蛋白激酶C和JNK在溶血磷脂酸诱导人肺成纤维细胞MCP-1表达中的作用

目的：研究蛋白激酶C（PKC）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）在溶血磷脂酸（LPA）诱导人肺成纤维细胞（HLF-1）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达中的作用。方法：培养HLF-1细胞,以不同浓度（0、1、3和10 μmol/L）的LPA处理细胞不同时间（0.5、6、12和24 h）后,ELISA检测细胞培养基上清液中MCP-1的蛋白表达,荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA的表达水平。用不同浓度的PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I（0、0.1、1和10 μmol/L）或JNK抑制剂SP600125（0、0.1、1和10 μmol/L）预孵育细胞30 min后,用LPA（10 μmol/L）刺激2或6 h后,ELISA方法检测细胞培养基上清液中MCP-1的蛋白表达,荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA的表达水平。用PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I（1 μmol/L）预孵育30 min,以浓度为10 μmol/L的LPA处理细胞不同时间（0、5、30和60 min）后,Western blot检测c-Jun蛋白磷酸化水平。结果：LPA可诱导HLF-1细胞MCP-1蛋白释放,并呈剂量效应和时间效应关系。LPA的浓度为10 μmol/L时,HLF-1细胞释放MCP-1蛋白的量是对照组的2.4倍（P < 0.05）;细胞在LPA处理24 h后,MCP-1蛋白的释放量较对照组增加约1倍（P < 0.05）。LPA可诱导HLF-1细胞MCP-1 mRNA的表达并呈时间效应,LPA处理2 h后,MCP-1 mRNA表达水平是对照组的5.3倍（P < 0.05）。PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I和JNK抑制剂SP600125均可显著抑制LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1 mRNA表达及MCP-1蛋白释放。Bisindolylmaleimide I的浓度为1 μmol/L时可阻断LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1蛋白释放量的60%（P < 0.05）,浓度为3 μmol/L时对MCP-1 mRNA表达有明显抑制效果,抑制率达40%（P < 0.05）;而SP600125的浓度为1 μmol/L时可阻断LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1蛋白释放量的78%（P < 0.05）,对MCP-1 mRNA表达有明显抑制效果,抑制率达87%（P < 0.05）。10 μmol/L的LPA可显著诱导HLF-1细胞c-Jun磷酸化,同时PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I（1 μmol/L）可显著抑制LPA（10 μmol/L）诱导的HLF-1细胞c-Jun磷酸化。结论：PKC与JNK通路均参与LPA诱导HLF-1细胞MCP-1的表达。