应用功能分类基因芯片筛选卵巢癌淋巴结定向高转移细胞系中差异性表达基因

目的:在裸鼠体内建立以人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞系SKOV3具有淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞系,应用基因芯片技术比较这3种具有不同淋巴结定向转移能力的细胞亚系中基因表达谱的差异,寻找卵巢癌侵袭转移相关基因.方法:采用Trizol一步法抽提SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3 3种细胞总RNA;取等量RNA逆转录合成cDNA用Ampolabeling-LPR(linear polymerase reaction,线性聚合酶反应)法标记的cDNA链做探针,混合后与功能分类基因芯片[Oligo Tumor Metastasis Microarray Catalog No.OHS-028(人)]杂交,计算机分析后比较3种细胞中差异性表达基因,并应用RT-PCR技术对其中3个表达差异明显的基因进行验证.结果:共筛选出表达差异性基因60个,其中表达上调基因47个(ratio＞3),有21个基因在SKOV3-pm2、SKOV3-pin3中共同表达上调;表达下调基因13个(ratio＜0.5),有1个基因在SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞中共同表达下调.结论:基因表达芯片检测与肿瘤淋巴体外转移模型相结合,为肿瘤转移研究提供了新方法、新思路.     

不同治疗方法对肝癌合并脾功能亢进的疗效分析

目的探讨不同方法治疗肝癌合并脾功能亢进患者的临床疗效和意义。方法回顾性分析2007～2010年收治的63例肝癌合并脾功能亢进患者的临床资料,其中,26例行单纯肝癌切除术（Ⅰ组）,18例行肝切除同时联合脾切除或脾动脉结扎（Ⅱ组）,19例行术前部分性脾栓塞（partial splenic embolization,PSE）联合肝切除（Ⅲ组）。观察3组治疗前后外周血细胞变化情况,分析围术期出血、输血和并发症等情况,比较各组1、3年总生存率。结果联合手术组术后外周血白细胞、血小板均较单纯手术组明显改善,与术前PSE组无明显差异。术前PSE组患者出血量和输血量均较Ⅱ组和Ⅰ组明显减少（P〈0.05）。联合手术组和术前PSE组的术后并发症明显低于单纯手术组患者,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组患者1、3年总生存率分别为：68.5%、38.1%,82.8%、52.6%和85.5%、56.3%,Ⅰ组患者显著低于Ⅱ组和Ⅲ组（P〈0.05）。结论肝脾联合手术和术前PSE是治疗肝癌合并脾功能亢进安全、有效的方法。术前PSE治疗更适合严重的门脉高压、巨脾、老龄和体质差患者。     

同源盒基因CDX2mRNA在胃癌中的定量表达及临床意义

[摘要] 目的 探讨同源盒基因CDX2 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测CDX2 mRNA在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系临床病理特征进行分析。 结果 胃癌组中CDX2 mRNA的阳性表达率为37.9%（22/58）,癌旁组为63.8%（37/58）,正常对照组不表达,组间比较差异有显著性（P<0.05）;CDX2 mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率差异有显著性（P<0.05）。结论 CDX2 mRNA在癌旁和胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间有密切的联系,提示CDX2 mRNA的高表达可能与胃癌的发生有关。 [关键词] CDX2 实时荧光定量PCR 胃癌     

小肝癌的临床诊断与个体化治疗

目的探讨小肝癌的临床诊断与个体化治疗方案。方法回顾性分析2007年1月至2009年1月在东莞市人民医院治疗的53例小肝癌患者的临床资料,总结小肝癌患者个体化诊治的经验。结果53例中手术切除35例,其中肿瘤位置较深而术中无法扪及18例,15例联合B超定位,3例术中体内标志联合CT／MRI定位。2例手术切除者因上消化道大出血及肝功能衰竭于术后2个月内死亡。微创治疗18例,其中射频消融术（RFA）13例,无水酒精注射术（PEI）3例,肝动脉化疗栓塞术（TA—CE）2例。手术切除组和微创治疗组3年生存率分别为75．2％和71．3％;1、2、3年复发率分别为13．3％、24．5％、37．1％和17．4％、31．8％、41．6％,差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论小肝癌的早期诊断应注意乙肝病史,同时结合多种检查及密切随访综合判断。术中B超和体内标志联合CT／MRI能准确定位微小病灶。小肝癌的治疗应制定个体化的治疗方案。     

小分子干扰RNA对胃癌MGC803细胞E2F-1表达及其生物学行为的影响

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对胃癌MGC803细胞E2F-1基因表达及其生物学行为的影响.方法 将实验组(E2F-1-siRNA)和阴性对照组(negative control-siRNA)转染进MGC803细胞,48 h后采用实时定量聚合酶链反应(PCR)及Western blot技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测MGC803细胞增殖的变化,流式细胞仪检测MGC803细胞周期变化.结果 E2F-1-siRNA有效抑制胃癌细胞E2F-1 mRNA和蛋白的表达并且影响MGC803细胞的增殖,与阴性对照组及未转染组细胞比较mRNA降低了84.8%和85.3%(F=14.35,P＜0.05),蛋白降低T77.2%和79.6%,MGC803细胞增殖分别抑制了69.0%和81.6%,差异有统计学意义(F=170.18,P＜0.05);同时E2F-1-siRNA促使更多MGC803细胞DNA含量聚集于G2/M期附近,G2/M期DNA含量比例为(54.98±3.46)%,与阴性对照组(44.70±3.82)%和未转染组(31.47±2.12)%比较,差异有统计学意义(F=88.90,P＜0.05).结论 E2F-1-siRNA可以有效抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1 mRNA及蛋白的表达,使G1 期细胞的DNA含量下调,细胞分裂停滞在G2/M期附近,抑制胃癌细胞的增殖.     

转录因子E2F-1 mRNA在胃癌中的定量表达及临床意义

目的:探讨转录因子E2F-1 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测E2F-1 mRNA在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系.临床病理特征进行分析.结果:胃癌组中E2F-1 mRNA的阳性表达率为72.4%(42/58),癌旁组为50.0%(29/58),正常对照组为27.9%(12/43),组间比较差异有统计学意义(P<0.05);E2F-1 mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无统计学意义(P>0.05).结论:E2F-1 mRNA在胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间没有必然联系,提示E2F-1 tuRNA的高表达可能与胃癌的发生有关.     

Cdx2对胃癌细胞生物学性状的影响

目的 观察Cdx2对人胃癌细胞MGC-803生物学性状的影响.方法 利用脂质体将pCMV-Cdx2-HA和pCMV-HA质粒分别转染MGC-803细胞,应用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测MGC-803细胞中Cdx2基因的表达;应用体外实验及流式细胞仪分别检测Cdx2对MGC-803的侵袭力、黏附力、增殖力、迁移力和凋亡率的影响.结果 转染pCMV-Cdx2-HA质粒的MGC-803细胞中可以检测到高Cdx2的表达,其侵袭能力[穿膜细胞数:(64.33±11.94)个/视野下降到(23.93±8.95)个/视野]、黏附能力[(1.172±0.042)]、增殖力[(26.13±1.60)%]和迁移能力[(42.87±2.19)%]较对照组明显降低(P＜0.05),而且凋亡率升高,48 h和72 h的凋亡率分别为(11.40±0.36)%、(9.72±0.50)%(P＜0.05).结论 Cdx2高表达对MGC-803具有抑制其侵袭转移的作用,并促进肿瘤细胞的凋亡.     

转录因子E2F-1过表达抑制胃癌细胞MGC-803的增殖

目的 了解E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖、生长和细胞周期的影响。方法 PCR扩增E2F-1基因片段;然后经限制性内切酶 EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选。用脂质体Lipofectamine2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株。RT-PCR和Western blotting技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况。对稳定转染E2F-1的胃癌MGC-803/E2F-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/EV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞进行MTT法检测,绘制生长曲线和计算细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞周期分布。结果 RT-PCR和Western blotting 实验证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1。MTT法检测发现,与MGC-803/EV细胞组和MGC-803细胞组相比,胃癌MGC-803/E2F-1细胞的生长受到明显抑制,增殖率下降(26.61±5.19)% vs （93.4±10.29）%、（100±0.00）%,均P <0.01);细胞周期分析显示MGC-803/E2F-1组的细胞在G0/G1期所占比例为70.63%,高于MGC-803/EV组（60.03%,P<0.01）和MGC-803细胞组（60.43%,P<0.01）;MGC-803/E2F-1组的细胞在S期所占比例为(11.27%),明显低于MGC-803/EV组（28.70%,P<0.01）和MGC-803细胞组（29.70,P<0.01）。结论 E2F-1基因过表达抑制胃癌细胞的增殖和生长,细胞周期停滞在G0/G1期。     

转录因子E2F-1在胃癌中的表达及临床意义

目的 探讨转录因子E2F-1在胃癌组织中的表达及临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和免疫组化检测E2F-1在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系临床病理特征进行分析.结果 胃癌组中E2F-1 mRNA的阳性表达率为72.4%(42/58),癌旁组为50.0%(29/58),正常对照组为27.9%(12/43),组间比较差异有显著性(P<0.05);E2F-1 mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无显著性(P>0.05).胃癌组中E2F-1 蛋白的阳性表达率为65.5%(38/58),癌旁组为43.1%(25/58),正常对照组为23.3%(10/43),组间比较差异有显著性(P<0.05);E2F-1 蛋白在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无显著性(P>0.05).结论 E2F-1 mRNA和E2F-1蛋白均在胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间没有必然联系,提示E2F-1的高表达可能与胃癌的发生有关.     

转录因子E2F-1 siRNA表达质粒的构建及对胃癌MGC803细胞的沉默效应

目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响.方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接人经BamH I和Hind Ⅲ双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo表达质粒,并做酶切及测序鉴定.用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-I mRNA及蛋白表达.结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-l siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86.4%、86.1%和81,5%、79.6%.结论:pSilencer4.1一E2F-l重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础.