60/ADM细胞的增殖抑制作用;选取DS/Cu对HL-60/ADM无明显杀伤作用的IC20值作为逆转浓度,MTT法检测IC20浓度DS/Cu联合不同浓度ADM处理24h后的IC50值;流式细胞仪检测阿霉素、DS/Cu单药及DS/Cu与阿霉素联合处理HL-60/ADM24h凋亡细胞比例的变化;Westernblotting检测c-jun表达的变化。结果DS/Cu对HL60/ADM细胞具有显著的增殖抑制作用,处理24hIC50为(1.11±0.025)μmol/L。HL-60/ADM细胞经IC20浓度(0.63μmol/L)DS/Cu处理24h后,ADM的IC50值从(7.69±1.87)降到(0.48±0.021)μg/mL,逆转倍数为15.95倍(P=0.003)。0.63μmol/L的DS/Cu、1.25μg/mL的阿霉素单药及上述浓度的DS/Cu联合阿霉素作用HL60/ADM细胞24h后,联合组凋亡细胞比例较DS/Cu或阿霉素单药组均显著增多(P<...     

经腹肠道超声诊断克罗恩病合并肠瘘及肠腔狭窄

目的 观察经腹肠道超声诊断克罗恩病(CD)合并肠瘘及肠腔狭窄的价值。方法 回顾性分析337例CD患者,观察其肠道超声及CT小肠造影(CTE)表现,分析二者诊断CD合并肠瘘的一致性;以手术结果为金标准,评价超声及CTE诊断CD合并肠瘘和肠腔狭窄的效能。结果 337例中,超声及CTE同时诊断CD合并肠瘘48例,诊断一致性极高(Kappa=0.848,P＜0.01)。34例接受手术治疗,其中27例存在肠瘘;超声诊断CD合并肠瘘的敏感度、特异度及准确率分别为92.59%、71.43%及88.24%,CTE诊断的敏感度、特异度及准确率分别为96.30%、71.43%及91.18%,二者差异无统计学意义(McNemar P＞0.05)。27例CD合并肠瘘患者中,18例同时合并肠腔狭窄;超声诊断CD合并肠瘘和肠腔狭窄的敏感度、特异度及准确率分别为88.89%、77.78%及85.19%,CTE诊断的敏感度、特异度及准确率均为88.89%,二者差异无统计学意义(McNemar P＞0.05)。结论 经腹肠道超声诊断CD合并肠瘘和肠腔狭窄效能较高,可媲美CTE。     

浸润性三阴性乳腺癌的超声征象与Ki-67表达的关系研究

目的分析浸润性三阴性乳腺癌的超声征象与癌组织Ki-67表达的关系。方法通过肿瘤基因图谱数据库分析浸润性三阴性乳腺癌组织中Ki-67的编码基因MKI67的表达及其与生存时间的关系。回顾性分析我院经病理确诊的72例浸润性三阴性乳腺癌患者的超声征象与Ki-67的免疫组织化学染色结果,分析其超声征象与Ki-67表达的关系。结果浸润性三阴性乳腺癌组织中MKI67 mRNA水平较浸润性非三阴性乳腺癌高(11.80±0.11 vs. 10.70±0.05);浸润性三阴性乳腺癌组织中Ki-67高表达者,其总生存时间较Ki-67低表达者短[(34.9±5.1)个月vs.(40.3±4.5)个月],差异均有统计学意义(均P0.05)。浸润性三阴性乳腺癌超声征象中,血流分级Ⅱ～Ⅲ级者Ki-67高表达的比例高于0～Ⅰ级者(63.2%vs.26.5%),差异有统计学意义(P0.05);腋窝淋巴结转移者Ki-67高表达的比例高于无转移者(58.8%vs. 34.2%),差异有统计学意义(P0.05)。结论浸润性三阴性乳腺癌超声征象中血流分级及腋窝淋巴结与Ki-67表达水平有关。     

DS/Cu对急性髓系白血病干细胞增殖与凋亡影响及其机制的探讨

目的:探讨双硫仑(disulfiram,DS)单药及DS联合Cu(DS/Cu)在体外对白血病干细胞的影响及其分子机制。方法:应用流式细胞仪分选KG1a细胞中具有LSCs特性的CD34+CD38-亚群;MTT检测DS和DS/Cu对CD34+CD38-KG1a细胞的抑制增殖作用;Annexin-Ⅴ/PI法检测DS及DS/Cu对CD34+CD38-KG1a细胞的诱导凋亡作用;蛋白质印迹法检测药物处理后NF-кb通路和JNK通路蛋白表达的变化。结果:CD34+CD38-亚群占KG1a细胞的(59.4±6.2)%,流式细胞分选后的CD34+CD38-细胞可达(93.16±2.7)%,其中(65.3±6.4)%处于G0/G1期。DS和DS/Cu能抑制CD34+CD38-KG1a细胞增殖能力,24h的IC50分别为(0.54±0.18)μmol/L和(0.21±0.03)μmol/L,DS/Cu的作用显著强于DS,P=0.036。DS和DS/Cu对CD34+CD38-KG1a细胞均有诱导凋亡的作用,0.05、0.5和5μmol/L的DS和DS/Cu作用细胞24h后凋亡率分别为〔(7.69±3.44)%、(15.06±4.58)%、(32.67±6.06)%〕和〔(28.83±6.34)%、(42.33±3.21)%、(58.93±1.53)%〕,DS/Cu诱导CD34+CD38-KG1a细胞凋亡的比例显著高于DS单药,P<0.01;DS及DS/Cu均能抑制p65蛋白及下游蛋白c-myc、Survivin的表达、并上调磷酸化JNK及下游转录因子p-c-jun的表达,DS/Cu的作用更加显著。结论:DS在体外能抑制LSCs增殖及诱导其凋亡,Cu可以显著增强这种作用,其作用机制与抑制NF-κb通路及激活JNK通路相关。     

肝包虫病超声特征性表现在早期诊断中的应用

目的 探讨肝包虫病灶声像图表现特征在临床早期诊断尤其是筛查中的应用价值.方法 采用WHO-IWGE关于包虫病分型标准和国家卫计委(卫生部)关于包虫病诊断标准,对西藏自治区林芝市6县24条行政村藏族农牧人群进行便携式彩超检查肝包虫病灶,分析超声表现声像图特征结合血清学检查结果 筛查肝包虫病.结果共诊断为肝包虫病患者42例,病灶数共58个,根据符合声像图特异性表现之一项或多项标准,超声检出包虫阳性病灶数49个(84.5%),疑似包虫病灶(即超声检查发现肝内病灶但无声像图特征性表现,且无法作出其它明确疾病诊断者)中血清学阳性9例(15.5%).特征性的超声表现中以囊壁均匀性增厚、双层壁征及囊砂征出现频率为最多,分别为35、25和24例次,多子囊征、内层囊壁分离征、囊内实变呈脑回沟征、厚囊壁内混合回声以及厚囊壁的钙化出现频次分别为11、3、6、4和8例次;超声造影对于泡型肝包虫可明确诊断.结论 对于临床早期无明显症状的肝包虫病例,超声检查肝包虫病灶重点观测囊壁和声像图特征是诊断的关键,可以减少漏误诊、提高超声对于肝包虫病的诊断率.     

双硫仑/铜通过MAPK通路诱导凋亡逆转白血病细胞多柔比星耐药的研究

目的:探讨丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)通路诱导凋亡在双硫仑/铜逆转耐多柔比星的人急性白血病细胞株(HL60/ADM)耐药分子机制中的作用。方法:流式细胞仪检测加入MAPK通路抑制剂SP600125后多柔比星单药组、双硫仑/铜单药组及双硫仑/铜联合多柔比星组HL-60/ADM凋亡细胞比例的改变;倒置显微镜下观察上述各个处理组作用后HL60/ADM细胞24h后形态学变化;蛋白质印迹法检测上述各组作用HL60/ADM细胞后JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、c-Jun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)和Bcl-2蛋白表达变化。结果:SP600125将双硫仑/铜联合多柔比星组凋亡细胞比例从(73.24±10.58)%降至(40.70±6.03)%,差异有统计学意义,t=6.218,P=0.025。形态学观察显示,多柔比星和双硫仑/铜单药组HL60/ADM细胞凋亡特征不明显,双硫仑/铜联合多柔比星组出现明显的细胞凋亡现象,且SP600125能减轻双硫仑/铜联合多柔比星组细胞的凋亡程度。蛋白质印迹法显示,双硫仑/铜联合多柔比星处理HL60/ADM细胞后MAPK通路中磷酸化-JNK及其下游分子c-Jun和磷酸化c-Jun表达较其他组显著增加并能被SP600125显著抑制;此外,双硫仑/铜联合多柔比星还能下调抗凋亡Bcl-2蛋白的表达。结论:双硫仑/铜可通过MAPK通路诱导凋亡逆转HL60/ADM对多柔比星耐药。     

BAALC转录本1－6－8逆转录病毒表达载体的构建

目的 构建含BAALC（brain and acute leukemia, cytoplasmic）1-6-8转录本的逆转录病毒表达载体。方法 从KASUMI-1细胞株中提取mRNA,应用RT-PCR技术扩增BAALC1-6-8获得目的基因,选用pMD? 18-T Vector做TA克隆。分别双酶切TA克隆获得的阳性质粒和pcDNA?3.1/myc-His A质粒,琼脂糖电泳纯化回收前者的小片段和后者的大片段,应用T4连接酶连接后转化至E.coli DH5α中。PCR扩增BAALC-myc-His基因序列,双酶切PCR产物和pLXSN载体,T4连接酶连接后转化至E.coli DH5α中,挑选阳性克隆,PCR、双酶切及测序鉴定。结果 PCR分别扩增TA克隆产物和重组pcDNA?3.1/myc-His A-BAALC,在535bp处均可见一清晰的特异性扩增条带,显示TA克隆及重组真核表达载体成功;PCR扩增pLXSN-BAALC-His大小为664bp,双酶切及测序结果证实目的基因片段正确插入到逆转录病毒表达载体pLXSN中。结论 分离得到了BAALC 1-6-8转录本基因,并成功构建了pLXSN-BAALC-His表达载体。     

Disulfiram及联合Cu对急性淋巴细胞白血病Molt4细胞增殖、凋亡及MDR1基因表达的影响

目的为进一步了解Disulfiram（DS）及DS联合Cu（DS/Cu）对急性淋巴细胞白血病Molt4细胞增殖、凋亡及多药耐药1（MDR1）基因水平表达的影响。方法用MTT法检测不同浓度（0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000μmol/mL）DS和DS/Cu对Molt4细胞的增殖抑制作用;用Annexin-ⅴ-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度DS和DS/Cu作用Molt4细胞24h后凋亡细胞比例;实时荧光定量PCR检测不同浓度DS和DS/Cu对Molt4细胞MDR1基因表达水平的影响。结果不同浓度的DS对Molt4细胞有一定的抑制增殖作用,且呈剂量依赖性,IC50为（1.370±0.263）μmol/mL。DS/Cu联合后对Molt4细胞增殖抑制作用显著增强,IC50降为（0.560±0.443）μmol/mL,DS/Cu对Molt4细胞的抑制作用显著高于DS单药（P=0.005）。DS单药及DS/Cu对Molt4细胞均有诱导凋亡的作用,但DS/Cu对诱导Molt4细胞凋亡的比例显著高于DS单药（P=0.01）。DS单药对Molt4细胞MDR1基因表达水平无明显影响,而DS/Cu能显著降低Molt4细胞MDR1基因表达水平（P〈0.001）。结论 DS对Molt4细胞有一定的抑制增殖、诱导凋亡作用,但对Molt4细胞MDR1表达水平无明显影响。DS/Cu不仅对Molt4细胞抑制增殖、诱导凋亡作用显著增强,还可显著下调Molt4细胞MDR1基因表达水平。     

双硫仑联合Cu对淋巴瘤Raji细胞增殖与凋亡影响及其机制的探讨

目的:研究双硫仑(Disulfiram,DS)联合Cu离子对Burkitt’s淋巴瘤细胞株(Raji细胞)增殖和凋亡的影响及其与JNK和NF-κB通路的关系。方法:不同浓度DS和DS/CuMTT法检测对Raji细胞的增殖抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度DS和DS/Cu作用Raji细胞后凋亡细胞比例;蛋白质印迹法检测Cu、DS及DS/Cu处理细胞后p65、p-JNK及c-jun蛋白表达的变化。结果:DS和DS/Cu对Raji细胞均具有抑制增殖作用,作用72h两组IC50值分别为(0.793±0.08)和(0.085±0.015)μmol/mL,DS/Cu对Raji细胞增殖抑制作用显著强于DS单药,P=0.000。DS单药及DS/Cu对Raji细胞均有诱导凋亡作用,但DS/Cu诱导Raji细胞凋亡比例显著高于DS单药,P=0.001。蛋白质印迹法显示DS及DS/Cu作用Raji细胞后p-JNK及c-jun蛋白表达水平均显著增加、p65蛋白表达水平显著下调。结论:DS/Cu及DS对Raji细胞均有抑制增殖及诱导凋亡作用,其中DS/Cu的作用显著强于DS单药,其机制与同时抑制NF-κB和活化JNK通路有关。