人胰液蛋白2D图谱的建立

目的建立人胰液蛋白表达谱。方法采用丙酮沉淀法处理来自于四个非胰腺癌患者的胰液标本，利用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF-MS/MS）技术对胰液蛋白进行分离和鉴定。结果建立了高分辨率的人胰液蛋白表达谱，鉴定了91个独立的胰液蛋白，并对91个蛋白进行了功能注释分析。结论胰液蛋白表达谱为深入理解胰腺疾病的病理生理机制及筛选和发掘胰腺癌潜在生物标志物提供了理论基础。     

胰腺癌胰液蛋白质组学分析

目的:利用比较蛋白质组学方法鏊定胰腺癌早期诊断的蛋白标志.方法:采用双向电泳(2-DE)分离比较9个胰腺导管腺癌患者和9个非胰腺癌患者的胰液蛋白质表达谱,用肤质量指纹图谱(PMF)为基础的基质辅助激光解析离子化飞行时间串联质谱(MALDF-TO-F-MS/MS)对差异蛋白进行鉴定.采用蛋白质印迹方法进一步验证蛋白质MMP-9和DJ-1在胰液中的表迭.结果:2-DE显示共24个蛋白质点出现>2.0倍的表达差异,上调14个,下调10个.蛋白质印迹检测显示在胰腺癌胰液中高表达MMP-9和DJ-1蛋白.结论:MMP-9和DJ-1可能成为通过内镜下逆行胰胆管造影术(ERCP)筛查胰腺癌高危患者及早期诊断胰腺癌的潜在的胰液肿瘤标志.     

RNA干扰TBX4基因对肺癌H460细胞增殖迁移及侵袭能力影响的研究

目的:探讨TBX4基因表达对肺癌H460细胞增殖和侵袭转移能力等生物学行为的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:采用RNA干扰的方法降低肺癌H460细胞TBX4的基因表达,采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力的变化;蛋白质印迹法检查干扰前后TBX4及细胞增殖和转移相关基因CDKN2A、MTA2和MTSS1的表达。结果:RNA干扰TBX4后H460细胞增殖活性显著降低;RNA干扰TBX4组迁移和侵袭细胞数较对照组减少,但差异无统计学意义;TBX4表达下调后抑癌基因CDKN2A表达上调,但转移相关基因MTA2和MTSS1表达无明显变化。结论:TBX4对肿瘤细胞的恶性生物学行为可能具有促进作用,其机制有待进一步研究。     

双向凝胶电泳技术在胰腺癌蛋白质组学研究中的应用及条件优化

目的将双向凝胶电泳技术用于胰腺癌蛋白质组学研究并对其条件进行优化。方法对胰腺癌组织、癌旁组织、胰液等标本在组织研磨、裂解、蛋白抽提及双向凝胶电泳等各个环节进行调整和优化。结果液氮研磨法可得到更多的蛋白质点；超声方法去除组织中核酸效果较好；二硫苏糖醇（DTT）平衡时间12—15min，碘乙酰胺（IAA）平衡时间应等同或略长于DTT平衡时间时可得到高质量图谱；丙酮沉淀法可获得较多的胰液生物标志物蛋白点；将2—3根长度〈13cm的IPG胶条在1块凝胶上进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）的方法（Msoc）使双向电泳的重复性和通量显著提高。结论本研究成功建立了双向凝胶电泳技术平台，所获得的电泳图谱分辨率高、重复性好，能够较好地用于胰腺癌蛋白质组学研究。