对羟基桂皮醛诱导食管癌TE-13细胞分化及其作用机制

目的：探讨木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛（p-hydroxylcinnamaldehyde,CMSP）对食管癌细胞株TE-13的分化作用及其机制。方法：用流式细胞术检测质量浓度为10、20、40 μg/ml的 CMSP处理TE-13细胞对该细胞凋亡和细胞周期分布的影响,用吉姆萨染色、电镜观察TE-13细胞形态学改变,Real-time PCR和ELISA方法检测TE-13细胞中肿瘤相关抗原CEA和SCC的表达,用克隆集落形成实验、Transwell迁移实验检测不同质量浓度CMSP对TE-13细胞的增殖、迁移能力的影响,Western blotting检测CMSP（20 μg/ml）对TE-13细胞中MAPK通路中各蛋白水平的影响。结果： CMSP可抑制食管癌Kyse30、TE-13、Eca109和Kyse180细胞的增殖\[(1.6±0.2)×104 vs （3.8±0.3)×104、(1.7±0.3)×104 vs (4.5±0.4)×104、 (2.5±0.1)×104 vs (4.0±0.4)×104、(1.5±0.1)×104 vs (2.5±0.3)×104个细胞, 均P<0.01\],而对人食管上皮细胞无明显作用(P>005)。CMSP处理TE-13细胞后：(1) 随CMSP质量浓度（10 、20 、40 μg/ml）和处理时间的增加（24、48、72 h）,G0/G1期细胞数量均增加、S期细胞数量减少（P<0.01或 P<0.05）,但细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）;(2) 细胞出现典型分枝状突起,且随CMSP质量浓度增加更显著（P<0.05）;（3）CEA和SCC水平显著降低（P<0.01）;（4）抑制TE-13细胞的增殖和迁移能力,诱导细胞分化;（5）p-P38蛋白水平明显升高（P<0.01）,而p-ERK、p-SPKA/JNK蛋白水平明显降低（P<0.01）。结论： CMSP抑制食管癌TE-13细胞的增殖、诱导其分化,其作用机制可能与上调MAPK信号通路中p-P38和下调p-ERK、p-SPKA/JNK有关。     

CCL5在胃癌患者肿瘤组织和血清中的表达及临床意义

目的:检测胃癌患者组织及血清中的CCL5的表达并探讨血清中CCL5表达的临床意义。方法:选择临床病理资料齐全的胃癌蜡块标本48例,取癌组织和癌旁组织(对照组),采用SP免疫组化法检测CCL5在胃癌组织及癌旁组织中的表达。抽取新诊断胃癌患者50例(均未行手术及放化疗)及健康志愿者16例(对照组)的血清标本,采用ELISA检测CCL5在胃癌患者及健康志愿者血清中的表达,研究血清中CCL5的表达水平与胃癌的病理因素及生物学行为之间的关系。结果:CCL5在胃癌患者组织及血清中呈高表达,与对照组相比,明显升高,具有统计学差异(P0.001),胃癌患者血清中CCL5的表达水平与胃癌组织浸润深度、淋巴结转移情况、TNM分期情况及肿瘤分化程度均具有相关性(P0.001),与患者的性别及年龄无相关性。结论:CCL5可能成为胃癌患者肿瘤分期及疾病进展的重要分子标志。     

木鳖子对羟基桂皮醛对小鼠黑素移植瘤生长的抑制作用及机制研究

目的探讨木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛(p-hydroxycinnamaldehyde,PHD)对黑素瘤B16细胞体内生长的抑制作用。方法应用MTS法检测PHD对B16细胞增殖的影响,倒置相差显微镜下观察形态变化。构建黑素瘤B16细胞小鼠皮下移植瘤模型,分为2组:治疗组小鼠ip 2 mg/kg PHD,模型组注射相同体积的生理盐水。观察2组小鼠成瘤情况,并测量肿瘤体积和质量;免疫组织化学法检测肿瘤组织中酪氨酸酶(Tyr)、S-100B、MMP-9、p-P38和p-ERK蛋白的表达变化;苏木精-伊红染色法(HE)分析小鼠肝和肺组织的形态学变化。结果 PHD对黑素瘤B16细胞具有明显的生长抑制作用(P0.01)。20μmol/L PHD处理B16细胞48 h后,细胞数量减少,呈典型分化形态。PHD治疗组的肿瘤体积和质量均明显低于模型组(P0.01)。与模型组相比,治疗组小鼠肿瘤组织中Tyr和p-P38蛋白的表达水平升高,MMP-9、S-100B和p-ERK蛋白表达水平则明显降低。治疗组小鼠肝和肺无明显组织形态学改变,模型组小鼠肺部有肿瘤转移。结论 PHD对小鼠体内黑素移植瘤的生长具有显著抑制作用。     

木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛对食管癌移植瘤的抑制作用

目的：探讨木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛（p-hydroxylcinnamaldehyde,CMSP）对食管癌细胞增殖及在BALB/c裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法： 细胞计数法检测CMSP对食管癌细胞株Kyse 30和TE-13增殖的抑制作用,RT-PCR法检测食管癌细胞中CEA和SCC mRNA的表达情况,Western blotting法检测食管癌细胞中C-myc和N-myc蛋白的表达变化。构建裸鼠食管癌细胞移植瘤模型,分为对照组和CMSP处理组,实验结束后测量移植瘤大小及体积;免疫组织化学SP法观察移植瘤组织C-myc和N-myc蛋白的表达变化,H-E染色后光镜下观察两组裸鼠移植瘤组织和肝、脾组织的病理学变化。结果：CMSP对食管癌细胞Kyse 30和TE-13的增殖具有明显的抑制作用\[（1.7±0.3) vs (3.8±0.3),(1.6±0.2) vs (4.5±0.4),均P<001\]。经CMSP处理后：（1）Kyse 30和TE-13细胞中CEA和SCC mRNA表达降低（P<0.01)、C-myc和N-myc蛋白表达明显低于对照组（P<0.05或P<0.01）;（2）裸鼠移植瘤平均体积和质量明显降低（P<0.05或P<0.01）,移植瘤组织中C-myc和N-myc蛋白表达水平低于盐水对照组肿瘤组织。CMSP处理组和对照组中肝、脾组织并未发生任何病理改变。结论：木鳖子单体化合物CMSP体外抑制食管癌细胞增殖,体内抑制裸鼠食管癌移植瘤的生长。     

香加皮杠柳苷通过溶酶体途径诱导胃癌MGC-803细胞凋亡

目的 探讨香加皮杠柳苷（periplocin extracted from cortex periplocae, CPP）是否通过溶酶体途径诱导胃癌细胞凋亡。方法 200、100、50 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24和48 h后,MTS 法检测细胞的增殖情况,用TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测不同浓度香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24 h后Caspase-3和Caspase-9的表达情况,吖啶橙染色检测溶酶体释放情况,免疫荧光法检测组织蛋白酶B（Cathepsin B）的表达变化情况。结果 与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24、48 h后,均具有增殖抑制作用,24 h增殖率分别为 [(66.43±1.67)%、(55.39±3.63)%、(37.06±0.57)% vs. (100.14±8.49)%,P均<0.05],48 h增殖率分别为[(38.16±3.26)%、(32.00±1.83)%、(24.75±1.57)% vs. (100.33±8.98)%,P均<0.05]。与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24 h后,细胞凋亡率显著增加,凋亡率为[(28.56±6.96)%、(33.70±4.60)%、(60.42±4.48)% vs. (2.23±1.03)%,P均<0.05],Caspase-3的活性裂解片段和Caspase-9表达量升高,溶酶体膜的完整性被破坏,Cathepsin B由溶酶体释放到细胞质中。结论 香加皮杠柳苷可通过溶酶体途径诱导胃癌细胞凋亡。