过表达PRRX1 通过p53 介导的线粒体凋亡途径诱导肝癌SMMC7721 细胞凋亡

[摘要] 目的：探讨配对相关同源框1 蛋白（PRRX1）过表达对肝癌SMMC7721 细胞凋亡的影响及其分子机制。方法：分别用慢病毒介导PRRX1 过表达载体（pGMLV-PRRX1）、空载质粒（Vector）感染人肝癌SMMC7721 细胞,用qPCR和WB实验检测慢病毒感染后细胞中PRRX1 mRNA和蛋白的表达变化,用CCK-8 法、Annexin-V FITC/PI 染色流式细胞术分别检测PRRX1 过表达对SMMC7721 细胞增殖、凋亡的影响,用线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10 染色法）检测细胞线粒体膜电位变化,用caspase 活性检测试剂盒（分光光度法）测定细胞中caspase-8 和caspase-9 酶活性,用WB实验检测细胞中p53、Bcl-2、Bax、Fas、Cleaved-caspase-3以及线粒体和细胞质中细胞色素C（Cty C）蛋白的表达。结果：成功构建PRRX1 过表达的SMMC7721 细胞株,感染细胞中PRRX1 mRNA和蛋白的表达水平显著升高（均P<0.01）。与对照组和空载组比较,PRRX1 过表达组SMMC7721 细胞的增殖能力显著下降、细胞凋亡率显著增高、Cleaved-caspase-3 剪切水平显著升高、线粒体膜电位显著下降、线粒体中Cty C蛋白表达下调、胞质中Cty C蛋白表达上调以及caspase-9 酶活性升高（P<0.05 或P<0.01）,同时p53 和Bax 蛋白表达增加而Bcl-2 蛋白表达降低（均P<0.05）,但Fas 蛋白表达及caspase-8 酶活性无显著变化（均P>0.05）。结论: PRRX1 过表达可诱导肝癌SMMC7721 细胞凋亡,其机制可能与p53介导的线粒体凋亡途径被激活有关。     

开腹胆道旁路手术与开腹胆管切除术治疗胆管癌的疗效对比分析

目的对比分析开腹胆道旁路手术与开腹胆管切除术治疗胆管癌患者的临床疗效。方法随机从我院2014年4月～2018年8月期间收治的胆管癌患者中抽取60例,用随机数字法分为对照组和观察组各30例。对照组接受传统开腹胆管切除术治疗,观察组接受开腹胆道旁路手术治疗,观察比较治疗效果,如并发症、胆功能改善状况、手术指标等。结果观察组并发症总发生率为6.67%,低于对照组的43.33%,差异有统计学意义(P0.05);观察组手术时间、出血量、术后下床活动时间、肛门排气时间、住院时间均少于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);治疗前,两者胆功能指标比较差异无统计学意义(P0.05),治疗后,观察组胆功能指标低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论相较于开腹胆管切除术,采用开腹胆道旁路手术治疗胆管癌可显著改善胆管癌患者胆功能,且并发症少、术后恢复速度快、创伤性小,值得推广。     

医院中药房成药定位标签的设计与评价

目的:改变传统中成药定位标签的原始设计,降低药品调剂差错,提高调剂效率,同时达到整齐、美观,为中药房成药定位标签的设计提供参考。方法:通过对传统标签进一步完善,在传统标签只标注通用名或商品名和规格基础上,增加了药品"货位号""警示标识""备注"等信息,且根据不同的警示类型采用不同的背景颜色,并利用SPSS.25.0软件对新型药品标签在减少调剂差错率方面进行统计学分析。结果:新型药品定位标签能明显降低药品调剂差错率(P<0.05)。结论:新型药品定位标签对降低调剂差错和提高工作效率,保证药品的调剂质量有较大促进作用。     

大腿软组织巨神经纤维瘤伴巨大血肿1例

患者男,35岁,因“1 d前突发右大腿疼痛”,以“右大腿血管瘤破裂并巨大血肿”入院。查体：心率114次/min,血压96/62 mmHg,右大腿见40 cm的质硬肿物,皮肤见瘀斑;全身皮肤多发结节及牛奶斑（图1）。X线检查示右大腿中远端巨大软组织密度灶,边界不清。CT检查示右大腿前部混杂密度灶,考虑肿瘤伴血肿;右腰大肌...     

CTLA4-Ig基因修饰骨髓间充质干细胞抑制大鼠肝移植排斥反应

目的  探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)基因转染骨髓间充质干细胞(MSC)在抑制大鼠原位肝移植排斥反应的作用及机制。方法  采用重组腺病毒(Ad)5-CTLA4-Ig转染MSC。转染72 h后,提取细胞总蛋白,采用蛋白质印迹法检测转染后MSC中CTLA4-Ig的蛋白表达。采用细胞计数试剂盒(CCK)-8方法检测未转染和转染后的MSC对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用。以雄性Lewis大鼠为供体(40只);以雄性Brown Norway(BN)大鼠为受体(40只)。采用改良的Kamada两袖套法进行原位肝移植,建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型。40只受体大鼠随机分为4组,每组10只。其中对照组(A组),于肝移植时门静脉输注生理盐水;MSC治疗组(B组),于肝移植时门静脉输注MSC;转基因MSC治疗组(C组),于肝移植时门静脉输注转基因MSC;免疫抑制剂治疗组(D组),于肝移植时门静脉输注生理盐水,术后即给予环孢素(CsA)1.5 mg/(kg·d)肌内注射,连续8 d。每组大鼠取5只观察生存情况。每组其余5只于术后第9日处死,检测外周血细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-4、干扰素(IFN)-γ水平,光学显微镜下观察肝组织病理学变化和排斥反应程度。结果  重组Ad5-CTLA4-Ig转染MSC 72 h后, 蛋白质印迹法可检测到转染后的MSC中有CTLA4-Ig的蛋白表达。当未转染的MSC:外周血单核细胞比例为1:10、1:20时,MSC抑制淋巴细胞增殖的作用分别为85.60%、76.69%。重组Ad5-CTLA4-Ig转染MSC 72 h后,在相同的数量比下,其抑制淋巴细胞增殖的作用分别为90.50%、84.20%;与未转染的MSC比较,转染后抑制淋巴细胞增殖的作用增强(P<0.05)。A、B、C、D组大鼠肝移植术后存活时间分别为(13±3),(41±6),(90±15),(102±18)d。A、B、C组的大鼠术后存活时间比较差异有统计学意义(P<0.05),C组和D组的大鼠术后存活时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,B组和C组的IL-4水平明显升高;与B组比较,C组的IL-4水平明显升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);C组和D组的IL-4水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,B组和C组的IL-2、IFN-γ水平明显降低,C组的IL-2、IFN-γ水平亦低于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),C组和D组的IL-2、IFN-γ水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠肝组织病理检查结果显示,A组移植肝发生重度排斥反应,B组移植肝亦发生排斥反应,但与A组比较程度较轻。C组与D组移植肝有轻度排斥反应。结论  重组Ad-CTLA4-Ig转染MSC可抑制肝移植排斥反应,其效果优于MSC单独应用。     

MiR-155在大鼠肝移植术后排斥反应中作用机制的研究

目的  探讨微小核糖核酸（miRNA,miR）-155在大鼠肝移植术后排斥反应中的作用机制。方法  将大鼠分为异系移植模型组（排斥组,n=10）,供体为雄性Lewis大鼠,受体为雄性BN大鼠;同系移植模型组（对照组,n=10）,供、受体均为雄性Lewis大鼠;两组均按照“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型。术后第7日处死大鼠取血标本和肝组织。检测肝功能指标丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TB）以及细胞因子白细胞介素（IL）-2、IL-4、干扰素（IFN）-γ的水平;光学显微镜下观察肝组织的病理变化情况。对两组大鼠肝组织样本每组选取3例进行高通量测序,检测排斥反应相关miRNA,进行生物信息学分析,预测并分析其相关的信号通路以及基因。结果  肝功能检测显示排斥组大鼠血清中ALT、TB水平均高于对照组,差异均有统计学意义（均为 P < 0.01）。外周血细胞因子检测显示,与对照组比较,排斥组的IL-2和IFN-γ水平升高（均为 P < 0.01）,IL-4水平下降（ P < 0.01）。病理检查结果提示,与对照组比较,排斥组发生了明显的排斥反应。高通量检测结果示排斥组miR-155表达上调明显,为对照组5.89倍。生物信息学分析提示,miR-155的上调表达与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及T细胞受体信号通路有关,可能参与调节的基因有酵母自噬基因（ATG1）及其同源基因ULK2、胰岛素样生长因子-1（Igf-1）以及G蛋白偶联受体的调节基因（Arrb1）等。结论  miR-155可能促进了大鼠肝移植术后排斥反应的发生发展,涉及此过程的信号通路可能有mTOR、MAPK信号通路及T细胞受体信号途径,ATG1、ULK2、Igf-1以及Arrb1等基因可能参与了此过程。     

过表达配对相关同源框1( PRRX1) 通过调控Wnt / β-catenin 通路抑制肝癌细胞体内致瘤性

目的:研究慢病毒介导的配对相关同源框1(PRRX1)过表达对肝癌细胞体内致瘤性的影响及相关机制。方法:构建PRRX1过表达的慢病毒载体pLV-PRRX1-IRES2-EGFP,转染HEK293T细胞,获得慢病毒颗粒后,感染肝癌细胞株SMMC-7721,采用Western blot检测感染后细胞株中PRRX1蛋白表达。皮下注射SMMC-7721细胞(对照组、空载体组、PRRX1过表达组及PRRX1过表达+Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV939干预组)构建裸鼠肝癌移植瘤模型,其中干预组使用XAV939处理,观察处理后移植瘤体积大小并绘制肿瘤生长曲线;采用HE染色观察各组移植瘤组织病变情况;采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测移植瘤中细胞凋亡情况;采用免疫组化检测移植瘤中细胞增殖相关抗原Ki-67的表达;采用Western blot检测移植瘤中PRRX1以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、c-Myc的表达。结果:成功构建PRRX1过表达的慢病毒载体并成功感染肝癌细胞株SMMC-7721,感染后细胞中PRRX1蛋白水平明显升高;与空载体组比较,PRRX1过表达组裸鼠移植瘤生长缓慢,组织坏死加重,细胞凋亡及PRRX1蛋白表达增加,而Ki-67、β-catenin及c-Myc蛋白表达均受到抑制;与PRRX1过表达组比较,XAV939干预进一步促进PRRX1过表达对裸鼠移植瘤的作用效果,但不改变PRRX1的表达。结论:过表达PRRX1能显著降低肝癌细胞体内致瘤能力,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。