LHRH-PE40识别结肠癌细胞膜表面蛋白的研究

目的探讨人结肠癌细胞系Lovo及人白血病细胞系Jurket细胞膜表面蛋白能否识别LHRH-PE40及是否存在竞争性抑制。方法将结肠癌细胞系Lovo及白血病细胞系Jurket制备成细胞膜,利用125I标记的LHRH-PE40与两种细胞膜进行放射性配基分析,与LHRH进行竞争结合分析。结果人结肠癌细胞系Lovo的结合竞争符合特异性配基-受体结合、竞争;而白血病细胞系Jurket未见配基-受体特异性结合。其中LHRH-PE40与Lovo细胞的亲和力:Kd=10·6±2·33nmol/L,容量Bmax=345±7·59pmol/mg。结论LHRH是结肠癌免疫治疗的有效靶点,LHRH-PE40对过度表达LHRH受体的结肠癌具有特异性杀伤作用,而对无LHRH表达的肿瘤无杀伤作用,对于药物的临床应用有着指导意义。     

冻干重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白与不同细胞受体结合竞争试验

目的为了验证重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(LHRH-PE40)对癌细胞的靶向性,对LHRH-PE40进行125I标记,并进行了与多种细胞受体结合试验和竞争试验。为该药物的导向治疗提供可靠的依据。方法利用体外细胞培养方法将人胃癌细胞系BGC-823,人结肠癌细胞系Lovo,人T细胞淋巴瘤Hut102,人白血病细胞系Jurket,狗肾细胞系DK 5种细胞系,分别大量培养至单层,收获细胞,破碎,制备细胞膜。同时制备鼠肺组织的细胞膜进行试验。利用125I标记的LHRH-PE40与不同细胞膜进行放射性配基结合分析,以及与LHRH竞争结合分析。确定这些细胞表面有无LHRH受体,并用Scatchard作图方法计算出其亲和常数及最大结合量。结果小鼠肺组织细胞膜、人T细胞淋巴瘤Hut102、人白血病细胞系Jurket、狗肾细胞系DK未见配基-受体特异性结合及竞争结果;而人胃癌细胞系BGC-823,人结肠癌细胞系Lovo与LHRH-PE40的结合竞争符合特异性配基-受体结合、竞争特性。其中LHRH-PE40与Lovo细胞的Kd=10.6±2.33 nmol/L,Bmax=345±7.59 pmol/mg;与BGC-823细胞的Kd=37.82±1.42nmol/L,Bmax=475±17.86 pmol/mg。结论受试的6种细胞膜蛋白中正常细胞(鼠肺、狗肾)和两种肿瘤细胞(Jurket、Hut102)表面无LHRH受体表达。而结肠癌和胃癌肿瘤细胞表面存在LHRH受体的表达。另外本试验还证实了重组毒素LHRH-PE40保留了天然LHRH与其受体结合的高亲和力。     

人白细胞介素2-Linker-PE38重组毒素的构建

目的　构建人白介素 2 linker PE38融合基因 ,为进一步表达具有特异性杀伤作用的融合蛋白奠定基础。方法　用PCR方法扩增绿脓杆菌外毒素 (PEA)衍生物PE38基因及柔性连接肽linker片段 ,并与人白介素 2 (Interleukin2 ,IL2 )基因连接插入质粒pET2 8a中。结果　构建的表达载体经核苷酸测序分析无突变发生。结论　成功地构建了表达质粒pIL2 linker Pe38。     

沈阳市飘尘污染与幼儿佝偻病患病率关系的初步调查

由于大气污染,沈阳市地面的太阳辐射损失比20年前增加3倍。紫外线是短波辐射,其损失量更大,这在佝偻病发病上很可能起到重要的作用,为此,于1983年在沈阳市两个地区进行了飘尘浓度与紫外线相对强度的测定,并进行了儿童佝偻病的临床、生化、X线的检查诊断,以初步探索三者之间的关系,为进一步深入研究提供线索。     

以工业企业设计卫生标准为依据探讨居住区大气质量指数的分级

根据居住区大气卫生标准与人体效应关系,用数学模式、计算机进行大气质量指数分级,以背景、标准中的日平均、日平均的1.5倍,一次最高容许、明显危害浓度为准,将质量指数分为清洁、安全、警戒、危险、危害五级。对实地数据处理可评价当地大气质量。     

军用动物福利保障措施探讨

军用动物是一个特殊的动物群体,是世界各国军事装备的重要组成部分.本文分析和借鉴了《美军军犬计划》等文献中对动物福利保障的措施,依据军用动物在实验、训练、执行演习和作战任务的特殊性,探讨了保障其福利的办法.     

抗PEA受体结合区单克隆抗体的制备及鉴定

目的探讨绿脓杆菌外毒素A(PEA)中和性单克隆抗体在预防和治疗绿脓杆菌感染中的免疫保护作用.方法以重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法筛选细胞培养上清,采用有限稀释法对阳性孔进行克隆,3次克隆后获得4株能稳定分泌抗PEA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1C4,1D4,2E12和3C6.结果细胞培养上清ELISA效价为4000～8000,腹水ELISA效价可达25600～51200,其中3C6抗体在细胞上的中和试验显示具有较高的中和效价,其亲和常数为8.93×108.结论获得的单克隆抗体可在抗烧伤绿脓杆菌感染中发挥重要作用.     

重组人乙酰胆碱酯酶在大肠杆菌中的表达

根据基因数据库中人乙酰胆碱酯酶编码序列设计合成引物，以18周龄引产胎儿大脑组织中提取的总RNA作为模板，利用RT-PCR技术，扩增出AchE cDNA片段，该片段全长1877bp，将所得片段与pGEM-T载体连接，转化大肠杆菌JM109中，经PvuⅡ酶切鉴定，筛选阳性克隆株，其质粒测序结果与基因数据库中的人乙酰胆碱酯酶cDNA序列一致。利用Nco Ⅰ和EcoR Ⅰ切下1644bp的基因片段，将其插入原核表达载体pET-28b( )的T7噬菌体启动子下游构建原核表达载体pET-28b( )-AchE，并在大肠杆菌BL21中获得表达，该蛋白分子量为59KD，以包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的30％。     

重组志贺毒素的表达及活性的初步测定

目的:表达Stx2a'-LHRH重组毒素, 探讨其特异杀伤癌细胞的作用。方法:用PCR技术扩增带有NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点的Stx2a'-LHRHDNA基因, 克隆至pET-28a(+)质粒中, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 挑取单菌落培养, 提取质粒、酶切, IPTG诱导、表达, 光镜下观察Stx2a'-LHRH重组毒素对Hep-2细胞的细胞毒作用。结果:经鉴定、测序, 获得重组质粒pET-SL, SDS-PAGE及凝胶薄层扫描分析, 在分子量约28?000处有明显的表达带, Stx2a'-LHRH重组毒素对Hep-2细胞有明显杀伤作用。结论:利用分子生物学技术成功构建了带有Stx2a'-LHRH重组毒素基因的质粒, 使其表达Stx2a'-LHRH重组毒素, 而且对Hep-2细胞有明显细胞毒作用, 为进一步研究导向药物奠定了基础。     

Stx2A-LHRH重组毒素对HeLa细胞毒性作用的探讨

Stx2A-LHRH重组毒素是本实验室构建、表达及纯化的，用XTT法检测、分析Stx2A-LHRH重组毒素对HeLa细胞的杀伤作用，为制备出治疗宫颈癌新的导向生物制剂打下基础。