二甲双胍逆转人卵巢癌细胞株对顺铂耐药的实验研究

目的 探讨二甲双胍对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3／DDP的耐药逆转作用及机制。方法 将人卵巢癌细胞株SKOV3细胞设为亲本组,耐顺铂细胞株SKOV3／DDP细胞分为空白对照组、顺铂组、二甲双胍组和联合用药组（顺铂+二甲双胍组）;采用CCK-8法检测不同浓度二甲双胍对SKOV3／DDP细胞的作用,RT-PCR和Western blotting检测各组细胞中内质网应激相关蛋白的表达。结果 不同浓度二甲双胍作用24h后,对SKOV3细胞和SKOV3／DDP细胞均有抑制作用,且呈浓度依赖性（P＜0.05）;当二甲双胍＞5 mmol／L时,其对SKOV3／DDP细胞的增殖抑制率高于SKOV3细胞（P＜0.05）。顺铂对SKOV3细胞和SKOV3／DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为15.25 μg／ml和118.68 μg／ml,SKOV3／DDP的耐药倍数为7.78。联合用药组SKOV3／DDP细胞IC50为 73.45 μg／ml,耐药倍数为4.81。二甲双胍对SKOV3／DDP细胞对顺铂耐药性的逆转倍数为1.62。亲本组中GRP78 mRNA和蛋白的相对表达水平分别为0.38±0.02和0.24±0.04;顺铂组、二甲双胍组和联合用药组的GRP78 mRNA的相对表达水平分别为0.93±0.02、0.68±0.02、0.49±0.07,与空白对照组的0.83±0.04比较,联合用药组明显降低,其次为二甲双胍组,顺铂组升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）;GRP78蛋白在各组中表达与其mRNA表达趋势一致,差异均有统计学意义（P＜0.05）。顺铂组、二甲双胍组、联合用药组CHOP蛋白的表达量分别为0.42±0.03、0.69±0.03、0.84±0.01,均高于空白对照组的0.39±0.05,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 二甲双胍对人卵巢癌顺铂耐药细胞的耐药性有调节作用,其可能作用机制为通过降低GRP78表达,提高CHOP蛋白表达的内质网应激途径促进细胞凋亡来降低耐药细胞对顺铂的耐药性。     

重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6（E）对耐顺铂卵巢癌细胞增殖与侵袭转移的影响

目的 观察重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6（E）对卵巢癌顺铂（DDP）耐药细胞株SKOV3／DDP增殖及侵袭转移的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测SKOV3／DDP细胞经融合蛋白处理后的增殖抑制率及采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）后融合蛋白对DDP敏感性的影响,单丹磺酰尸胺染色法检测融合蛋白诱导的自噬情况,QPCR和Western blotting检测SKOV3／DDP细胞Beclin 1的表达情况,Transwell体外迁移和重组基底侵袭实验研究融合蛋白对SKOV3／DDP细胞的侵袭和迁移能力。结果 DDP对SKOV3／DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）为（37.62±2.63）μg／ml,10、20、40 μg／ml 融合蛋白作用后,DDP的IC50分别降低至（17.07±0.88）、（11.08±0.57）和（1.96±0.31）μg／ml（P＜0.001）;以3-MA抑制细胞自噬,可阻断融合蛋白诱导SKOV3／DDP细胞对DDP的敏感性;SKOV3／DDP自噬情况的比较：融合蛋白组、融合蛋白+3 MA组的荧光强度分别为824±107、459±128,均高于对照组的306±143,差异有统计学意义（P＜0.05）。Beclin 1 mRNA和蛋白的表达水平随融合蛋白的浓度增加（10、20、40 μg/ml）,其表达水平升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。空白对照组、DDP组、融合蛋白组和DDP+融合蛋白组中SKOV3／DDP细胞的Beclin 1蛋白表达亦不同,差异有统计学意义（P＜0.05）,其中DDP+融合蛋白组蛋白表达量最高,为0876±0023,其次为融合蛋白组的0.564±0.021。融合蛋白能明显抑制SKOV3／DDP细胞的侵袭和迁移能力,DDP+融合蛋白组和融合蛋白组分别与空白对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,DDP组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 融合蛋白可抑制SKOV3／DDP细胞的增殖、侵袭和转移,可能与诱导自噬及上调Beclin 1的表达有关。